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북경람보리드상업무역유한회사
개요
trizol pal 핵산 추출기 대염소 시약은 RNA 추출에 사용됩니다.trizol pal (대염소모조시약) 은 Trizol Reagent (화물번호: R1000) 와 함께 사용할 수 있으며 염소모조를 대체할 수 있으며 분해체계를 반복적으로 추출하여 단백질을 제거할 수 있으며 용도가 광범위하며 동물조직, 식물재료, 각종 미생물 및 배양세포 등 샘플에서 총 RNA를 추출할 수 있다.샘플은 Trizol에서 충분히 분해됨과 동시에 RNA의 무결성을 최대한 보장 할 수 있습니다.
제품 정보
RNA 추출을 위한 trizol pal 대염소 시약상품번호: R1200
저장 조건: 0-30 ℃ 피광 저장
RNA 추출을 위한 trizol pal 대염소 시약제품 설명:
Trizol PAL은 Trizol Reagent (화물번호: R1000) 와 함께 사용할 수 있으며, 클로로포름 대신 분해 체계를 반복적으로 추출하여 단백질을 제거할 수 있으며, 용도가 광범위하며 동물 조직, 식물 재료, 각종 미생물 및 배양 세포 등 샘플에서 총 RNA를 추출할 수 있다.샘플은 Trizol에서 충분히 분해됨과 동시에 RNA의 무결성을 최대한 보장 할 수 있습니다.Trizol PAL 원심분리를 넣으면 용액은 상층 무색 수상, 중간층, 하층 적색 유기상, RNA는 상청층에 분포하는 세 층으로 나뉜다.상청층을 수집한 후 이소프로필알코올이 침전되면 총 RNA를 회수할 수 있다.추출된 총 RNA는 완전성이 좋고 단백질 및 DNA 오염이 없으며 다양한 분자 생물학의 일반적인 실험에 사용할 수 있습니다.RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、체외 번역 등.
자체 시약
Trizol Reagent(상품번호: R1000), 이소프로필렌글리콜, 75% 에탄올, RNase 없는 물(신규 개봉 또는 RNA 추출 전용)
핵산 추출기참고 사항:
1. RNase오염을 예방하려면 다음과 같은 몇가지 방면에 주의를 돌려야 한다.
1) RNase가 없는 플라스틱 제품과 총 헤드를 사용하여 교차 오염을 피합니다.
2) 유리그릇은 사용하기 전 180℃의 고온에서 4h 건조하여 구워야 하며, 플라스틱그릇은 0.5M NaOH에 10분 동안 담가 물chedi로 씻은 후 고압으로 멸균할 수 있다.
3) 조제용액은 RNase가 없는 물을 사용해야 한다.
4) 작업자는 일회용 마스크와 장갑을 착용하고 실험 과정에서 장갑을 자주 갈아야 한다.
2. 추출한 샘플은 반복적으로 얼지 않도록 해야 한다. 그렇지 않으면 RNA 추출률과 품질에 영향을 준다.
3. 본 제품을 사용할 때 장갑, 안대, 마스크 등 보호물품을 착용해야 한다.만약 부주의로 눈에 닿았다면 즉시 대량의 물로 씻고 병원을 찾아 치료해야 한다.사용 시 불씨, 열원을 멀리한다.
3. 에탄올 75% 에 보관된 RNA 침전은 2-8 ℃ 는 일주일, -20 ℃ 조건에서는 1년 동안 보관할 수 있다.
4. RNA는 반감기가 비교적 짧고 쉽게 분해되므로 추출후 되도록 빨리 후속실험을 진행하는것을 건의한다. 례를 들면 cDNA, Northern Blot 등으로 반전록한다.
5. 다운스트림 실험이 DNA에 매우 민감하다면 RNAse가 없는 DNase I로 RNA를 처리하는 것이 좋습니다.
작업 단계:
1. 각종 재료의 처리.
1.1 식물 조직: 신선한 식물 조직을 취하여 액체 질소에 충분히 연마하거나 식물 그룹 zhi를 잘게 자른 후 Trizol에서 직접 신속하게 연마하고 30-50 mg 조직마다 1mL Trizol을 첨가하여 골고루 섞는다.
참고: 샘플 부피는 일반적으로 Trizol 부피의 10% 를 초과하지 마십시오.
1.2 동물조직: 신선하거나 -70 ℃ 에 얼린 동물조직을 최대한 잘라내고 30-50 mg 조직마다 1 mL Trizol을 넣고 균장기는 균장처리를 한다.또는 액체 질소에 연마한 후 Trizol 1 mL를 넣고 섞는다.
참고: 샘플 부피는 일반적으로 Trizol 부피의 10% 를 초과하지 마십시오.
1.3 단층배양세포: 배양액을 흡입하여 배양판에 직접 적당량의 Trizol(10cm2면적당 1mL Trizol 필요)을 첨가하고 샘플러로 반복적으로 불어 세포를 분해시킬 수 있다.또한 인슐린바이 효소로 처리한 후 세포 용액을 RNase-Free의 원심관으로 옮겨 300×g 원심분리 5min으로 세포 침전을 수집해 모든 상청을 꼼꼼히 빨아들이고 Trizol 1mL를 넣어 섞는다.
참고: 1) 수집 된 세포의 수는 1 × 10 7을 초과하지 마십시오.
2) TRNzol 가량은 배양판 면적에 따라 결정되며 세포 수에 의해 결정되지 않습니다.트리졸의 가량이 부족하면 추출된 RNA에서 DNA 오염이 발생할 수 있다.
3) 세포를 수집할 때는 반드시 세포배양액을 깨끗이 제거해야 한다. 그렇지 않으면 분해가 완전하지 않아 RNA의 생산량이 감소된다.
1.4 세포 현액: 원심 수집 세포.5 × 10 6-1 × 10 7 동물, 식물 및 효모 세포 또는 10 7 박테리아 세포 당 1 mL Trizol을 추가합니다.
참고: 1) Trizol을 넣기 전에 RNA가 분해되지 않도록 세포를 씻지 마십시오.
2) 일부 효모와 세균세포는 균장기나 액질소를 연마하여 처리해야 할 수도 있다.
1.5 혈액처리: 신선한 혈액을 직접 채취하여 3배 부피 Trizol(0.25 mL 전혈에 0.75 mL Trizol 권장)을 첨가하여 충분히 진동하고 혼합한다.
1.6 선택적 단계: 근육 조직, 지방 조직 또는 식물의 덩어리 줄기와 같은 단백질, 지방, 다당 또는 포외 물질 함량이 높은 샘플의 경우, 균장 처리 후 4 ℃, 12000 rpm (~13400 × g) 에서 10 분 동안 원심을 떠나 불용 물질을 제거 할 수 있습니다. 이때 포외 물질, 다당 및 고분자 양의 DNA가 침전되고 RNA는 상청에 존재합니다.
2. 샘플에 Trizol을 넣은 후 몇 번 반복적으로 불어 샘플이 충분히 분해되도록 한다.실온에서 단백질 핵산 복합체를 5분 동안 완전하게 분리한다.
3. 위의 용액에 Trizol Pal을 첨가하고, 1 mL의 Trizol을 사용할 때마다 0.2 mL의 Trizol Pal을 첨가하고, 파이프 뚜껑을 잘 덮고, 15 초 동안 심하게 진동하며, 실온은 2-3 분 방치한다.
4, 4 ℃ 12000 rpm 원심 15분, 이때 샘플은 세 층으로 나뉜다: 적색 유기상, 중간층과 상층 무색 수상, RNA는 주로 수상에서 수상 (약 600 μL) 을 새로운 RNase-Free 원심관 (자체) 으로 옮긴다.
5. 얻은 물상용액에 등체적이소프로필알코올을 첨가하여 뒤집어 섞고 실온에서 10분간 방치한다.
6, 4 ℃ 12000rpm 원심분리 10분, 상청을 포기한다.
7. 에탄올 75% (RNase가 없는 물로 조제) 를 넣어 침전을 씻는다.트리졸을 1mL 사용할 때마다 1mL 75% 에탄올로 침전을 세탁한다.
8, 4 ℃ 12000rpm 원심분리 3분, 상청 흡입 조심, RNA 침전 흡입 조심.
주: 남은 소량의 액체는 잠시 원심을 분리한 다음 총머리로 빨아들일 수 있으니 침전을 흡수하지 않도록 주의해야 한다.
9, 실온은 2-3분 방치, 말리기.RNAse가 없는 물을 30-100 μL 첨가하여 RNA를 충분히 녹이고 얻은 RNA는 -70 ℃에 보관하여 분해를 방지합니다.
주: 침전은 용해하기 어렵지 않도록 지나치게 건조하지 마세요.
