분자 상호 실험: RIP (RNA 면역 침전)

1. 기술 소개

RIP (RNA Immunoprecipitation, RNA 면역 침전) 기술은 전사 후 RNA와 단백질의 상호작용을 연구하는 데 사용되는 RNA 결합 단백질 (RBP) 의 기능 메커니즘을 밝혀내는 핵심 실험 방법이다.

2. 기술원리

RIP는 대상 단백질에 대한 항체를 이용해 해당 RNA-단백질 복합체를 침전시켜 분리순화를 통해 복합체에 결합한 RNA를 RT-PCR 검증 또는 시퀀싱 분석한 결과 생물학적 설득력을 더했다.

3. 응용장면

1.기본 메커니즘: RNA 결합 단백질 (예: AGO2, Polycomb 복합체) 의 기능 및 RNA 조정 네트워크를 분석합니다.

2.질병 연구: 질병과 정상 샘플에서 RNA-단백질의 상호 작용 차이를 비교하고 암 관련 lncRNA와 같은 잠재적 인 생물 표지자를 발견합니다.

3.약물 개발: RNA-단백질 상호 작용에 대한 약물의 영향을 평가하고 표적 선별을 가속화합니다.

4. 기술우세

1.민감도 높음: 저풍도 RNA와 단백질의 미약한 상호작용을 측정할 수 있다.

2.동적 범위가 넓다: 소량의 세포 (예: 5 × 10 ⁷개) 부터 복잡한 조직 샘플까지 모두 적용된다.

3.다중 그룹 학련용: RNA-Seq, CLIP-Seq 또는 ChIP-Seq와 결합하여 다차원 조정 네트워크를 구축한다.

5. 견본 유형

신선한 세포 (밀착 세포/부상 세포), 냉동 세포, 냉동 조직, 교련 후 세포 샘플.

6. 견본 수요

세포 샘플: 약 1 × 10 ^ 7 개 (10 cm 접시 1 개 또는 원심관에 부유 세포 형태로 저장 또는 T75 병 1 개);

냉동 조직: 약 70mg; 교련 세포 샘플: 1% 포름알데히드 교련 처리 세포를 사용합니다.

7. 견본 준비 & 운송

살아있는 세포 샘플: 거리가 가까운 것은 그릇/T75병/원심관 내에 기르는 신선한 세포 샘플을 상온 택배 (늦어도 다음날 도착) 로 운송할 수 있으며, 본 시내는 플래시 또는 직접 배달할 수 있고, 거리가 먼 것은 -80 ℃ 의 냉동 세포 드라이아이스 운송할 수 있다;

조직 샘플 & 교련 후 세포 샘플: -80 ℃ 냉동 보관 드라이아이스 운송.

8. 공급해야 할 시약

검사용 ChIP급 항체.

9. 실험주기

1~2주 (시퀀스 제외)

10. 기타

후속 테스트RT PCR을 선택할 경우 후속 테스트의 비트를 제공해야 합니다.

포름알데히드 교련 세포의 구체적인 절차: ① 세포 그릇에 종농도 1% 의 포름알데히드를 넣고 37 ℃ 로 10분 동안 부화한다.② [1mM PMSF, 1μg/ml 펩타이드와 1μg/ml pepstatin A]를 함유한 차가운 DPBS를 사용하여 세포를 두 번 세척한다.③ 프로테아제 억제제가 함유된 차가운 DPBS 2ml에 세포를 긁어 원심관으로 옮겨 냉동 보관한다.