결합상태 전분 합성효소 활성 검측 시약함 미량법

결합상태 전분 합성효소 활성 검측 시약함 미량법

주의: 정식으로 측정하기 전에 반드시 취한다2-3예상 차이가 비교적 큰 견본을 예측하여 결정하다.

상품 번호：BC3295

사양:100T/96S

제품 내용:

추출액：액체 100mL×1병, 4 ℃ 보존;

시약 1: 30mL×1병, 4 ℃ 보존;

시약 2: 분제 × 1병, 4 ℃ 보존;

시약 3: 분제 × 1병, -20 ℃ 보존;

시약 4: 분제 × 2병, 4 ℃ 보존;사용하기 전에 시약 5mL를 충분히 섞어 준비한다.

시약 5: 분제 × 1병, 4 ℃ 보존;사용하기 전에 시약 10mL를 충분히 섞어 준비한다.

시약 6: 분제 × 1지, -20 ℃ 보존;사용하기 전에 500μL의 쌍증수를 첨가하여 충분히 용해하여 준비한다;

시약 7: 액체 250 μL × 2지, -20 ℃ 보존;

시약 8: 액체 12.5 μL × 2자루;각 임용 전에 용해된 4mL 시약 4를 첨가한다.

반응액Ⅰ의 구성:사용하기 전에 시약 2에 14mL 시약 1을 첨가하여 천천히 가열하여 점차 온도를 올려 용해하게 하고 랭각한후 이를 시약 3혼합용해하게 한다.이렇게 하면 두 차례로 나누어 조제하고 측정할 수 있다.

제품 설명:

GBSS (EC 2.4.1.21) 는 전분체에 속박 상태로 존재하며, 전분 사슬의 연장 반응을 촉매하며, 주로 직연 전분의 합성을 담당한다.

GBSS는 ADPG와 전분 유인물(글루코올) 반응을 촉매해 포도당 분자를 전분 유인물에 옮기면서 ADP를 생성한다.더 나아가 반응 체계에 첨가된 아세톤산 효소, 헥사산 효소, 6-인산 포도당 탈수소 효소를 통해 NADP를 순차적으로 촉매한다⁺NADPH로 복원되는데, 이 중 NADPH 생성량은 이전 반응으로 생성된 ADP 수량과 정비례하며, 340nm에서 NADPH의 증가량을 측정함으로써 GBSS 활성을 계산할 수 있다.

필요한 장비와 장비:

자외선 분광 광도계/효소 측정기, 수욕솥, 탁상 원심분리기, 조절식 이액기, 미량 석영 비색 그릇/96공판(UV판), 연구발, 얼음과 증류수.

작업 단계:

1. 굵은 효소액 제조

약 0.1g의 조직을 취하여 1mL의 추출액을 넣고 얼음욕에 고르게 풀을 먹인다.10000g ，4 ℃ 원심 10min, 상청을 버리고 침전에 1mL 추출액을 충분히 혼합하여 얼음에 놓고 측정을 기다린다.

2. 측정절차

1. 분광광도계 또는 효소표시기는 예열 30min 이상, 조절파장 340nm, 증류수 제로.

2、EP관에 다음 시약을 순서대로 첨가

혼합 후 즉시 200 μL 미량의 석영 비색 그릇 또는 96 공판을 옮기고 340 nm 파장에서 초기 흡광도 A1과 2 min 후의 흡광도 A2를 기록하여 A=A2-A1을 계산합니다.

참고:시약 2에 침전이 있으면 넣기 전에 충분히 용해하여 골고루 섞어야 한다.

셋,GBSS는활성 계산

a.미량의 석영비색그릇을 사용하여 측정한 계산공식은 다음과 같다.

1. 표본단백질농도에 따라 계산한다.

단위의 정의: 각 mg 조직 단백질은 1mL 반응 체계에서 분당 촉매 생성 1nmol NADPH를 효소 활력 단위로 정의한다.

GBSS 활성(U/mg prot) = [A (ε × d) × V 측정] (Cpr × V 샘플 V 반총 × V 상청) T = 432 × A Cpr

이 방법은 스스로 샘플의 단백질 농도를 측정해야 한다.

2. 견본의 신선한 무게에 따라 계산한다

단위의 정의: 각 g 조직은 1mL 반응 체계에서 분당 1nmol NADPH를 촉매하여 생성하는 효소 활력 단위로 정의한다.

GBSS 활성(U/g 선중) = [A÷(ε×d)×V 측정×10⁹] (W V 추출 × V 샘플 V 반총 × V 상청) T = 432 × A W.

V 측정: 부피 측정, 0.26m L;V-샘플: 샘플 볼륨, 0.1m L 추가;V 반총: 반응 부피, 0.31mL; V 상청: 상청액 부피 첨가, 0.15mL; V 추출: 추출액 부피 첨가, 1 × 10^-3L;ε: NADPH 무어 소광 계수, 6.22 × 10^-3mL/nmoL/cm；d: 비색 그릇 광경, 1cm; T: 반응 시간, 2 min;Cpr: 샘플 단백질 농도,mg/mL；W: 샘플 품질,g。

b.사용96구멍 측정의 계산 공식은 다음과 같습니다.

1. 표본단백질농도에 따라 계산한다.

단위의 정의: 각 mg 조직 단백질은 반응 체계에서 분당 1nmol NADPH 생성을 촉매하여 효소 활력 단위로 정의한다.

GBSS 활성(U/mg prot) = [A (ε × d) × V 측정] (Cpr × V 샘플 V 반총 × V 상청) T = 720 × A Cpr.

이 방법은 스스로 샘플의 단백질 농도를 측정해야 한다.

2. 견본의 신선한 무게에 따라 계산한다

단위의 정의: 각 g 조직은 반응 체계에서 분당 촉매 생성 1nmol NADPH를 효소 활력 단위로 정의한다.

GBSS 활성(U/g 선중) = [A (ε×d) × V 측정] (W V 추출 × V 샘플 V 반총 × V 상청) T = 720 × A W.

V 측정: 부피 측정, 0.26m L;V-샘플: 샘플 볼륨, 0.1m L 추가;V 반총: 반응 부피, 0.31mL; V 상청: 상청액 부피 첨가, 0.15mL; V 추출: 추출액 부피 첨가, 1 × 10^-3L;ε: NADPH 무어 소광 계수, 6.22 × 10^-3mL/nmoL/cm；d: 비색 그릇 광경, 1cm; T: 반응 시간, 2 min;Cpr: 샘플 단백질 농도,mg/mL；W: 샘플 품질,g。

결합상태 전분 합성효소 활성 검측 시약함 미량법주문 지침:

1. 대부분의 제품은 현물을 갖추고 있으며 일반적으로 당일 발송을 주문할 수 있습니다.
2. 일부 비상용 상품은 1~2일 전에 예약해야 하고, 해외 선물은 3~6주 전에 예약해야 한다.
3. 일부 제품의 가격은 화물 기간, 차수 등 요소에 따라 변화가 발생할 수 있으며, 변동이 있을 경우 주문 당일 새 가격을 기준으로 한다.
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