고효율 감수성 세포 제조 시약함

고효율 감수성 세포 제조 시약함

디렉토리 번호:30018

키트 구성, 저장, 안정성:

4 ℃ 를 단기적으로 사용하여 오염을 피한다.장기 보존 - 20 ℃ 는 1 년에 유효합니다.

구체적인 제품의 매개 변수는 제품 설명서를 받은 매개 변수를 기준으로 한다

제품 설명:

1. 고효율 감수성 세포 제조 시약함전통적인 고효률감수상태세포제조방법의 기초에서 적당히 개량하여 만든것으로서 조작이 편리하고 전환효률이 높다.

2. 이 키트를 사용하면 체감 효율을 10까지 높일 수 있습니다⁸cfu/μg 입자.작은 입자에 대해서는 효율이 약간 높지만, 큰 입자에 대해서는 효율이 약간 낮다.본 시약함으로 제조한 고효율 감수성 세포는 입자를 전환할 수 있을 뿐만 아니라 일반적인 연결 산물을 전환하기에 매우 적합하며, 특히 전환 평단 연결 등 높은 전환 효율이 필요한 상황에 적합하다.

3. 이 시약함을 사용하면 조작이 간단하여 세균을 배양한후 60분 정도면 고효률감수성세포의 제조를 완성할수 있다.

4. 이 키트는 Top 10, DH5α, BL21(DE3), JM109, TG1, HB101, XL-1 등 대부분의 일반적인 대장균에 적용됩니다.그러나 균종에 따라 전환 효율에 큰 차이가 있을 수 있다.

5. 이 시약함은 여러 차례에 걸쳐 사용할 수 있으며 100μl의 감수성 세포 100개를 제조할 수 있다.

v 참고 사항:

1. 모든 시약, 소모품, 기구, 설비는 반드시 멸균 처리를 거쳐야 한다.

2. 감수성 세포를 제조하는 과정에서 모두 항생제를 함유하지 않은 LB를 사용한다. 감수성 균을 사용하는 과정에서 열쇼크 후 37℃로 배양할 때도 전입된 입자가 저항성이 있더라도 무항생제 LB를 사용해야 한다.

3. 감수성 세포 제조가 완료되면 -70 ℃ 로 빠르게 넘어가세요.

작업 단계: (시험 전에 주의사항을 읽으십시오.)

1. 플랫 칠하기:

최상의 감수성 효율을 얻기 위해서는 글리세린균이나 다른 형태로 보존된 균종을 LB 평판에 바르고 밤을 새워야 한다.

2. 접종:

신선하게 배양된 균종이 있는 LB 태블릿을 취하면 후속 작업은 모두 초정대 내에서 진행된다.핀셋의 꼭대기를 알코올 70% 에 묻히고 알코올 램프에 약간 태워 핀셋의 꼭대기를 무균 상태로 만든다.핀셋으로 무균의 플라스틱 총머리나 이쑤시개를 집고, 태블릿에서 단일 클론을 골라낸 다음 균종을 묻힌 플라스틱 총머리나 이쑤시개를 3mL의 SOB 또는 LB (고객은 균종에 따라 적합한 배지를 선택해야 한다) 가 들어 있는 세균 배양 시험관에 넣는다.이 같은 조작은 접종 고리 등을 이용해 조작할 수도 있다.

3. 배양:

37℃ 약 250rpm 배양으로 밤을 지새우며 보통 배양시간은 16시간 정도로 통제하는 것이 좋다.절대로 18시간을 넘기면 안 된다.

4. 재접종 배양:

필요에 따라 제조한 고효율 감수성 세포의 양에 따라 1: 500의 비율로 신선하게 배양된 밤샘균 접종으로 배양한다.예를 들어, 100 마이크로리터의 신선한 밤샘균을 50 밀리리터의 SOB 또는 LB에 취하여 37 ℃ 약 250rpm에서 배양한다.

5. 제조 감수성 세포:

ð 주의: 원심분리기의 회전속도와 원심분리시간은 감수상태세포제작에 매우 중요하며 부동한 종류의 세균은 가장 좋은 회전속도와 원심분리시간이 다르므로 구체적인 상황에 따라 최적화해야 한다.가장 좋은 상황은 적당한 회전속도와 원심시간이 세균이 마침 원심을 침전시키고 또 너무 긴밀해서는 안된다. 그렇지 않을 경우 중서스펜스가 어려우므로 힘껏 불어야만 중서스펜스를 할수 있으며 세포에 손해를 끼치고 전환효률에 영향을 줄수 있다.

1) 배양된 세균 OD600이 0.5 정도일 때 배양된 균액을 얼음욕에 넣고 15분간 식힌다.참고: 이후의 모든 작업은 4도 또는 빙욕에서 수행해야 합니다.

2) 4 ℃ (원심분리기는 반드시 미리 냉각해야 한다) 3000-3500g 원심분리는 5분 동안 세균을 수집하고 상청을 버린다 (가능한 한 깨끗이 제거하고 상청, 잔류가 적을수록 좋다).

3) 원심 침전 전 균량이 50㎖이면 후속 작업으로, 다른 부피라면 비율로 환산해 후속 작업을 진행한다.

4) 10밀리리터의 예랭의 고효률감수상태제조용액A로 세균침전 (중현을 편리하게 하기 위하여 먼저 소량의 용액A를 첨가하고 중현한후 다시 남은 용액A를 첨가할수 있다.) 을 가볍게 중현할 때 반드시 가볍고 부드러워야 한다. 그렇지 않을 경우 효과에 영향을 줄수 있다.

5) 15분간 얼음목욕을 하다.

6) 4 ℃ (원심분리기는 반드시 미리 냉각해야 한다) 3000-3500g 원심분리는 5~7분 동안 세균을 수집하고 상청을 포기한다.

7) 2밀리리터의 예냉된 고효율 감수성 제조 용액 B로 세균 침전을 가볍게 중현한다.무거운 서스펜션을 불 때는 반드시 가볍고 부드러워야 한다. 그렇지 않으면 효과에 영향을 줄 수 있다.

8) 15분간 얼음목욕을 하다.

9) 빙욕에서 분장하면 필요에 따라 50-200마이크로리터/관으로 적당히 분장할 수 있다.

10) 즉시 사용하거나 액체 질소 또는 에탄올 드라이 아이스 샤워로 냉동 후 -70 ℃ 로 보관합니다.