아세톤산 탈수소효소(PDH) 활성 검사 키트 미량법

아세톤산 탈수소효소(PDH는) 활성 검사 키트 설명서 미량법

주의: 본 제품의 시약은 변동이 있으니 주의하시고 엄격히 이 설명서에 따라 조작하십시오.

품번:BC0385는

사양:100T/96S

제품 구성: 사용하기 전에 시약 부피와 병 안의 부피가 일치하는지 진지하게 확인하십시오. 의문이 있으면 즉시 솔레보 직원에게 연락하십시오.

아세톤산 탈수소효소(PDH) 활성 검사 키트 미량법

아세톤산 탈수소효소(PDH) 활성 검사 키트 미량법

용액의 제조:

1. 시약 2：휘발성 시약을 위해 사용 후 가능한 한 빨리 밀봉하고,-20℃저장.

2. 작업액의 조제: 사용하기 전에5.75ml시약 4, 1개 시약 5,0.45ml시약 6,1.75ml시약 7 을 한 병 의 시약 3 중 혼합 용해 대기 중 으로 옮기다(총15.45mL, 약속85T）; 다 쓸 수 없는 시약-20℃저장할 수 있는 분리 저장4주.반복되는 동융을 피하다.

제품 설명:

PDH는（EC 4.1.1.1) 동물, 식물, 미생물 및 배양 세포에 널리 존재하는 아세톤산 탈수소 효소 복합체(PDHC)아세톤산 산화 탈카르복실을 촉매하는 제한 효소, 아세톤산 탈북을 촉매한다, 당효해와 카르복실산 순환을 연결한다.

PDH는촉매 아세톤산 탈수소, 동시에 환원2,6-디클로로페놀 인디고페놀 (2,6-DCPIP는), 이로 인해605nm빛 흡수의 감소.

Pyruvic 산 + 티아민 Pyrophosphate Hydroxyethyl 티아민 Pyrophosphate

Dichlorophenolindophenol (605nm) + Hydroxyethyl Thiamine Pyrophosphate는 Dichlorophenolindophenol을 감소했습니다

참고: 실험 전에 선택 권장2-3예상 차이가 큰 견본을 가지고 사전 실험을 하다.만약 견본의 흡광값이 측정범위내에 없다면 희석하거나 견본량을 증가하여 검측하는것을 건의한다.

필요한 장비와 장비:

가시 분광 광도계/효소표시기, 수욕솥, 탁상원심분리기, 조절식이액기, 미량유리비색그릇/96공판, 연구발/균장기, 얼음, 증류수.

작업 단계:

하나,샘플 처리(측정 대기 샘플의 양을 적절히 조정할 수 있으며, 구체적인 비율은 문헌을 참고할 수 있다.)

1. 조직: 계약 체결0.1g조직, 가입1ml시약 1 합10μL시약 2, 얼음욕 균장기나 연발 균장으로 충분히 연마하고,4 ℃ 11000g원심10분, 잘 찾아서,얼음 위에 놓고 기다리다측정하다.

2. 세포 또는 박테리아 샘플: 먼저 수집500만세포나 세균은 원심관 안으로 가서 원심을 분리한 후 상청을 버린다;나중에 가입1mL시약 1 합10μL시약 2, 얼음욕 초음파 파쇄 세균 (전력200 W, 초음파3 초, 간격7 초, 총 시간5 분）；그리고11000g，4℃, 원심분리10 분，

채취하여 얼음 위에 놓고 측정을 기다리다.

3. 혈청 (장)기타 액체 샘플: 직접 테스트합니다.용액이 탁하면 원심분리 후 상청으로 측정한다.

2. 측정절차

1、보이다분광 광도계 또는 효소 측정기 예열30분이상, 파장 조절605nm, 분광 광도계 증류수를 0으로 조절한다.

2、샘플당 필요180μL작업액,실험의 필요에 따라일정량의 작업액을 꺼내 놓다37℃(포유류) 또는25℃(기타 종)수욕솥 속수욕10분。

3、공백관: 미량 비색 그릇 또는96슬롯에 추가180μL작업액과10μL물, 혼합, 즉시 기록605nm처10s처흡광치A1와1분10s후흡광치A2는, 계산ΔA는공백= A1-A2。빈 튜브는 측정만 하면 됩니다.1-2차。

4、측정관: 미량의 비색 그릇이나96슬롯에 추가180μL작업액과10μL샘플, 혼합, 즉시 기록605nm처10s처흡광치A3와1분10s후흡광치A4, 계산ΔA는측정= A3-A4。

셋,PDH는활성 계산

a.미량 비색 그릇으로 측정한 계산 공식은 다음과 같다.

1. 샘플 단백질 농도로 계산하다

단위 정의: 각mg조직 단백질은 반응 체계에서 분당 소모된다1nmol 2,6-디클로로페놀 인디고페놀은 효소 활성 단위로 정의된다.

PDH는활성 (U/mg 프로트）=[(ΔA)측정ΔA공백)÷（ε × D）× V반총×10⁹] ÷ (Cpr×V)모양÷T

= 904.762× (ΔA)측정ΔA공백÷Cpr

2. 견본의 질량에 따라 계산하다.

단위 정의: 각g조직은 반응 체계에서 분당 소모한다1nmol 2,6-디클로로페놀 인디고페놀은 효소 활성 단위로 정의된다.

PDH는활성 (U / G품질)=[(ΔA)측정ΔA공백)÷（ε × D）× V반총×10⁹] ÷ (V)모양÷V견본 합계×W) ÷T

= 913.81× (ΔA)측정ΔA공백÷W

3. 세균 또는 세포 수로 계산하다

단위 정의: 각1만 개의 세균이나 세포가 반응 체계에서 분당 소모된다1nmol 2,6-디클로로페놀 인디고페놀은 효소 활성 단위로 정의된다.

PDH는활성 (U/10⁴셀）=[(ΔA)측정ΔA공백×V반총÷（ε × D）×10⁹] ÷ (V)모양÷V견본 합계×500)÷T

= 1.828× (ΔA)측정ΔA공백)

4. 견본 부피에 따라 계산하다.

단위 정의: 각mL액체반응 체계에서분당 소모1nmol 2,6-디클로로페놀 인디고페놀은 효소 활성 단위로 정의된다.

PDH는활성（U/mL의）=[(ΔA)측정ΔA공백×V반총÷(ε×d)×10⁹]÷V모양÷T

= 904.762× (ΔA)측정ΔA공백)

V반총: 반응체계 총체적,1.9×10^-4L；ε：2,6-이염화인돌페놀몰 소광계수,2.1×10⁴L/mol/cm의；d: 비색 그릇 광경,1cm；V샘플: 샘플 볼륨을 추가하고,0.01ml；V샘플 총: 시약 1과 시약 2체적을 첨가하고,1.01ml；T: 반응 시간,1분；Cpr는: 샘플 단백질 농도,mg/mL의；W: 샘플 품질,g；500: 세균 또는 세포 총수,500만.

b.쓰다96대시보드 측정의 계산 공식은 다음과 같습니다.

1．샘플 단백질 농도로 계산하다

단위 정의: 각mg조직 단백질은 반응 체계에서 분당 소모된다1nmol 2,6-디클로로페놀 인디고페놀은 효소 활성 단위로 정의된다.

PDH는활성 (U/mg 프로트）=[(ΔA)측정ΔA공백×V반총÷（ε × D）×10⁹] ÷ (Cpr×V)모양÷T

= 1809.524× (ΔA)측정ΔA공백÷Cpr

2．견본의 질량에 따라 계산하다.

단위 정의: 각g조직은 반응 체계에서 분당 소모한다1nmol 2,6-디클로로페놀 인디고페놀은 효소 활성 단위로 정의된다.

PDH는활성 (U / G품질)=[(ΔA)측정ΔA공백×V반총÷（ε × D）×10⁹] ÷ (V)모양÷V견본 합계×W) ÷T

= 1827.62× (ΔA)측정ΔA공백÷W

3．세균 또는 세포 수로 계산하다

단위 정의: 각1만 개의 세균이나 세포가 반응 체계에서 분당 소모된다1nmol 2,6-디클로로페놀 인디고페놀은 효소 활성 단위로 정의된다.

PDH는활성 (U/10⁴셀）=[(ΔA)측정ΔA공백×V반총÷（ε × D）×10⁹] ÷ (V)모양÷V견본 합계×500) ÷T

= 3.655× (ΔA)측정ΔA공백)

4．견본 부피에 따라 계산하다.

단위 정의: 각mL액체반응 체계에서분당 소모1nmol 2,6-디클로로페놀 인디고페놀은 효소 활성 단위로 정의된다.

PDH는활성（U/mL의）=[(ΔA)측정ΔA공백×V반총÷(ε×d)×10⁹]÷V모양÷T

= 1809.524× (ΔA)측정ΔA공백)

V반총: 반응체계 총체적,1.9×10^-4L；ε：2,6-이염화인돌페놀몰 소광계수,2.1×10⁴L/mol/cm의；d：96공판 광경,0.5cm의；V샘플: 샘플 볼륨을 추가하고,0.01ml；V샘플 총: 시약 1과 시약 2체적을 첨가하고,1.01ml；T: 반응 시간,1분；Cpr는: 샘플 단백질 농도,mg/mL의；W: 샘플 품질,g；500: 세균 또는 세포 총수,500만.

참고 사항:

1、측정 과정 중 모든 샘플을 얼음 위에 놓고2변성과 불활성을 방지하기 위해 시간 내에 검사하다.

2、측정관의ΔA는값은0.01-0.25사이, 만약 측정관의ΔA는보다 큰 값0.25, 샘플을 희석해야 합니다.공식에 희석 배수를 곱하다.만약 측정관의ΔA는값작다음0.01, 견본량을 늘린후 다시 측정해야 하며 동시에 계산공식을 수정하는데 주의를 돌려야 한다.

3、시약 1 에는 일정 농도 의 단백질 이 함유되어 있기 때문 이다1mg/mL), 그래서 시료 단백질 농도를 측정할 때 빼야 한다시약 1의 단백질 함량.

실험 인스턴스:

1、取0.1g쥐 간가입1ml시약 1 합10μL시약 2, 얼음욕 균장기나 연발 균장으로 충분히 연마하고,4℃、11000g원심10분, 청치빙상을 취하여 측정절차에 따라 조작, 사용미량의 석영 비색 그릇측정계산ΔA는측정=A3-A4=1.3106-1.1183=0.1923，ΔA는공백=A1-A2 =1.3325-1.3314=0.0011, 샘플의 질량에 따라 효소가 살아있는 것을 계산한다:

PDH는활성(U/g)품질= 913.81× (ΔA)측정ΔA공백÷W=1747 U/g질량.

관련 발표 문헌:

[1]Peng S, Wang Y, Zhou Y, et al. 희귀한 ginsenosides는 대사의 유연성을 조절함으로써 지질 과부하로 인한 심근 인식물의학, 2019, 58 : 152745.

참조 문서:

[1]Guitart M, Andreu A L, García-Arumi E, et al. FATP1은 미토콘드리아로 지역화되어 기기기골 근육관에서 피루바테이트 해수산酶 활동을 향상시킵니다 [J].Mitochondrion, 2009, 9(4) : 266-272.

관련 제품군:

BC0710/BC0715 α-케톤펜산 탈수소효소(α-KGDH) 활성 검사 키트

BC2150/BC2155구연산(CA는) 함량 검사 키트

BC0950/BC0955호박산 탈수소효소(SDH는) 활성 검사 키트