아미노비린-N-탈메틸효소(그리고）활성 측정 시약함 설명서

미량법 100 튜브/48 모양

정식으로 측정하기 전에 반드시 취해야 한다 2-3 예상 차이가 비교적 큰 견본을 예측하여 결정하다.측정 의미:

세포 색소P450 효소는 외원 물질 대사, 특히 약물과 독물에 중요한 역할을 하는 효소계이다.그리고 로서P450효소계의 중요한 일원은CYP3A4는 아형은 약물의 메틸화 반응과 밀접한 관련이 있다.

측정 원리:

그리고 촉매 아미노비린 포름알데히드 방출, 통과 나쉬 비색법 으로 포름알데히드 함량 을 측정하면 바로 계산할 수 있다나 그리고 활성

아미노비린-N-탈메틸효소 활성 측정 시약함 P450

구성:

시약 1: 분제×1 병,4℃저장.사용하기 전에 추가하다 100ml 증류수가 충분히 용해되다.

시약 3: 분제×1 튜브,4℃빛을 피하여 보존하다.사용 전 가입 1ml 무수 에탄올, 충분히 용해.시약 4: 가루약×1튜브,4℃저장.사용 전 가입 0.5ml의증류수, 충분히 용해되다.

시약 5: 분제×1 병, 실온 보존.사용하기 전에 증류수를 가하다. 4ml 충분히 용해되다.

표준액: 액체×1 병,-20℃저장.사용하기 전에 찾다 1.5ml의 EP 관리, 가입 10μl 표준액, 첨가 990μl의 증류수는 고르게 섞으면 된다0.05 mmol/L 표준 지아알데히드 용액,4℃저장.

구체적인 제품의 매개 변수는 제품 설명서를 받은 매개 변수를 기준으로 한다

자체 장비 및 장비:

일반 원심분리기, 과속 원심분리기, 수욕솥, 조절식 이액총, 자외선 분광 광도계/효소 표시기, 미량 석영 비색 그릇/96 구멍판, 증류수, 무수 에탄올과 얼음.

굵은 효소액 추출：

1、세포핵, 미토콘드리아 등 대분자물질 제거:약속 0.5g 조직, 가입 1 ml 시약 1, 얼음 위를 충분히 연마하고,10 000g 4℃떨어지다마음 30분, 맑은 액체를 꺼내 과속 원심관으로 들어간다.

2、굵은 미립자:4℃，100 000g, 원심 60분, 맑은 액체를 버려라.

3, 헤모글로빈 등 불순물 제거: 단계 2 침전 중가 1ml 시약 1, 꼭 덮은 후 충분히 진동 용해,100 000g 원심 30분버리다상청액.

4、최종 미립자:방향 단계 3 침전 중 시약 2 0.5 ml, 꽉 덮은 후 충분히 진동 용해, 즉 굵은 효소액, 측정 대기.이 측정 대기 액체 수요

당일 사용.

그리고 활성 측정 작업:

1. 분광 광도계/효소 측정기 예열 30 분, 파장 조절 412 nm, 증류수 제로.

2. 시약 2배치 37℃수욕 중 예열 30분。

3. 돌보기:取 1 지EP 관리, 가입 10μl 굵은 효소액,170μl의 시약 2,10μl 시약 3,10μl 증류수 를 고루 섞은 후 에 놓다 37℃

수욕보온 30분; 지금 가입 35μl 시약 5, 골고루 섞은 후 빙욕 중 에 놓다 5분；取나후 가입 35μl 시약 6, 혼합 후 실온정지 5분; 실온 8000rpm 원심 5분; 새 항목 가져오기EP 관리, 가입 100μl 상청액,100μl 시약 7, 혼합 후 60℃수욕 10분, 그런 다음나, 찬물로 냉각 5분, 412nm광흡수를 측정하여A돌보다.

4. 측정관:取 1 지EP 관리, 가입 10μl 굵은 효소액,170μl의 시약 2,10μl 시약 3,10μl 시약 4, 고루 섞은 후 놓다 37℃

수욕보온 30분; 지금 가입 35μl 시약 5, 골고루 섞은 후 빙욕 중 에 놓다 5분；取나후 가입 35μl 시약 6, 혼합 후 실온정지 5분; 실온 8000rpm 원심 5분；取 1 지출EP 관리, 가입 100μl 상청액,100μl 시약 7, 혼합 후 60℃물목욕 10분, 그런 다음나, 찬물로 냉각 5분, 412nm광흡수를 측정하여A측정관.

5. 표준 튜브:取 1 지EP 관리, 가입 100μl 표준품,100μl 시약 7, 혼합 후 60℃수욕 10분, 그런 다음나춥게물냉각5분,412nm 광흡수를 측정하여A 표준관.

참고: 각 샘플은 올바른 관리가 필요합니다.

그리고 활성 계산:

a.미량의 석영 비색 그릇을 사용하여 측정한 계산 공식은 다음과 같다

（1）단백질 농도로 계산하다

활성 단위 정의:37℃분당 밀리그램당 단백질 촉매 생성 1nmol의 포름알데히드는 1 효소 활성 단위.

그리고 활성(nmol/분/mg) 프로트) =C 표준품×V 표준품×（A 측정관 -A 돌보다）÷A 표준관×희석 배수÷（Cpr× V샘플÷T

=45×（A 측정관 -A 돌보다÷A 표준관÷Cpr。

（2）견본의 질량에 따라 계산하다.

활성 단위 정의:37℃분당 분당 조직 촉매 발생 1nmol의 포름알데히드는 1 효소 활성 단위.

그리고 활성(nmol/분/g) 신선하고 무겁다 ) =C 표준품× V 표준품×（A 측정관 -A 돌보다÷A 표준관×희석 배수÷(V) 모양

÷V 견본 합계×W) ÷T

=45×（A 측정관 -A 돌보다÷A 표준관÷W。

C 표준품:0.05 mmol/L=50μmol/L；V 표준품:500μl = 0.0005 L; 희석 배수:V 반총÷V 상청액=（50+850

+50+50+175+175）÷500=2.7；Cpr는: 굵은 효소액 단백질 농도 (mg/ml의）, 별도 측정 필요, 당사 사용 권장 BCA는단백질 함량 측정 시약함;V샘플: 굵은 효소액을 첨가하여 부피,50μl = 0.05ml；V시료총: 추출액 부피,0.5ml의；T: 촉매 반응 시간 (분），30분。

b.사용 96 대시보드 측정의 계산 공식은 다음과 같습니다.

（1）단백질 농도로 계산하다

활성 단위 정의:37℃분당 밀리그램당 단백질 촉매 생성 1nmol의 포름알데히드는 1 효소 활성 단위.

그리고 활성(nmol/분/mg) 프로트) =C 표준품× V 표준품×（A 측정관 -A 돌보다）÷A 표준관×희석 배수÷（Cpr× V샘플÷T

=45×（A 측정관 -A 돌보다÷A 표준관÷Cpr는。

（2）견본의 질량에 따라 계산하다.

활성 단위 정의:37℃분당 분당 조직 촉매 발생 1nmol의 포름알데히드는 1 효소 활성 단위.

그리고 활성(nmol/분/g) 신선하고 무겁다) =C 표준품× V 표준품×（A 측정관 -A 돌보다÷A 표준관×희석 배수÷(V) 모양÷V견본 합계×W) ÷T

=45×（A 측정관 -A 돌보다÷A 표준관÷W。

C 표준품:0.05 mmol/L=50μmol/L；V 표준품:500μl = 0.0005 L; 희석 배수:V 반총÷V 상청액=（50+850

+50+50+175+175）÷500=2.7；Cpr는: 굵은 효소액 단백질 농도 (mg/ml의）, 별도 측정 필요, 당사 사용 권장 BCA는단백질 함량 측정 시약함;V 샘플: 굵은 효소액을 첨가하여 부피,50μl = 0.05ml；V 시료총: 추출액 부피,0.5 ml；T: 촉매 반응 시간 (분），30분。

참고 사항:

1, 굵은 효소액은 당일 측정을 완료해야 하며, 보존해야 할 경우 굵은 효소액으로 추출 절차 3 침전 중가 0.5ml의 20%글리세린, 나누어 담으면,

-80℃저장,

2, 시약 3과 시약 4는 즉시 사용하기 전에 조제해야 한다. 만약 당일 다 쓰지 않았다면,4℃빛을 피하여 저장, 사용 가능 1 주,

3, 굵은 효소액은 단백질 농도 측정에 직접 사용할 수 있으므로 권장 BCA는 단백질 함량을 법측하다.

아미노비린-N-탈메틸효소 활성 측정 시약함 P450