페니실린 su-N-탈메틸효소(ERND)활성 측정 시약함 설명서

미량법 100T/48S

정식으로 측정하기 전에 반드시 취해야 한다 2-3 예상 차이가 비교적 큰 견본을 예측하여 결정하다.측정 의미:

세포색소 P450 효소는 주로 간에 존재하는 효소계로서 외원물질대사중, 특히 약물과 독물의 대사에서중요한 역할을 하다.ERND 에서P450 효소계에서는CYP2B는 아형은 약물 대사의 메틸화 제거와 밀접한 관련이 있다.CYP2B 보유바탕물 을 촉매 하여 비활성 으로 배설하기 쉬운 대사 산물 을 형성하여 해독 작용 을 하며, 일부 약물 을 투여 할 수도 있다CYP2B 대사 활성화.

측정 원리:

ERND는촉매 페니실린 수 포름알데히드 방출, 통과Nash 비색으로 포름알데히드 함량을 측정하면 바로 계산할 수 있다 ERND는活性。

붉은곰팡이 su-N-탈메틸효소 활성 측정 시약함 P450 시리즈

구성:

시약 1: 가루약 x 1 병, 4℃ 보존.사용하기 전에 추가하다100ml 증류수 용해.

시약 3: 가루약×1관, 4℃ 보존.사용하기 전에 추가하다증류수 1ml로 충분히 용해됩니다.시약 4: 가루약×1 병, 4℃ 보존.사용하기 전에 추가하다0.5ml의 증류수, 충분히 용해되다.시약 5: 가루약 x 1 병, 4℃ 보존.사용하기 전에 증류수를 넣다4.5ml 충분히 용해됩니다.

표준액: 액체×1 병,-20℃ 보존.사용하기 전에 찾다1.5ml EP 관리, 가입 10μl표준액, 첨가 990 μl 증류수, 혼합하면 0.05 mmol/L표준 지아알데히드 용액, 4℃保存。

구체적인 제품의 매개 변수는 제품 설명서를 받은 매개 변수를 기준으로 한다

자체 장비 및 장비:

일반 원심분리기, 과속 원심분리기, 조절식 이액총, 가시분광광도계/효소표시기, 미량 석영비색그릇/96 슬레이트, 증류물과 얼음.

굵은 효소액 추출:

1、세포핵, 미토콘드리아 등 대분자물질 제거:약속 0.5g 조직, 가입 1ml 시약 1, 얼음에 충분히 연마, 10 000g 4 ℃ 리마음 30min，맑은 액체를 채취하여 과속 원심관으로 들어가다.

2、굵은 미립자:100 000g，4℃, 원심분리60min，맑은 액체를 버리다.

3、헤모글로빈 등 불순물 제거:방향 단계 2 침전 중가 1ml시약 1, 꽉 닫은 후 충분히 진동 용해, 100000g원심 30min，포기

상청액.

4、최종 미립자:방향 단계 3 침전 중 시약 2 0.5ml，충분한 진동 용해, 즉 굵은 효소액, 측정 대기.이 측정 대기액은 당일 사용해야 한다.

측정 작업:

1. 분광 광도계 /효소 측정기 예열 30 분, 파장 조절 412 nm，증류수를 0으로 조절하다.

2. 시약 2배치 37℃ 수욕 중 예열30 분。

3. 돌보기:取 0.5ml의 EP 관리, 가입10μl 굵은 효소액, 170μl 시약 2, 10μl 시약 3, 10μl 증류수 를 고루 섞은 후 에 놓다37℃수욕보온 30분; 지금 가입 35μl시약 5, 골고루 섞은 후 빙욕 중 에 놓다 5분;取出후 가입 35μl 시약 6, 혼합 후 실온

정지 5분; 실온 8000rpm원심 5min；새 EP 가져오기관리, 가입 100μl 상청액, 100μl 시약 7, 혼합 후 60 ℃ 수욕10min，그런 다음 꺼내기, 찬물로 냉각 5분, 412nm광흡수를 측정하여A쌍이 돌보다.

4. 측정관:取 0.5ml의 EP 관리, 가입10μl 굵은 효소액, 170μl 시약 2, 10μl 시약 3, 10μl 시약 4, 고루 섞은 후 놓다37℃

수욕보온 30분; 지금 가입 35μl시약 5, 골고루 섞은 후 빙욕 중 에 놓다5분;取出후 가입 35μl 시약 6, 혼합 후 실온정지 5 미터in; 실온 8000rpm원심 5 미터안에; 새로 만들기 EP관리, 가입 100 μl 상청액，100μl 시약 7, 혼합 후 60℃ 수욕10min，그런 다음 꺼내기, 찬물로 냉각 5분, 412nm광흡수를 측정하여A 측정관.

5. 표준 튜브:取 0.5ml EP관리, 가입 100μl표준품, 100μl 시약 7, 혼합 후 60℃ 수욕10min，그런 다음 꺼내고,냉기를 쓰다

물냉각 5분, 412nm 광흡수를 측정하여A 표준관.

참고: 각 샘플은 올바른 관리가 필요합니다.

ERND는 활성 계산 공식:

a.미량의 석영 비색 그릇을 사용하여 측정한 계산 공식은 다음과 같다

(1).단백질 농도로 계산하다:

활성 단위 정의: 37℃ 에서 분당 밀리그램의 단백질이 촉매하여 1nmol 을 생성한다포름알데히드는 효소 활성 단위 하나.

ERND는 활성(nmol/min/mg프로트) = C 표준품 x V 표준품×(A) 측정관 - A 돌보다）÷A 표준관×희석배수÷Cpr × V

모양÷T

=45× (A) 측정관 - A 돌보기) ¹ A 표준관 Cpr。

(2).견본의 질량에 따라 계산하다.:

활성 단위 정의: 37℃ 에서 분당 1그램의 샘플이 촉매하여 1nmol을 생성한다포름알데히드는 효소 활성 단위 하나.

ERND는 활성(nmol/min/g 선중) = C 표준품 x V 표준품×(A 측정관 - A 돌보기) ¹ A 표준관 × 희석 배수 (W × V 샘플) T

=45× (A) 측정관 - A 돌보기) ¹ A 표준관÷W

C표준품: 0.05mmol/L=50μmol/LV표준품: 100μl=1×10^-4 L; 희석 배수: V반총 V 상청액 = (50+850

+50+50+175+175）÷500=2.7；Cpr: 굵은 효소액 단백질 농도(mg/ml), 별도 측정 필요, 당사 사용 권장BCA는

단백질 함량 측정 시약함;W: 샘플 품질,g；V 샘플: 굵은 효소액 부피 첨가, 10μl=0.01ml;T: 촉매 반응 시간(M)안에），

30분。

b.사용 96공판 측정의 계산 공식은 다음과 같다.

(1).단백질 농도로 계산하다:

활성 단위 정의: 37℃ 에서 분당 밀리그램의 단백질이 촉매하여 1nmol 을 생성한다포름알데히드는 효소 활성 단위 하나.

ERND는 활성(nmol/min/mg프로트) = C 표준품 x V표준품×(A) 측정관 - A 돌보다）÷A 표준관×희석배수÷Cpr × V

모양÷T

=45× (A) 측정관 - A 돌보기) ¹ A 표준관 Cpr。

(2).견본의 질량에 따라 계산하다.:

활성 단위 정의: 37℃ 에서 분당 1그램의 샘플이 촉매하여 1nmol을 생성한다포름알데히드는 효소 활성 단위 하나.

ERND는 활성(nmol/min/g 선중) = C 표준품 x V 표준품×(A 측정관 - A 돌보기) ¹ A 표준관 × 희석 배수 (W × V 샘플) T

=45× (A) 측정관 - A 돌보기) ¹ A 표준관÷W

C표준품: 0.05mmol/L=50μmol/LV표준품: 100μl=1×10^-4 L; 희석 배수: V반총 V 상청액 = (50+850

+50+50+175+175）÷500=2.7；Cpr: 굵은 효소액 단백질 농도(mg/ml), 별도 측정 필요, 당사 사용 권장 BCA는단백질 함량 측정 시약함;W: 샘플 품질,g；V 샘플: 굵은 효소액 부피 첨가, 10μl=0.01ml；T: 촉매 반응 시간(M)in）， 30분

붉은곰팡이 su-N-탈메틸효소 활성 측정 시약함 P450 시리즈