아닐린-4-히드록시화효소(AH)활성 측정 시약함 설명서

미량법 100 튜브/48 모양

정식으로 측정하기 전에 반드시 취해야 한다 2-3 예상 차이가 비교적 큰 견본을 예측하여 결정하다.측정 의미:

세포 색소P450 효소는 주로 간에 존재하는 동공효소로서 외원물질대사에서 중요한 역할을 하는데 특히 약물과독물의 대사.AH 에서P450 효소계에서는CYP2E1은 아형,CYP2E1은 약물의 대사에 관여할 뿐만 아니라 촉매도 많이 할 수 있다종전 발암물질과 전독물의 활성화 과정.

측정 원리:

AH 촉매 아닐린 히드록시화 후 생성된 4-아미노페놀, 페놀로 더 바뀐다-인돌 복합체 630nm 특징적인 흡수봉이 있습니다.통과측정 630nm흡광도 증가 속도, 계산AH활성

아닐린-4-히드록시효소(AH) 활성 측정 시약함

구성:

시약 1: 분제×1 병,4℃저장.사용 전 가입 100ml 증류수, 충분히 용해되다.시약 3: 분제×1병,4℃저장.사용 전 가입 10ml증류수, 충분히 용해되다.시약 4: 가루약×1병,4℃저장.사용 전 가입 5ml증류수, 충분히 용해되다.

시약 6: 분제×1 병 (부식성 시약),4℃빛을 피하여 보존하다.사용 전 가입 10ml 증류수, 충분히 용해되다.시약 7: 분제×1병,4℃저장.사용 전 가입 10ml증류수가 충분히 용해되다.

표준액: 액체×1 병,10μmol/L，4℃빛을 피하여 보존하다.

구체적인 제품의 매개 변수는 제품 설명서를 받은 매개 변수를 기준으로 한다

자체 장비 및 장비:

일반 원심분리기, 과속 원심분리기, 가시분광 광도계/효소 표시기, 미량 유리 비색 그릇/96 공판, 쌍증수, 얼음.

굵은 효소액 추출:

1、세포핵, 미토콘드리아 등 대분자물질 제거:약속 0.5g 조직, 가입 1ml 시약 1, 얼음 위를 충분히 연마하고,10 000g 4℃，원심 30분, 맑은 액체를 채취하여 과속 원심관으로 옮깁니다.

2、굵은 미립자: 100 000g 4℃, 원심 60분, 맑은 액체를 버려라.

3、헤모글로빈 등 불순물 제거:방향 단계 2 침전 중가 1ml 시약 1, 꼭 덮은 후 충분히 진동 용해,100 000g 원심 30분버리다

상청액.

4、최종 미립자:방향 단계 3 침전 중 시약 2 0.5ml의, 꽉 덮은 후 충분히 진동 용해, 즉 굵은 효소액, 측정 대기.

측정 작업：

1. 분광 광도계/효소 측정기 예열 30 분, 파장 조절 630 nm, 증류수 제로.

2. 시약 3배치 37℃수욕 중 예열 30분。

3. 시약 5는 얼음욕에 넣고 예냉한다. 30분。

4. 표준 튜브:取 0.5 ml EP 관리, 가입 100μl 표준액,100μl 시약 6,100μl 시약 7, 혼합 후 실온 정지 30분，흡수 200μl미량 유리에 색그릇을 비교하다./96대시보드,630nm광흡수를 측정하여A표준관.

5. 돌보기:取 0.5 ml EP 관리, 가입 50μl 굵은 효소액,100μl 시약 3,50μl 증류수를 고루 섞은 후 37℃수욕 중 보온 30분；

재가입 100μl 시약 5, 혼합 후 빙욕 5분，11000rpm，4℃, 원심 10분；取 100μl 상청액, 새로운 것을 첨가 0.5 mlEP 튜브재가입 100μl 시약 6,100μl 시약 7, 혼합 후 실온 정지 30분, 흡수 200μl 미량 유리에 색그릇을 비교하다./96 구멍보드,630nm광흡수를 측정하여 A돌보다.

6. 측정관:取 0.5 ml EP 관리, 가입 50μl 굵은 효소액,100μl 시약 3,50μl 시약 4, 고루 섞은 후 37℃수욕 중 보온 30분；

재가입 100μl 시약 5, 혼합 후 빙욕 5분，11000rpm，4℃, 원심 10분；取 100μl 상청액, 새로운 것을 첨가 0.5 mlEP 튜브재가입 100μl 시약 6,100μl 시약 7, 혼합 후 실온 정지 30분, 흡수 200μl 미량 유리에 색그릇을 비교하다./96 구멍보드,630nm광흡수를 측정하여 A측정관.

AH 활성 계산 공식：

a.미량의 석영 비색 그릇을 사용하여 측정한 계산 공식은 다음과 같다

（1）단백질 농도로 계산하다

활성 단위 정의:37℃중매 밀리그램의 단백질은 분당 촉매하여 생성된다 1nmol의 4-아미노페놀은 1 효소 활성 단위.

AH 활성(nmol/분/mg) 프로트) =C 표준품× V 표준품×（A 측정관 -A 돌보다÷A 표준관×희석 배수÷（Cpr × V샘플÷T

=2×（A 측정관 -A 돌보다÷A 표준관÷Cpr。

（2）견본의 질량에 따라 계산하다.

활성 단위 정의:37℃중간 그램당 샘플 분당 촉매 생성 1nmol의 4-아미노페놀은 1 효소 활성 단위.

AH활성(nmol/분/g) 신선하고 무겁다)=C 표준품× V 표준품×（A 측정관 -A 돌보다）÷A 표준관×희석 배수÷(W×V) 모양÷T

=2×（A 측정관 -A 돌보다÷A 표준관÷W

C표준품:10μmol/L；V표준품:100μl = 1 × 10^-4L; 희석 배수: V반총÷V상청액= 300μl ÷ 100μl = 3；Cpr는: 굵게효소액 단백질 농도 (mg/ml의）, 별도 측정 필요, 당사 사용 권장 BCA는 단백질 함량 측정 시약함;W : 샘플 품질;V샘플: 반응 체계에 굵은 효소 액체 부피를 첨가하여, 50μl = 0.05 ml； T: 촉매 반응 시간 (분），30분。

b.사용 96 대시보드 측정의 계산 공식은 다음과 같습니다.

（1）단백질 농도로 계산하다

활성 단위 정의:37℃중매 밀리그램의 단백질은 분당 촉매하여 생성된다 1nmol의 4-아미노페놀은 1 효소 활성 단위.

AH 활성(nmol/분/mg) 프로트) =C 표준품× V 표준품×（A 측정관 -A 돌보다÷A 표준관×희석 배수÷（Cpr × V샘플÷T

=2×（A 측정관 -A 돌보다÷A 표준관÷Cpr

（2）견본의 질량에 따라 계산하다.

활성 단위 정의:37℃중간 그램당 샘플 분당 촉매 생성 1nmol의 4-아미노페놀은 1 효소 활성 단위.

AH 활성(nmol/분/g) 신선하고 무겁다) =C 표준품× V 표준품×（A 측정관 -A 돌보다）÷A 표준관×희석 배수÷(W×V) 모양÷T

=2×（A 측정관 -A 돌보다÷A 표준관÷W

C 표준품:10μmol/L；V 표준품:100μl = 1 × 10^-4L; 희석 배수:V 반총÷V상청액= 300μl ÷ 100μl = 3；Cpr는: 굵은 효소액 단백질 농도 (mg/ml의），별도의 측정이 필요하므로 본사를 사용하는 것을 건의합니다 BCA는 단백질 함량 측정 시약함; W : 샘플 품질; V샘플: 반응 체계에 굵은 효소 액체 부피를 첨가하여, 50μl = 0.05 ml； T: 촉매 반응 시간 (분），30분。

아닐린-4-히드록시효소(AH) 활성 측정 시약함