분자 상호 실험: IP/CO-IP 면역 공침전

1. 기술 소개

IP(면역침전, Immunoprecipitation)와 Co-IP(면역공침전, Co-Immunoprecipitation)는 단백질의 기능 및 상호작용을 연구하는 핵심기술로 분자생물학과 세포생물학 분야에 널리 활용된다.

2. 기술원리

IP는 특이성 항체와 목표 단백질을 통해결합, 항체를 이용하여 표적 단백질 (즉 항원) 을 분리하여 어떤 단백질의 발현 상황을 검측한다; CO-IP는 IP를 기반으로 단백질 간의 상호 작용을 검증합니다.하나의 단백질(미끼 단백질)을 포획하여 결합된 상호작용 단백질(표적 단백질)을 검출하고,그리하여특이성 부집이 연구하는 목적 단백질나아가 복합체 중 알려진 단백질과 상호작용하는 단백질을 연구한다.

3. 응용장면

• IP: 질량 스펙트럼 감식 (IP-MS) 을 위해 풍부한 저풍도 단백질을 사용하여 항체 특이성을 검증합니다.

• Co-IP: 전사 인자 복합체, 효소-바탕물 상호작용을 연구하고 알려진 상호작용을 검증하거나 새로운 상호작용 파트너(예를 들어 신호통로 복합체)를 발견한다.

4. 기술우세

• IP: 높은 특이성을 가지고 있으며 항체-항원의 전일성 결합에 의존한다.

• 유연성: 마그네틱 펄 (간단한 작동, 자동화 호환) 또는 글리세린 (높은 결합 용량) 을 지원합니다.

• 회사는-IP: 체내 진실성: 체내 자연상태에서의 단백질 상호작용을 연구하고 비교적 진실한 단백질 상호작용을 반응할 수 있다.

5. 견본 유형

신선한 세포 (밀착 세포/부상 세포), 냉동 세포, 냉동 조직, 분해액 샘플.

6. 견본 수요

• 세포 샘플: 약 5 × 10 ^ 6 개 (6 cm 접시 2 개 또는 원심 튜브에 부유 세포 형태로 저장 또는 T25 병 2 개);

• 동존조직: 약 40mg, 분해액 샘플: 단백질 농도는 2mg/mg 이상이어야 하고, 단백질 총량은 3mg 이상이어야 한다.

7. 견본 준비 & 운송

• 살아있는 세포 샘플: 거리가 가까운 것은 신선한 샘플을 제공할 수 있으며, 그릇/T25병/원심관 내에 배양된 신선한 세포 샘플을 상온 택배 (늦어도 다음날 도착) 운송할 수 있으며, 본 시내는 플래시 또는 직접 배달할 수 있으며, 거리가 먼 것은 -80 ℃ 냉동 세포 드라이아이스 운송할 수 있다;

• 조직 샘플 & 분해액 샘플: -80 ℃ 냉동 보관 드라이아이스 운송.

8. 공급해야 할 시약

검사용 IB 항체 및 IP 항체

9. 실험주기

1~2주 (질량 스펙트럼 제외)

10. 기타

후속 검사 Western blot/단백질 스펙트럼