분자 실험 분자 상호 작용: Pull-down 드롭다운 실험

1. 기술 소개

Pull-down 실험라하 실험이라고도 불리는 체외 친화 순화 기술이다.

2. 기술원리

단백질을 특정 기질에 고정 (예:세파로스는), 그러나 세포 추출액이 이 기질을 지날 때 이 고정 단백질과 상호작용할 수 있는 배체 단백질은 흡착되고, 흡착되지 않은'불순물'은 세척액과 함께 흘러나온다.흡착된 단백질은 세척액이나 세척 조건을 바꾸어 회수할 수 있다.

3. 응용장면

1. 알려진 단백질의 상호작용 검증: 알려진 미끼 단백질과 상호작용이 가능한 먹잇감 단백질을 Pull-down 실험을 통해 먹잇감 단백질의 존재를 감지할 수 있다면 둘 사이의 상호작용 관계를 검증할 수 있다.

2. 미지의 단백질 상호작용 선별: 미끼 단백질과 세포분해액 또는 기타 단백질 혼합물을 Pull-down 실험한 후 결합된 단백질을 감정하여 미끼 단백질과 상호작용하는 미지의 단백질을 선별할 수 있다.

3. 단백질 복합체 구성 연구: Pull-down 실험을 통해 단백질 복합체를 분리한 후 복합체 중의 단백질을 감정하여 단백질 복합체의 구성 성분을 확정할 수 있다.

4. 단백질과 핵산 상호작용 연구: DNA Pull-down과 RNA Pull-down 기술을 이용하여 전사인자와 시동자의 결합, RNA 결합단백질과 RNA의 결합 등 단백질과 DNA, RNA 간의 상호작용을 연구할 수 있다.

4. 기술우세

목적 단백질과 검사 단백질이 직접적인 상호작용을 일으킬 수 있는지 확인할 수 있다.

5. 견본 유형

신선한 세포 (밀착 세포/부상 세포), 냉동 세포, 냉동 조직, 분해액 샘플.

6. 견본 수요

세포 샘플: 약 5 × 10 ^ 6 개 (6 cm 접시 2 개 또는 원심 튜브에 부유 세포 형태로 저장 또는 T25 병 2 개);

냉동 저장 조직: 약 40mg;

분해액 샘플: 단백질 농도는 2mg/mg 이상이어야 하며, 단백질 총량은 3mg 이상이어야 한다.

7. 견본 준비 & 운송

살아있는 세포 샘플: 거리가 가까운 것은 신선한 샘플을 제공할 수 있으며, 그릇/T25병/원심관 내에 배양된 신선한 세포 샘플을 상온 택배 (늦어도 다음날 도착) 운송할 수 있으며, 본 시내는 플래시 또는 직접 배달할 수 있으며, 거리가 먼 것은 -80 ℃ 냉동 세포 드라이아이스 운송할 수 있다;

조직 샘플 & 분해액 샘플: -80 ℃ 냉동 보관 드라이아이스 운송.

8. 공급해야 할 시약

WB 검사를 수행하려면 해당 항체를 제공해야 합니다.

9. 실험주기

3-4주 (질량 스펙트럼 제외)

10. 기타

RNA-Pull-down、DNA-Pull-down、GST-Pull-down，구체적으로 종속 및 목표 단백질을 고지하고, 후속 검사 Western blot/단백질 스펙트럼, 융합 단백질 체외 표현 비용은 구체적인 목표 단백질에 따라 별도로 평가하여 계산해야 한다.

의 전사 인자, 일부 실험에서도 재조합 표현의 단백질을 사용할 수 있다.

6. 견본 수요

세포 샘플: 약 1 × 10 ^ 7 개 (10 cm 접시 1 개 또는 원심관에 부유 세포 형태로 저장 또는 T75 병 1 개);

냉동 저장 조직: 약 400mg;

식물조직: 약 2g, 세포핵단백질, 순화전사인자, 재조합표현단백질 등: 매 막마다 적어도 50ul을 제공하고 농도는 0.5mg/ml보다 낮지 않다.

7. 견본 준비 & 운송

살아있는 세포 샘플: 거리가 가까운 것은 그릇/T75병/원심관 내에 기르는 신선한 세포 샘플을 상온 택배 (늦어도 다음날 도착) 로 운송할 수 있으며, 본 시내는 플래시 또는 직접 배달할 수 있고, 거리가 먼 것은 -80 ℃ 의 냉동 세포 드라이아이스 운송할 수 있다;

조직 샘플 & 기타 액체 샘플: -80 ℃ 냉동 건조 얼음 운송.

8. 공급해야 할 시약

결합단백질 특이성 항체는 50ul 이상이며 농도는 0.5mg/ml 이상이다.

9. 실험주기

2-3주

10. 기타

탐침 서열, 탐침 서열이 없으면 DNA 결합 단백질 관련 정보 또는 관련 문헌을 제공하십시오.