알파-케톤펜트산 탈수소효소 활성 검사 시약함 미량법

α-케톤펜산 탈수소효소(α-KGDH) 활성 검사 키트 설명서
미량법
주의: 본 제품의 시약은 변동이 있으니 주의하시고 엄격히 이 설명서에 따라 조작하십시오.
상품 번호：BC0715의
규격：100T/96S
제품 구성: 사용하기 전에 시약 부피와 병 안의 부피가 일치하는지 진지하게 확인하십시오. 의문이 있으면 즉시 솔레보 직원에게 연락하십시오.

용액의 제조:

1. 시약 2: 쉽게 휘발할 수 있는 시약으로, 다 쓴 후 가능한 한 빨리 밀봉하고, -20 ℃ 로 보존한다;

2. 시약 5: 사용하기 전에 시약 5 1개를 취하여 첨가1mL 시약 3, 충분히 용해, 다 쓸 수 없는 시약2-8℃저장4주,

3. 시약 6: 사용하기 전에 시약 6 1개를 취하여 첨가1.5mL 시약 3, 충분히 용해, 다 쓸 수 없는 시약-20 ℃ 분장 보존4주, 반복적으로 얼어붙는 것을 피한다;

4. 시약 7: 사용하기 전에 시약 7 1개를 취하여 첨가1mL 시약 3, 충분히 용해, 다 쓸 수 없는 시약-20 ℃ 분장 보존4주, 반복적인 얼음 녹지 않기 (1가지 분제 용해 후 가능100T, 사용 시간을 늘리기 위해 이 제품은1분말제);

5. 시약 8: 사용하기 전에 시약 8 1개를 취하여 첨가0.4ml증류수, 충분한 용해, 다 쓸 수 없는 시약-20℃분리 저장4주, 반복적으로 얼어붙는 것을 피한다;

6. 작업액의 조제: 사용하기 전에 순서대로 8.05를 취한다mL 시약 3,0.2 mL시약 4, 1mL시약 5, 1.25mL시약 6, 0.5mL시약 7(총11mL, 약속55T）, 충분히 혼합하여 사용하기를 기다리며, 즉시 사용하고 즉시 배합한다.

제품 설명:
α-KGDH（EC 1.2.4.2) 동물, 식물 미생물 및 배양 세포의 미토콘드리아에 널리 존재하며 트리카르복실산 순환 조절 핵심 효소 중 하나이며 촉매α-케톤펜산 산화 탈카르복실 생성 호박 아세틸 보조*A。
α-KGDH촉매α-케톤펜트산,NAD는⁺및 보조 * A 생성 호박 아세틸 보조 *A, 이산화탄소 및NADH는，NADH는에서340nm특징 흡수봉,NADH는생성 속도 표현α-KGDH활성

참고: 실험 전에 예상 차이가 큰 샘플 2-3개를 선택하여 사전 실험을 하는 것이 좋습니다.만약 견본의 흡광값이 측정범위내에 없다면 희석하거나 견본량을 증가하여 검측하는것을 건의한다.
필요한 장비와 장비:
자외선 분광 광도계/효소표시기, 수욕솥/항온 배양함, 데스크탑 원심분리기, 조절식 이액기, 미량 석영 비색 그릇/96구멍UV는판, 연구발/균장기, 얼음, 증류수.
작업 단계:구체적인 조작 절차는 "제품 자료" 부속서를 참조한다.

1. 측정 과정에서 모든 시약과 샘플을 얼음 위에 놓아 변성과 부활을 피한다.

2. 비색 그릇의 반응액의 온도는 반드시 37 ℃ 또는25℃작은 비커를 가져와 일정량의37℃또는25℃증류수, 이 비커를 넣어라37℃또는25℃수욕솥에.반응 과정에서 비색 그릇과 반응액을 이 비커에 넣는다.

3. 가장 좋은 것은 두 사람이 동시에 이 실험을 하고, 한 사람은 배색하고, 한 사람은 시간을 재어 실험 결과의 정확성을 보장하는 것이다.

4. 측정관의ΔA는값은0.01-0.25사이, 만약 측정관의ΔA는보다 큰 값0.25, 샘플을 희석해야 합니다.

5. 추출액에는 일정 농도의 단백질(약 1mg/mL)이 들어있기 때문에 샘플 단백질 농도를 측정할 때 추출액 자체의 단백질 함량을 빼야 한다.

실험 인스턴스:

1. 피지 0.1g을 채취하여 견본 처리하다., 2 배 희석된 후측정 순서에 따라 조작하여, 미량의 석영 비색 그릇으로 측정하였다.계산ΔA는측정=A4-A3=0.3243-0.3115=0.0128，ΔA는공백=A2-A1=0，샘플의 질량에 따라 효소가 살아있는 것을 계산한다.

α-KGDH활성(U/g 품질)= 1488.5× (ΔA)측정ΔA공백÷W×2(희석 배수)=381.056 U/g질량.

1. 쥐 간 0.1g을 채취하여 샘플 처리하고,4℃ 11000g 원심분리10분, 제거 후측정 순서에 따라 조작하여, 미량의 석영 비색 그릇으로 측정하였다.계산ΔA는측정=A4-A3=1.2123-0.9623=0.2500，ΔA는공백=A2-A1=0，샘플의 질량에 따라 효소가 살아있는 것을 계산한다.

α-KGDH활성(U/g 품질)= 1488.5× (ΔA)측정ΔA공백÷W=3721.25 U/g질량.
관련 발표 문헌:

1. Jianyun은 유, Changjian 두, 정은 Ji, et al. 억제 α-ketoglutarate dehydrogenase 활동은 우연한 α α α α α α α α α α α-ketoglutarate dehydrogenase 활동은 무작위적인 α α α α-ketoglutarate dehydrogenase 통해 poplar 변경 GABA 셔트플랜타2018년 7월;(IF3.06)

2. Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, et al. lncRNA Ftx는 간세포암에서 PPARγ 경로를 통해 유기식 glycolysis 및 종양 진행을 촉진합니다.International Journal of Oncology(국제국국제국국제International Journal of Oncology)2018년 5월; (IF3.571)

참조 문서:
Park L C H, Calingasan N Y, Sheu K F R, et al. 뇌 섹션과 배양 세포에서 양적 인 α-ketoglutarate dehydrogenase 활동 염색 [J].분석 생화학, 2000, 277(1): 86-93.
관련 제품군:
BC2150 / BC2155 구연산(CA) 함유량 측정 키트
BC0950/BC0955의 호박산 탈수소효소(SDH) 활성 검사 키트
BC0380/BC0385 아세톤산 탈수소효소(PDH) 활성 검사 키트
BC2160/BC2165의 미토콘드리아 이소레몬산 탈수소효소(ICDHm) 활성 검사 시약

알파-케톤펜트산 탈수소효소 활성 검사 시약함 미량법 알파-케톤펜트산 탈수소효소 활성 검사 시약함 미량법