범용 T 캐리어 균락 PCR 감정 시약함 T4 원리 캐리어

노볼레드범용 T 캐리어 균락 PCR 감정 시약함 T4 원리 캐리어

범용 T 캐리어 균락 PCR 감정 시약함

디렉토리 번호:42015

키트 구성, 저장, 안정성:

저장: -20 ℃ 저장.

구체적인 제품의 매개 변수는 제품 설명서를 받은 매개 변수를 기준으로 한다

제품 설명:

균락 PCR 감정은 T 캐리어 클론 연결 후 양성 클론 (삽입 세그먼트 포함) 여부를 감정하는 가장 빠른 bian 방법이다.그러나 시중에서 볼 수 있는 균락 PCR 감정 시약함은 모두 T3, T7 또는 SP6 등 특이 T 캐리어 유인물을 사용하며, 어떤 특정 T 캐리어가 양성 클론을 연결하는 감정에만 사용할 수 있다.서로 다른 T 캐리어를 사용하면 여러 종류의 감정 시약함을 동시에 구매해야 하기 때문에 사용 비용이 크게 증가한다.당사는 범용 T 캐리어 유인물을 사용하여 연구 제작한 범용 T 캐리어 균락 PCR 감정 시약함을 사용하여 한 가지 시약함만 구매하면 시중에서 흔히 볼 수 있는 모든 T 캐리어(pGEM, pUC, pBluescript 시리즈 포함)의 양성 복제 연결 감정에 사용할 수 있습니다.또한 T3, T7 또는 SP6를 유인물로 사용하는 균락 PCR 감정시약함 유인물은 삽입 위치까지의 거리가 매우 짧기 때문에 100bp 정도 또는 더 작은 부분의 삽입을 감정할 때 음성복제의 유인물 이중합체 밴드와 양성복제 증폭 밴드의 크기가 비슷해 구분할 수 없다.흔히 유인물 이중합체의 띠를 양성증폭 띠로 간주하여 가양성을 조성한다.반대로 가짜 음성을 만든다.이 시약함은 통용 T 캐리어 유인물이 세그먼트를 삽입하지 않았을 때의 거리가 최소 150bp 이상이며, 삽입 세그먼트의 길이를 더하면 삽입 세그먼트가 증폭된 스트라이프인지 유인물 이중합체가 증폭된 스트라이프인지 명확하게 구분할 수 있다.가양성이나 가음성을 피하여 정확성을 크게 높였다.당사가 개발한 휴대용 PCR MasterMix 프리믹스 시스템은 귀하가 일일이 각종 성분을 넣지 않고 직접 넣으면 단일 균락을 선별하여 1시간 정도의 PCR 반응과 전기 수영 검사를 거쳐 재조합 균락 감정의 결과를 얻을 수 있습니다.

예상 확장 세션:

참고 사항:

1. 재조합 균락 감정 시, 단일 균락을 선택하기 전에, 먼저 표시를 잘 해야 하며, 감정 후 사용하기에 편리하다.

2. 균락을 고를 때는 단균락을 선택해야 하며 PCR 결과에 영향을 주지 않도록 너무 많은 균체를 골라서는 안 된다.

3. PCR 프로그램을 설정할 때 삽입 세그먼트의 크기에 따라 확장 시간을 결정합니다. 삽입 세그먼트의 크기가 1kb 이하일 경우 30-45초 동안 연장하면 됩니다. 세그먼트가 더 길면 이 비율로 확장 시간을 늘릴 수 있습니다.

작업 단계 (25ml예를 들어, 고객은 20을 채택할 수 있습니다.ml시스템):

1. 다음 체계에 따라 유인물을 함유한 1 x Taq MasterMix 반응액을 배합한다.

2.밤을 새워 배양한 평판의 균락번호를 매긴후 멸균의 총머리를 사용하여 일부 단균락을 골라 상기 반응액을 첨가하고 혼합하여 균락이 반응액에 충분히 분산되도록 한다.

실험 결과를 분석하기 쉽도록 균락을 넣지 않은 음성 대조관을 하나 더 설치할 수 있다.

3.열순환기에 PCR 튜브를 놓고 다음 조건에 따라 반응을 시작합니다. 권장 조건은 다음과 같습니다.

94℃ 10 분

94℃ 30 초

55℃ 30 초 30-33 주기

72℃ 0.5-1 분

72℃ 5 분

참고: 삽입 세그먼트 크기에 따라 확장 시간을 조정합니다.예변성 시간은 균락을 분해하고 DNA 템플릿을 방출하기 위해 10분으로 연장된다.

반응이 끝나면 5-10을 취하세요ml 직접 샘플링 전영 검사.

주: 세균이 분해되기 어렵거나 불순물이 가짜음성이 많으면 아래의 방법을 시도하여 DNA를 분해하여 방출한후 진행한다.

1. 균을 골라 50을 첨가ml dd 물 (또는 10ml dd 물속), 흔들어.

2. 99도, 10분 동안 균액의 효소를 살리고 DNA를 방출한다.

3. 12000rpm 원심분리 1분 세포 조각 제거.

4. PCR 제거, 25ml PCR 시스템 취5ml 업스트림(시작 50ml dd 물) 또는 1ml 업스트림 (시작 10ml dd 물) 템플릿을 만듭니다.

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