보편적인 SYBR 녹색 qPCR 혼합

저장 운송 조건

장기 보관은 -20 ℃ 에서 빛을 피하여 보관하십시오. Mix가 녹으면 4 ℃ 의 빛을 피하는 조건에서 한 달 동안 안정적으로 보관할 수 있습니다. 가능한 한 반복적으로 얼지 않도록 하십시오.

제품 그룹

보편적인 SYBR 녹색 qPCR 혼합

제품 소개

보편적인 SYBR 녹색 qPCR 혼합SYBR입니다.® Green I 중첩 염료법 전용 qPCR 시약, 2 × 사전 혼합액으로 유인물과 DNA 샘플을 제외한 모든 qPCR 성분을 포함하여 조작 절차를 줄이고 샘플링 시간을 단축하며 오염 확률을 낮출 수 있다.그 핵심 성분은 항체 수식을 거친 열 가동 Taq DNA 중합 효소로, 정교하게 최적화된 버퍼 시스템 및 PCR 반응 촉진 인자와 결합하여 제품이 특이성이 강하고 증폭 효율이 높은 특징을 가지도록 하며, 비특이성 증폭을 효과적으로 억제하고, 넓은 농도 범위의 템플릿에 대해 정확한 정량을 진행하여 안정적이고 신뢰할 수 있는 qPCR 결과를 얻을 수 있다.사전 혼합액에는 일반 보정 염료가 포함되어 있으며, ROX 보정이 필요한 기기를 포함하여 대부분의 qPCR 장비와 호환되며, 실험 과정에서 일반적으로 보정 염료를 추가로 추가할 필요가 없다.

사용 방법

1. 사용 주의

① Mix에 염료가 미리 혼합되어 있기 때문에, 그 보존 또는 반응 체계 배합 과정은 강한 빛의 조사를 피해야 한다;

② 사용 전 위아래를 뒤집어 Mix를 가볍게 섞고 소용돌이 진동을 섞지 말고 기포가 너무 많이 생기지 않도록 한다.

③ Mix에는 Universal 보정 염료가 포함되어 있으며 추가 염료 없이 모든 모델에 적용됩니다.

2. 제안된 qPCR 반응체계

a. 일반적으로 권장되는 유인물의 종농도는 0.2μM이며 반응효과가 좋지 않을 경우 0.1~1μM 범위내에서 조정할수 있다.

b. 권장 템플릿 추가 샘플은 1~2 μl이며, 템플릿 유형이 희석되지 않은 cDNA 원액인 경우 템플릿 추가량은 총 반응 체계의 10% 를 초과해서는 안됩니다.다양한 종류의 DNA 템플릿에 함유된 표적 유전자 복사 수가 다르며, 필요한 경우 최적의 DNA 템플릿 첨가량을 결정하기 위해 그라데이션 희석을 할 수 있다.

3. qPCR 반응 프로그램(기종에 따라 적절히 조정 가능)보편적인 SYBR 녹색 qPCR 혼합

이보법

삼보법

a. 유인물의 Tm 값에 따라 퇴화 & 연장(퇴화) 온도를 설정한다.증폭 세그먼트가 200bp 이내이면 디폴트 & 확장(연장) 시간을 15 sec로 설정할 수 있습니다.또한 퇴화 & 연장 (연장) 시간의 설정은 사용자가 사용하는 qPCR 기기에 필요한 가장 짧은 데이터 수집 시간에 따라 스스로 조정해야 합니다.

b. 서로 다른 qPCR 기기의 용해 곡선 채집 프로그램은 차이가 있으며, 일반적으로 기기의 기본 용해 곡선 채집 프로그램을 사용할 수 있다.

4.실험 최적화

기본 반응 조건을 사용하면 반응 성능이 좋지 않을 때 반응 조건을 최적화해야 하며 유인물 농도 및 증폭 프로그램 두 가지 측면에서 수행 할 수 있습니다.

① 유인물 농도 조정

유인물 종농도가 0.1∼1.0μM 범위에서 변화할 때 유인물 농도가 낮을수록 증폭 특이성은 높지만 증폭 효율은 떨어진다.

② 증폭 프로그램 최적화

증폭 특이성을 높여야 하며, 2단계 프로그램을 사용하거나 퇴화 온도를 높일 수 있다;3단계 프로그램을 사용하거나 확장 시간을 연장하여 효율성을 높여야 합니다.

5. 유인물 설계 원칙

① 증산물 길이는 80~200bp로 조절할 것을 권장한다.

② 유인물의 길이는 18~25bp이다.

③ 순방향 유인물과 역방향 유인물의 Tm 값 차이가 1 ℃ 를 넘지 않는 것이 좋고, Tm 값은 58~62 ℃ 로 제어하는 것이 좋다.

④ 유인물의 GC 함량은 40~60% 로 조절한다.

⑤ 유인물 A, G, C, T의 전체 분포는 T/C 또는 A/G의 연속 구조(특히 3'단)를 피하여 균일하게 한다.

⑥ 유인물 3'단의 마지막 염기는 G 또는 C가 가장 좋다.

⑦ 유인물 내부 또는 두 유인물 사이의 상호 보완 서열을 피한다.

⑧ NCBI BLAST 기능을 사용하여 유인물의 특이성을 검색하여 확인합니다.

미국 Azaood사는 2004년에 설립되였는데 생명과학연구, 진단 및 생물기술응용에 사용되는 고품질의 순화효소, 단백질, 핵산 및 세포분리시약함, 태우혈청을 개발하고 생산하는 회사이다링다오자,Azood Corporation은 ISO9001 인증을 통과한 주요 제조업체로 연구부터 대규모 대량 바이오 가공 및 OEM 응용 프로그램 및 요구 사항을 충족 할 수 있습니다.