TOPO-TA/Blunt 간단한 번개 클론 키트

노볼레드TOPO-TA/Blunt 간단한 번개 클론 키트

TOPO-TA Blunt 간단한 번개 클론 키트

디렉토리 번호：42212

제품 내용:

저장 기준:

-20℃, 보관12 개월, 사용 효과에 영향을 주지 않습니다.

제품 소개:

실온 조건에서 20분에 TA 클론 또는 Blunt 클론을 완료할 수 있으며 양성률이 100% 에 가깝고 얼음욕, 열자극 면제, 청백반 선별 면제, 10kb에 달하는 DNA 조각도 연결할 수 있다.

클론 단계(≤ 3kb 조각)：

단계 단순화(≤10kb) 단편） 소생 방지, 액체 방지 LB는

1. 연결: 실온 5종；

1. 연결: 37℃ 연결 5 분。

2. 전환: 실온도 5 시계；

2. 전환: 빙욕 5 min，42 ℃ 열자극 1 min，빙상 2 분。

3. 회복: 180rpm, 37℃ 진동배양10 분도판

3. 모든 균액을 취하여 도판하고 37 ℃ 를 거꾸로 배양한다.

작업 단계:

1. PCR는생산물의 제조:

a. 유인물 요구: 유인물은 인산화할 수 없다.

b. 효소의 선택: 필요에 따라 선택DNA는 중합효소, 이 캐리어 호환PCR는 산물의A 끝과 끝.

c. 전기 수영 검사PCR 생산물의 양과 질량:

① 목적 스트라이프만 있고 직접 연결 반응을 할 수 있으며 순화할 필요가 없다.

② 여러 개의 밴드가 있는 경우 젤은 DNA 조각(DC011-100)을 회수하는 것이 좋습니다.

③ 입자가 템플릿으로 증폭되면 템플릿 입자도 비목적 균락이 자라기 때문에 젤 회수를 해야 한다.

2. 연결 반응:

1） 실온(20℃-37℃) 연결체계 구축(10ul 시스템）：

크기가 다른 삽입 세션의 권장 사용량:

시약을 넣은 후, 경탄관 바닥을 골고루 섞는다 (또는 가볍게 불어서 골고루 섞는다）, 점차원심은 모든 액체를 원심관 밑에 수집한다.

2) 실온(20℃-37℃)연결5 분.연결 산물은 직접 감수성 세포로 전환되거나 얼음 위에 놓아 준비할 수 있다.

3. 전환, 소생, 도판:

1）100ul 감각적 세포, 실온에서 해동(약속1 분 정도) 가볍게 털어 세포를 골고루 띄운다.

2） 가입10ul 연결액, 가볍게 섞기, 실온(20℃-37℃)배치5분.

3） 가입500ul실온의LB는또는SOC는 배양기(항생제 불포함), 37℃180 rpm의진동배양10 분。

（참고: 보다 큼3kb의 의 세그먼트, 진동 배양 시간을 30-60으로 연장 분, 전환자를 증가시킬 수 있습니다.또는 단순화 단계）

4） 取200l 균액 도판 (아미노벤젠 마이신 함유50-100ug/ml），밤새도록 키우다.(클론을 더 많이 생성하기 위해 4000 rpm의 원심1 min，빨아들이는 부분 상청, 보존100-150ul，경탄 부유 균체, 모든 균액 도판 채취)

참고: 를 사용하는 경우5UL 체계는 각 성분을 비례에 따라 반감하고 사용 횟수를 배로 늘릴 수 있다.

4. 전환 하위 필터링:

본 제품은 양성률이 상당히 높으며, 일반적으로 보이는 즉시 얻을 수 있으며, 자라난 균이 정상으로 떨어지기만 하면 (오염된 것이 아니다잡균, 전환자 수도 그리 적은 편은 아니다）, 기본적으로 삽입이 포함됩니다.따라서 삽입 세그먼트가 초과되지 않음2-3kb의 감정 안 하셔도 돼요.직접 고르다1~2개의 균이 서열을 측정한다.

1） 균락PCR는 검사: 선별균이 10ul에 떨어졌다 무균수 에서 골고루 섞어 1ul 을 취하다배치25ul PCR는 시스템,사용PCR 유인물 또는 M13 범용 유인물은 양성 클론을 감정합니다.

2）범용 M13F(-20)/M13R(-26) 지시자 시퀀싱을 사용하여 의도 클론이 포함되어 있는지 확인합니다.

pTOPO TA/Blunt캐리어 스펙트럼:

pTOPO TA/Blunt 캐리어 시퀀스:

TOPO-TA/Blunt 간단한 번개 클론 키트