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북경시 해전구 마련와북로 128호 백초원 3호동 2단원 503
범용 T 캐리어 균락 PCR 감정 시약함
범용 T 캐리어 균락 PCR 감정 시약함 T4 원리 캐리어
디렉토리 번호:42015
키트 구성, 저장, 안정성:
구성 |
80회. - 100회. (V015-100) |
400번. - 500번. (V015-500) |
2개의 Taq PCR MasterMix |
1ml |
5ml |
유니버설 프라이머 F |
50ml |
250ml |
유니버설 프라이머 R |
50ml |
250ml |
ddH는2O |
1ml |
5ml |
저장:-20 ℃ 保存。
제품 설명:
균락PCR는감정 예T캐리어 클론 연결 후 양성 클론 (삽입 세그먼트 포함) 의 Zui를 쉽게 확인할 수 있는 방법입니다.하지만 시중에서 볼 수 있는 균락은PCR는감정 키트는 모두T3, T7의또는SP6는등 특이T캐리어 유인물, 특정 항목에만 사용 가능T캐리어 연결 양성 클론의 감정.다르게 사용하는 경우T담체는 여러 종류의 감정 시약함을 동시에 구매해야 하기 때문에 사용 원가를 크게 증가시켰다.본사는 통용을 채택하고 있다T캐리어 유인물 연구 제작의 통용T캐리어 균락PCR는시약함 감정, 한 가지 시약함만 구매하면 시중에서 흔히 볼 수 있는 모든 시약함에 사용할 수 있다T매개체(포함pGEM은,pUC는,pBluescript는시리즈)양성 클론 접속 확인.또한T3, T7의또는SP6는유인물이 되는 균락PCR는감정 시약함 유인물 거리가 삽입 위치의 거리가 매우 짧기 때문에 감정 중100bp좌우 또는 더 작은 세그먼트를 삽입할 때 음성클론의 유인물인 이중합체띠와 양성클론증폭띠의 크기가 비슷하여 구분할수 없다.흔히 유인물 이중합체의 띠를 양성증폭 띠로 간주하여 가양성을 조성한다.반대로 가짜 음성을 만든다.이 키트는 공통T섹션이 삽입되지 않은 경우 캐리어 지시자의 거리가 최소150bp의이상, 삽입 세그먼트의 길이를 더하면 삽입 세그먼트가 증폭된 스트라이프인지 유인물 이중합체가 증폭된 스트라이프인지 명확하게 구분할 수 있다.가양성이나 가음성을 피하여 정확성을 크게 높였다.당사가 개발한 휴대용PCR MasterMix는사전 혼합 시스템, 귀하가 일일이 각종 성분을 첨가할 필요가 없고, 직접 첨가하면 단일 균락을 선별하고, 경과1시간 정도의PCR는반응과 전기 수영 검사는 재조합 균락 감정의 결과를 얻을 수 있다.
예상 확장 세션:
T캐리어 이름 |
캐리어 소스 |
세션이 삽입되지 않은 경우 일반T캐리어 유인물 간 거리 |
예상 확장 세그먼트 길이 (삽입300bp세션 예) |
pGEM-T 쉬운 |
pGEM은 |
281bp |
581bp |
pGEMX-T 쉬운 |
pGEM은 |
289bp |
589bp |
pMD18-T는 |
pUC18은 |
158bp |
458bp의 |
pMD19-T는 |
pUC19은 |
158bp |
458bp의 |
pSURE-T는 |
pUC19은 |
239bp |
539bp |
pUCm-T는 |
pUC19은 |
239bp |
539bp |
pBLUE-T는 |
pBluescript는 |
300bp |
600bp의 |
참고 사항:
1. 재조합 균락 감정 시, 단일 균락을 선택하기 전에, 먼저 표시를 잘 해야 하며, 감정 후 사용하기에 편리하다.
2. 균락 을 고를 때는 단균 락 을 선택해야지, 너무 많은 균체 를 골라서 영향 을 받지 않도록 해야 한다PCR는결과.
3. 설정PCR는프로그램의 경우 삽입 세그먼트 크기에 따라 확장 시간을 결정합니다. 삽입 세그먼트 크기가 인 경우1 KB다음, 연장 시간30-45초면 됩니다. 세그먼트가 더 길면 이 비율로 연장 시간을 늘릴 수 있습니다.
작업 단계 ()25ml고객이 채택할 수 있는 시스템20ml시스템):
{C}1. 다음 체계에 따라 유인물을 함유한1개의 x Taq MasterMix반응액.
2개의 Taq PCR MasterMix |
12.5ml |
유니버설프라이머F(10)mM) |
0.5ml |
유니버설프라이머R(10)mM) |
0.5ml |
ddH는2O |
11.5ml |
2. 밤을 새워 배양한 평판의 균락번호를 매긴후 멸균의 총머리를 사용하여 일부 단균락을 골라 상기 반응액을 첨가하고 혼합하여 균락이 반응액에 충분히 분산되도록 한다.
실험 결과를 분석하기 쉽도록 균락을 넣지 않은 음성 대조관을 하나 더 설치할 수 있다.
3. ~을PCR는파이프는 다음 조건에 따라 열순환기에 배치되어 반응을 시작하며 권장 조건은 다음과 같습니다.
94℃10 분
94℃30 초
55℃30 초 30-33 주기
72℃0.5-1 분
72℃5 분
참고: 삽입 세그먼트 크기에 따라 확장 시간을 조정합니다.예비 변성 시간이10분, 주로 균락을 분해하고 방출하기 위해DNA는템플릿.
반응이 끝나면5-10ml직접 샘플링 전영 검사.
참고: 박테리아가 분해되기 어렵거나 불순물이 가짜 음성이 많으면 다음 방법을 시도하여 분해 방출DNA는후에 진행하다.
1. 균을 골라 넣어 50ml dd물 (또는10ml dd물속), 흔들다.
2. 99도,10분 불활성화 균액 속 효소 방출DNA는。
3. 12000rpm원심1분 세포 조각 제거.
4. 청산하다PCR는,25ml PCR는시스템 채택5ml업스트림 (시작50ml dd물), 또는1ml업스트림 (시작10ml dd거푸집을 만들다.
범용 T 캐리어 균락 PCR 감정 시약함 T4 원리 캐리어