쥐 백혈구 매개체 - 2ELISA 시약함

쥐 백혈구 셀룰로오스-2ELISA 키트

배경 설명:

인터루킨2 (IL-2) 는 기체 면역 응답에서 중요한 역할을 하는 다효성 세포인자다.1976년에 Morgan에 의해 생쥐의 비장세포 배양 상청에서 발견되었는데, T세포의 장기 배양을 잘 촉진하고 유지할 수 있기 때문에 T세포 성장인자라고 불렀고, 1979년에 IL-2로 통일적으로 명명되었다.생쥐 IL-2는 아미노산 잔기 133개를 함유하고 있으며 분자량은 15.5kDa이다.IL-2의 중요한 역할은 T림프구의 증식과 분화를 유도하는 것이며, 또한 IL-2는 다양한 세포의 면역 응답을 조절한다.체내에서 IL-2는 항종양, 항미생물감염, 이식배척과 자가면역 및 면역조절 등을 일으키는 역할을 한다.

검측 원리：

Solarbio(Solarbio는®)ELISA 키트는 이중 항체 협심법에 기반한 효소 결합 면역 흡착 검사 기술을 사용한다.항생쥐 IL-2 단클론 항체 패키지를 효소 표지판에 부착한다;사다리꼴로 희석된 표준품과 미리 희석된 샘플을 각각 첨가하면 표준품과 샘플의 생쥐 IL-2는 효소 표지판의 가방 피항체와 충분히 결합한다.판을 씻은 후 바이오매스 항생쥐 IL-2 항체를 첨가하는데, 이 항체는 판에 항체에 포획된 표준품과 샘플 중의 생쥐 IL-2와 특이성 결합을 일으킨다;세판 후 매운 뿌리 과산화물 효소(HRP) 표기된 스트렙토마이신 친화소를 첨가하면 바이오매스와 스트렙토마이신 친화소가 강도 높은 비공가 결합을 일으킨다.세판 후 발색제 바탕물인 TMB를 첨가하면 반응구멍에 시료에 다른 농도의 생쥐 IL-2가 존재하면 HRP는 무색 TMB를 서로 다른 깊이(상관관계)가 있는 파란색 물질로, 종료액을 넣으면 반응구멍이 노란색으로 변한다.그런 다음 람다 max = 450 nm(OD=450nm)에서 반응공 시료의 흡광도(OD)를 측정하고 시료의 생쥐 IL-2 농도는 OD와 정비례하며 표준 곡선과 4개 파라미터 의합 소프트웨어를 그려 시료의 생쥐 IL-2 농도를 계산할 수 있다.

원리도:

참고 사항:※※※

• 시약함은 유효기간 내에 사용해야 하며, 기한이 지난 시약은 사용하지 마십시오.
• 시약함은 사용하지 않을 때는 2-8 ℃ 냉장고에 보관해야 하며, 이미 재용되었지만 다 사용하지 않은 표준품은 버리십시오.
• 시약함 사용 전 실온 회복 30 min，또한 시약함 안의 각종 성분과 제조한 샘플을 충분히 혼합한다.
• 시험에서 표준품과 견본은 복공검측을 권장하며 시약을 첨가하는 순서는 *를 유지해야 한다.
• 교차 오염을 방지하기 위해 시험에서 1회성 시험관, 총머리, 봉판막(※) 및 정제 플라스틱 용기..
• 농축 바이오매스 항체와 농축 효소 결합물의 부피가 비교적 적어, 운송 과정에서 미량의 액체가 관벽과 병에 묻을 수 있다

뚜껑을 덮고 사용하기 전에 원심처리(5-10S면 됩니다)하여 관벽의 액체가 관밑부분에 집중되도록 하고 취용할 때 이액기로 조심스럽게 몇번 불어주세요.

• 시약함의 농축 세척액과 종료액이 통용될 수 있는 것 외에 다른 출처 시약함에 포함된 시약을 사용하지 마십시오

이 키트의 개별 성분을 대체합니다.

• 결과가 정확하도록 매번 검사할 때마다 표준 곡선을 만들어야 한다.

보안 팁:시약함의 종료액은 산성 용액이므로 작업자는 사용 시 장갑을 착용하고 방호에 주의하십시오.조작과정에서도 시약이 피부와 눈에 닿지 않도록 해야 하며 부주의로 접촉하면 대량의 맑은 물로 세척해야 한다.혈액 샘플 및 기타 체액 샘플을 검사할 때, 국가 생물 실험실 안전 방호 관련 관리 규정에 따라 집행하십시오.

시약함 구성 및 저장：

자체 실험 기자재 (제공 안 함, 대리 구매 가능)

• 효소 측정기(주 파장 450nm, 참조 파장 630nm)
• 고정밀 이액기 및 일회용 흡입기: 0.5-10, 2-20, 20-200, 200-1000μl
• 세판기 또는 병
• 37℃부화 상자
• 쌍증수, 이온제거수, 측량기 등
• 희석용 폴리프로필렌 시험관

샘플 수집 및 저장:

• 세포배양상청:

세포배양기를 무균원심관으로 옮겨 4℃ 조건에서 1000×g 원심분리를 10min 한 뒤 상청 등량을 작은 EP관에 나눠 담아 -20 ℃ 에서 보존(24시간 내 검사하면 2-8 ℃ 에 넣어 저장할 수 있음)해 반복적으로 얼지 않도록 한다.

• 혈청 샘플:

실온 혈액이 20min 자연 응고된 후, 4 ℃ 조건에서 1000 × g 원심 10min, 그리고 상청 등량을 작은 EP관에 나누어 장착하여 -20 ℃ 에서 보존 (24시간 내 검사하면 2-8 ℃ 에 넣어 저장할 수 있음), 보존 과정에서 침전이 있으면 다시 원심을 분리하여 반복적으로 얼지 않도록 하십시오.

• 혈장 샘플:

항혈응고제를 함유한 관에 전혈을 수집하고 표본의 실제 요구에 따라 EDTA, 구연산나트륨 또는 간소를 항응고제로 선택하여 20min을 혼합하고 4 ℃ 조건에서 1000×g 원심분리 10min을 한 다음 상청 동량을 작은 EP관에 나누어 -20 ℃ 에서 보존 (24시간 내 검사하면 2-8 ℃ 에 넣어 저장) 하여 반복적으로 얼지 않도록 한다.

※참고:혈청 혈장 샘플은 검사 결과에 영향을 주지 않도록 용혈, 고지혈지 샘플의 사용을 피한다;만약 견본중의 표적물의 검측농도가 표준품의 고가치보다 높다면 견본을 적당한 배수로 희석한후 검측하고 정식실험전에 예비실험을 하여 희석배수를 확정할것을 건의한다.

시약 준비：

• 시약 회온: 먼저 실험 전 30min에 시약 상자, 측정 대기 샘플을 실온에 배치하고, 농축 세척액이 결정이 나타나면 결정이 모두 용해될 때까지 37 ℃ 의 온욕을 넣으십시오.
• 조제세제: 희석된 세제의 사용부피를 미리 계산한 다음 쌍증수나 이온제거수로 20배의 농축세제를 1배의 응용액으로 희석시키고 다 쓰지 않은 농축세제는 4℃ 냉장고에 넣어 보관한다.

3. 표준품 그라데이션 희석: 표준품/샘플 희석액 (SR1) 1ml 동결건조 표준품에 넣고 15분간 정적 후 * 용해된 후 가볍게 혼합 (농도 1000pg/ml) 한 다음 다음 농도: 1000, 500, 250, 125, 62.5, 31.25, 15.625, 0pg/ml에 따라 희석한다.복용된 표준품 원액 (1000pg/ml) 을 다 쓰지 않은 것은 폐기하거나 필요에 따라 1회 용량에 따라 나누어 포장하고 -20~80 ℃ 냉장고에 저장해야 한다. 구체적으로 아래 그림과 같다.

4. 바이오매스 항체 작업액: 시험에 필요한 용량을 미리 계산하여 검측 희석액(SR2)으로 항체 농축액 100배를 1배 응용 작업액(희석 전 충분히 혼합)으로 희석하여 30분 이내에 반응구멍에 넣어 주십시오.

바이오매스 항체 작업액 구체화희석 방법다음과 같습니다.

5. 효소결합물 작업액: 매번 시험에 필요한 용량으로 배합하여 효소결합물 희석액(SR3)으로 100배 농축효소결합물을 1배 응용작업액(희석 전 원심분리)으로 희석하여 30분 이내에 사용하십시오.

효소 결합물 작업액 구체화희석 방법다음과 같습니다.

6. 세탁방법:

• 자동 세척판: 효소 표지판 구멍의 액체를 다 털어내고 두꺼운 흡수지에 마른다. 주입 세척액은 300ul/구멍이다. 주입과 흡출 간격은 30초, 세척판은 5회이다.
• 수공 세척판: 효소 표지판 구멍의 액체를 다 털어내고 두꺼운 흡수지에 말린 다음 세척병에 세척액 300ul/구멍을 넣고 30초 정지한 후 효소 표지판 구멍의 액체를 깨끗이 털어내고 두꺼운 흡수지에 말린 다음 세척판을 5회 한다.

테스트 단계:

결과 판단：

1. 효소표시기 450nm 파장으로 OD값을 측정한다.이중 파장 측정을 선택하고 파장을 630nm로 참조합니다. 이중 파장 측정을 할 수 없다면 450nm의 OD 측정값에서 630nm의 OD 측정값을 빼십시오.

2. 표준품, 샘플의 평균 OD값 계산: 각 표준품과 표본의 OD값은 0구멍의 OD값을 빼야 한다

3.표준품 농도를 가로 좌표로 하고, 흡광도 OD값을 세로 좌표로 하고, 소프트웨어로 표준 곡선을 그리며, 샘플의 IL-2 함량은 대응 OD값을 통해 표준 곡선에서 상응하는 농도를 환산할 수 있다.

4. 표본 OD값이 표준곡선 상한보다 높으면 적당히 희석한 후 재검측을 하고 농도를 계산할 때 희석배수를 곱한다.

매개변수 표징：

1. 데이터 및 표준 커브

이 그림은 참고용으로만 제공되며, 이번 시험 표준품이 그린 표준 곡선으로 생쥐 IL-2의 샘플 함량을 계산해야 한다

2. 감도:

낮은 검출 가능한 생쥐의 IL-2 농도는 7pg/ml에 달하며,

20개 제로 표준품 농도 OD의 평균값에 두 개의 표준 차이를 더하여 그에 상응하는 측정 가능한 농도를 계산한다.

3. 특이성:

생쥐 IL-2, 4, 6, 8, 10에 반응하지 않고 생쥐 IL-2, 4, 6, 8 등에 반응한다

4. 반복성:

판내, 판간 변이 계수 <10%

5. 회수율:

선택한 건강한 생쥐의 혈장·세포배양상청에 농도가 다른 생쥐 IL-2 3개를 넣어 회수율을 계산한다.

6. 선형 희석：

각각 선정된 건강한 생쥐 혈장과 세포배양상청 4개에 고농도 생쥐 IL-2를 넣어 표준 곡선 동력학 범위 내에서 희석해 선형을 평가한다.

참고문헌：

1. 요코타, T. 등 (1985) Proc.나틀Acd.Sci. USA 82:68.

2. 카시마, N. 등. (1985) 자연 313:401.

3. 신관, A. 등 (1984) Nucl.산 해상도 12:9323.

4. 토마스, R. 등 (2003)J Leukocyte 바이오.961-965

5. 브론테, V. 등 (1995) J. Immunol.5282-5292

6. 요코타, T. 등 (1985) Proc.나틀아카드.Sci. USA 82:68.

7. 카시마, N. 등. (1985) 자연 313:401.

일반적인 문제 및 해결 방법：

쥐 백혈구 셀룰로오스-2ELISA 키트주문 지침:

1. 대부분의 제품은 현물을 갖추고 있으며 일반적으로 당일 발송을 주문할 수 있습니다.
2. 일부 비상용 상품은 1~2일 전에 예약해야 하고, 해외 선물은 3~6주 전에 예약해야 한다.
3. 일부 제품의 가격은 화물 기간, 차수 등 요소에 따라 변화가 발생할 수 있으며, 변동이 있을 경우 주문 당일 새 가격을 기준으로 한다.
4. 매일 주문 마감 시간은 16시 정각이고, 일부 도시는 17시 정각까지 도착할 수 있으며, 마감 시간을 초과하여 당일 발송할 수 없는 것은 다음날 발송을 안배할 것이다.
5. 물품대금을 처리한 후에 송장 등을 수취인의 주소, 성명, 등과 함께 팩스, 문자메시지, 등 형식으로 우리에게 통지해 주십시오.

ELISA 키트운송 지침:

극저온 제품: 극저온 제품 운송 과정 중 드라이아이스를 추가하여 운송한다.드라이아이스로 제품을 싸서 거품함으로 밀봉하고 테이프로 거품함을 층층이 붙여 솔레보의 상자에 넣은 다음 합작택배에 교부하여 안전하고 빠르고 능률적이며 안심하고 고객의 손에 보내 제품의 성질이 하나로 안정되도록 보장하고 당신의 실험을 보호합니다.
저온 제품: 저온 제품 운송 과정 중 솔레보 아이스팩을 추가하여 운송한다.사전에 아이스팩으로 제품을 싸서 거품박스로 밀봉하고 테이프로 거품박스를 단단히 밀봉한 다음 솔레보의 상자 (보온효과가 적으면 일주일간 지속될수 있다.) 에 넣은후 합작택배에 교부하여 안전하고 빠르고 능률적이며 안심하고 고객의 손에 보내 제품의 성질이 하나로 안정되도록 보장하고 당신의 실험을 보호한다.
상온 제품: 상온 제품은 운송 과정에서 얼음이나 특수 포장을 할 필요가 없다.제품은 회사 창고 직원이 신속하게 배급하여 정확하고 빠르고 효율적인 택배로 제품이 신속하게 당신의 손에 전달되도록 보장합니다.