쥐 백혈구 셀룰로오스-1 베타

쥐 백혈구 매개체-1 베타 ELISA 시약함

배경 소개：

IL-1은 IL-1a, IL-1 베타 두 종류로 나뉘며, 사람과 생쥐의 IL-1 유전자는 2번 염색체에 위치하며 모두 7개의 외현자를 함유하고 있다.IL-1 전구체(ProIL-1)는 31kDa로 단백질 분해효소 분해를 통해 성숙한 IL-1 분자를 형성한다.IL-1은 서로 다른 종속 중에서 비교적 높은 동원성을 가지고 있다.아미노산 수준에서 IL-1α와 IL-1베타는 종속별 동원성이 각각 60%~70%와 75%~78%이다.IL-1α와 IL-1 베타 분자량은 약 17.5kDa, 등전점은 각각 5와 7, 동원성은 28% 이다.17kDa의 성숙한 생쥐 IL-1 베타는 면쥐와 생쥐의 IL-1 베타와 90% 의 아미노산 서열 동일성을 가지고 있으며, 개, 말, 고양이, 사람, 돼지, 원숭이의 IL-1 베타와 65~78% 의 동일성을 가지고 있다.

IL-1 베타는 주로 혈액 속의 단핵세포와 대식세포에서 생성되며, 성형세포, 소돌신경교세포, 부신피질세포, NK세포, 내피세포, 각질형성세포, 거핵세포, 혈소판, 뉴런, 중성립자세포, 성골세포, 허왕세포, 자양층세포, T세포와 성섬유세포도 IL-1 베타를 생성할 수 있다.IL-1은 광범위한 면역 조절 작용을 하며, 열을 내리고 염증을 유도하는 작용을 한다。

검측 원리：

Solarbio(Solarbio는®)ELISA 키트는 이중 항체 협심법에 기반한 효소 결합 면역 흡착 검사 기술을 채택하고 있다。장항생쥐IL-1은β단 클론 항체 패키지는 효소 표지판에 있습니다.각각 경도 희석된 표준품과 미리 희석된 견본, 표준품과 견본중의생쥐IL-1은β효소 표지판의 가방에 항체가충분히결합세판 후바이오매스 항성 첨가생쥐IL-1은β항체, 이 항체는 항체에 포획된 표준품과 샘플의 생쥐 IL-1을 판자에 싸고 있다β특이성 결합 발생;세판 후매운 뿌리 과산화물 효소 (HRP) 로 표시된 스트렙토마이신 친화소를 첨가하면 바이오매스와 스트렙토마이신 친화소가 발생한다고강도 비공가결합세판 후발색제 베이스 TMB 넣기，만약 반응구멍에 시료가 다른 농도의생쥐IL-1은βHRP는 무색 TMB를 서로 다른 깊이(상관관계)가 있는 파란색 물질로 만들고, 종지액을 넣으면 반응구멍이 노란색으로 변한다.그런 다음 람다 max = 450 nm(OD=450nm)부위 측정 반응 구멍 샘플 흡광도(OD), 샘플의생쥐IL-1은β농도와OD는표준 커브 및 쿼드 매개변수 맞춤 소프트웨어를 그리면 비례하여 계산 가능나샘플 중생쥐IL-1은β의 농도.

원리도:

참고 사항:※※※

• 시약함은 유효기간 내에 사용해야 하며, 기한이 지난 시약은 사용하지 마십시오.
• 시약함은 사용하지 않을 때는 2-8에 보관해야 한다℃ 냉장고, 이미 재용해하지만다 쓰지 못한 표준품은 버리세요.
• 시약함 사용 전부탁합니다실온에서 30 회복 분，그리고 시약함 속의 각종 성분과제조의견본.
• 시험에서 표준품과 견본은 복공검측을 권장하며 시약을 첨가하는 순서는 *를 유지해야 한다.
• 교차 오염을 피하기 위하여 시험에서 1회성 시험관, 총머리를 사용하시오，봉판막（※）플라스틱 용기를 깨끗하게 합니다..
• 농축 바이오매스 항체와 농축 효소 결합물의 부피가 비교적 적어, 운송 과정에서 미량의 액체가 관벽과 병에 묻을 수 있다

뚜껑을 덮고 사용하기 전에 원심처리(5-10S면 됩니다)하여 관벽의 액체가 관밑부분에 집중되도록 하고 취용할 때 이액기로 조심스럽게 몇번 불어주세요.

• 시약 상자에 있는 농축 세제를 제외하면와종지액은 통용할 수 있으므로, 다른 출처 시약함을 사용하지 마십시오포함된 시약이 키트의 개별 구성 요소를 대체합니다.
• 정확한 결과를 보장하기 위해 매번 검사필요표준 곡선을 만들다.

보안 팁:시약함의 종지액은 산성 용액,운영 인력은사용 시부탁합니다장갑을 착용하고 보호에 주의하십시오.작업 중에도시약이 피부와 눈에 닿지 않도록 하고, 부주의로 접촉하면 많은 양의 맑은 물로 세척하십시오.혈액 샘플 및 기타 체액 샘플을 검사할 때, 국가 생물 실험실 안전 방호 관련 관리 규정에 따라 집행하십시오.

시약함 구성 및 저장：

자체 실험 기자재 (제공 안 함, 대리 구매 가능)

• 효소 측정기(주 파장 450nm, 참조 파장 630nm)
• 고정밀 이액기 및 일회용 흡입기: 0.5-10, 2-20, 20-200, 200-1000μl
• 세판기 또는 병
• 37℃부화육성상자
• 쌍증수, 이온제거수, 측량기 등
• 희석용 폴리프로필렌 시험관

샘플 수집 및 저장:

• 세포배양상청:

세포 배양기 를 무균 원심관 으로 옮겨 4 ℃ 조건에서 1000×g 원심분리 10 min, 그리고 상청 등량을 작은 EP관에 나누어 장착하고 -20 ℃ 에서 저장(24시간 내 검사하면 2-8 ℃ 에 저장할 수 있다)반복적으로 얼지 않도록 한다.

• 혈청 샘플:

실온 혈액 자연 응고 20min 후 4 ℃ 조건에서 1000×g 원심분리 10 min, 그리고 상청 등량을 작은 EP관에 나누어 장착하고 -20 ℃ 에서 보존 (24시간 내에 검사하면 2-8 ℃ 에 넣어 저장할 수 있음) 하고, 보존 과정에서 침전이 있으면 다시 원심을 떠나 반복적으로 얼지 않도록 하십시오.

• 혈장 샘플:

전혈을 항혈응고제가 함유된 관에 모아 표본의 실제 요구에 따라 EDTA, 구연산나트륨 또는 간소를 항응고제로 선택하고 20min을 혼합하여 4 ℃ 조건에서 1000×g 원심분리 10 min, 그리고 상청 등량을 작은 EP관에 나누어 장착하고 -20 ℃ 에서 저장 (24시간 내 검사하면 2-8 ℃ 에 넣어 저장할 수 있음) 하여 반복적으로 얼지 않도록 한다。

※참고:혈청 혈장 샘플은 검사 결과에 영향을 미치지 않도록 용혈, 고지혈지 샘플을 사용하지 마십시오.；샘플의표적물검측 농도가 표준품의 높은 값보다 높으니, 샘플을 적당한 배수로 희석한 후 검측하시고, 정식 실험 전에 사전 실험을 하여 희석 배수를 확정하는 것을 건의합니다.

시약 준비：

• 시약 회온: 먼저 실험 전 30min시약함,예측 대기견본배치실온아래, 농축 세척액 이 결정 이 나오면 37 ℃ 온욕 을 하여 결정 이 모두 녹을 때까지 한다。
• 조제세제:희석된 세제의 사용 부피를 미리 계산한 다음쌍증수 또는 이온제거수로20배농축 세척액 을 희석 하여 만들다1배응용액, 다 쓰지 않은 농축 세척액을 넣는다4℃냉장고 보관.

3. 표준품그라데이션 희석：표준품 가입 /견본희석액(SR1)1ml동결건조 표준품 중 15분 동안 가만히 두었다가 * 녹으면 가볍게 섞는다 (농도는2000pg/ml)，그리고따라다음 농도:2000、1000, 500, 250, 125, 62.5, 31.25, 0pg/ml로 희석한다.재용해된 표준품 원액(2000pg/ml)다 쓰지 않은 것은 폐기하거나 필요에 따라 1회 용량에 따라 분리하여 -20~80 ℃ 냉장고에 저장하고,구체적으로 다음과 같다.그림。

4. 바이오매스 항체 작업액:미리 계산하다시험에 필요한 용량, 검측 희석액(SR2)항체 농축액 100배를희석1배 더 많은 응용 작업액(희석하기 전에 충분히 섞다），부탁합니다30분 안에반응 구멍에 넣습니다.

바이오매스 항체 작업액 구체화희석 방법다음과 같습니다.

5. 효소결합물 작업액: 매번 시험에 필요한 용량에 따라 조제하고 효소결합물로 희석액(SR3) 100배 농축효소 결합물을 희석하여1배 적용작업액（희석 전원심), 30분 이내에 사용。

효소 결합물 작업액 구체화희석 방법다음과 같습니다.

6. 세탁 방법:

• 자동 세척판: 효소 표지판 구멍의 액체를 다 떨구고, 두꺼운 흡수지에 두드려 말리고, 주입 세척액은 3이다00ul/구멍, 주입 및 흡출 간격은 30초, 세판 5회.
• 수제 세척판: 효소 표지판 구멍의 액체를 다 털어내고 두꺼운 흡수지에 말린 다음 세척병에 세척액을 첨가한다 300ul/구멍, 정지 30초 후 효소 표지판 구멍의 액체를 깨끗이 털어내고 두꺼운 흡수지에 마른 후 판자를 5회 씻는다.

테스트 단계:

결과 판단：

1. 효소표시기 450nm 파장으로 OD값을 측정한다.이중 파장 측정을 선택하십시오. 참조 파장은 630nm입니다. 이중 파장 측정을 할 수 없다면 450nm의OD는측정값빼다630nm의OD는측정치.

2. 표준품, 샘플의 평균 OD값 계산: 각 표준품과 표본의 OD값은 0구멍의 OD값을 빼야 한다

3.표준품 농도는 가로 좌표, 흡광도 OD값은 세로 좌표, 소프트웨어로 표준 곡선, 샘플 그리기중IL-1은β함량 통과 가능대응OD값은 표준 커브에서 해당 농도로 환산됩니다.

4. 표본 OD값이 표준 곡선 상한선보다 높으면하다적당히 희석한 후재검사, 농도 계산 시 희석 배수 곱하기。

매개변수 표징：

1. 데이터 및 표준 커브

이 그림은 참고용으로만 제공되며, 이번 시험 표준품으로 그린 표준 곡선으로 계산해야 한다생쥐IL-1은β의 샘플 함량

2. 감도:

낮은 감지 기능생쥐IL-1은β농도가 높다15pg/ml,

20개 제로 표준품 농도 OD의 평균값에 두 개의 표준 차이를 더하여 그에 상응하는 측정 가능한 농도를 계산한다.

3. 특이성:

아니요생쥐IL-2、3、4、6、7、10IL-1A 및 IL-1Ra등 반응

4. 반복성:

판내, 판간 변이 계수 <10%

5. 회수율:

선택한건강생쥐혈장, 세포배양상청농도가 다른 3개를 넣어주세요.생쥐IL-1β, 회수율을 계산합니다.

6. 선형 희석：

개별적으로 선택건강 4개쥐 혈장 과 세포 배양 상청 중고농도를 넣다생쥐IL-1β표준 곡선 동력학 범위 내에서 희석하여 선형을 평가한다.

참고문헌：

1. Dinarello, C.A. (1994) 유로. 사이토킨 네트워크.5:517.

23 월, CJ 등 (1985) 자연315:641.

3Sims, J.E. 등 (1989) Proc.나틀아카드.Sci.미국86:8946.

4Sims, J.E. 등 (1988) 과학241:585.

5Huang, J. 등 (1997) Proc.나틀아카드.Sci.미국94:12829.

6Wesche, H. 등 (1997) J. Biol.화학272:7727.

7Sims, J.E. 등 (1993) Proc.나틀아카드.Sci.미국90:6155.

8Giri, J.G. 등 (1994) J. Immunol.153:5802.

9Symons, J.A. 등 (1995) Proc.나틀아카드.Sci.미국92:1714.

10Wewers, M.D. 등 (1997) J. Immunol.159:5964.

11Gonzales-Hernandez, J.A. 등 (1995) 클린.Exp. 면역.99:137.

일반적인 문제 및 해결 방법：

쥐 백혈구 매개체-1 베타 ELISA 시약함주문 지침:

1. 대부분의 제품은 현물을 갖추고 있으며 일반적으로 당일 발송을 주문할 수 있습니다.
2. 일부 비상용 상품은 1~2일 전에 예약해야 하고, 해외 선물은 3~6주 전에 예약해야 한다.
3. 일부 제품의 가격은 화물 기간, 차수 등 요소에 따라 변화가 발생할 수 있으며, 변동이 있을 경우 주문 당일 새 가격을 기준으로 한다.
4. 매일 주문 마감 시간은 16시 정각이고, 일부 도시는 17시 정각까지 도착할 수 있으며, 마감 시간을 초과하여 당일 발송할 수 없는 것은 다음날 발송을 안배할 것이다.
5. 물품대금을 처리한 후에 송장 등을 수취인의 주소, 성명, 등과 함께 팩스, 문자메시지, 등 형식으로 우리에게 통지해 주십시오.

운송 지침:

극저온 제품: 극저온 제품 운송 과정 중 드라이아이스를 추가하여 운송한다.드라이아이스로 제품을 싸서 거품함으로 밀봉하고 테이프로 거품함을 층층이 붙여 솔레보의 상자에 넣은 다음 합작택배에 교부하여 안전하고 빠르고 능률적이며 안심하고 고객의 손에 보내 제품의 성질이 하나로 안정되도록 보장하고 당신의 실험을 보호합니다.
저온 제품: 저온 제품 운송 과정 중 솔레보 아이스팩을 추가하여 운송한다.사전에 아이스팩으로 제품을 싸서 거품박스로 밀봉하고 테이프로 거품박스를 단단히 밀봉한 다음 솔레보의 상자 (보온효과가 적으면 일주일간 지속될수 있다.) 에 넣은후 합작택배에 교부하여 안전하고 빠르고 능률적이며 안심하고 고객의 손에 보내 제품의 성질이 하나로 안정되도록 보장하고 당신의 실험을 보호한다.
상온 제품: 상온 제품은 운송 과정에서 얼음이나 특수 포장을 할 필요가 없다.제품은 회사 창고 직원이 신속하게 배급하여 정확하고 빠르고 효율적인 택배로 제품이 신속하게 당신의 손에 전달되도록 보장합니다.