분자 상호 실험: ChIP 염색질 면역 공침전

1. 기술 소개

ChIP (염색질 면역 공침전) 는 단백질과 DNA의 상호작용을 연구하는 핵심 기술로 전사인자 결합 비트 감정, 표관 유전체 수식 분석 등 분야에 널리 응용된다.

2. 기술원리

항원 항체의 특이적 결합을 이용해 목적 단백질과 결합한 DNA 조각을 침전시켜 DNA 서열에 결합한 조절 단백질을 사실적으로 반영할 수 있다.

3. 응용장면

1.기록 조정 연구: 기록 인자를 감정한다(예를 들어p53, NF-B)의 DNA 결합 비트.

2. 표관유전학: 분석팀 단백질 수식(예를 들어H3K27me3) 유전자 침묵에서의 역할.

3.질병 메커니즘: 암에서 이상 단백질 (예: MYC) 의 게놈 결합 패턴을 탐색합니다.

4. 가능qpcr, seq 등 기술 연용.

4. 기술우세

ChIP는 포름알데히드 교련을 통해 세포 내 실제 상태에서 단백질과 DNA의 동적 결합을 포획해 체외 실험의 가짜 음성이나 가짜 양성을 피하며, 특히 전사인자 등 짧은 결합 사건을 연구하기에 적합하다.그리고특이성 항체는또목표 단백질이 결합된 DNA 조각을 정확하게 풍부하게 수집하고, qPCR 또는 시퀀싱 (ChIP-seq) 과 결합하여 천세포급으로 낮은 검사 (예: 최적화 시약함) 를 실현하여 감도가 현저하다, 그리고 광범위한 적용성을 제공합니다.

5. 견본 유형

신선한 세포 (밀착 세포/부상 세포), 냉동 세포, 냉동 조직, 교련 후 세포 샘플.

6. 견본 수요

세포 샘플: 약 1 × 10 ^ 7 개 (10 cm 접시 1 개 또는 원심관에 부유 세포 형태로 저장 또는 T75 병 1 개);

냉동 저장 조직: 약 70mg;

교련 세포 샘플: 1% 포름알데히드 교련 처리 세포를 사용합니다.

7. 견본 준비 & 운송

살아있는 세포 샘플: 거리가 가까운 것은 그릇/T75병/원심관 내에 기르는 신선한 세포 샘플을 상온 택배 (늦어도 다음날 도착) 로 운송할 수 있으며, 본 시내는 플래시 또는 직접 배달할 수 있고, 거리가 먼 것은 -80 ℃ 의 냉동 세포 드라이아이스 운송할 수 있다;

조직 샘플 & 교련 후 세포 샘플: -80 ℃ 냉동 보관 드라이아이스 운송.

8. 공급해야 할 시약

검사용 ChIP급 항체.

9. 실험주기

1~2주 (시퀀스 제외)

10. 기타

후속 테스트RT PCR을 선택할 경우 후속 테스트의 비트를 제공해야 합니다.

포름알데히드 교련 세포의 구체적인 절차: ① 세포 그릇에 종농도 1% 의 포름알데히드를 넣고 37 ℃ 로 10분 동안 부화한다.② [1mM PMSF, 1μg/ml 펩타이드와 1μg/ml pepstatin A]를 함유한 차가운 DPBS를 사용하여 세포를 두 번 세척한다.③ 프로테아제 억제제가 함유된 차가운 DPBS 2ml에 세포를 긁어 원심관으로 옮겨 냉동 보관한다.