전염급 선형 폴리에틸렌 아민(MW25000)

전염급 선형 폴리에틸렌 아민(MW25000)는 폴리에틸렌 아민을 기반으로 한 순간 전염 시약 제품으로 전염 효과가 높다.폴리에틸렌아민은 고양의 이온전하를 가진 유기대분자중합체로서 음전하를 띤 핵산분자와 쉽게 결합되여 양전하를 띤 복합체를 형성할수 있다.이 복합체는 세포 표면의 음이온과 결합해 내삼키는 작용을 통해 세포로 들어간다.이 전염 시약은 세포의 독성이 낮고 다양한 세포계에 적용되며 재조합 단백질,AAV는등의 생산.

1. 시약 배치

필요한 재료:

이온제거수 또는 그 이상의 생물급수,12 mol/L의염산 (HCl은）、10 mol/L의*（NaOH는), 일회용0.1~0.2μm PES는진공 무균 필터, 무균HDPE는또는 폴리프로필렌 저장병.

저장액 구성:

⑴ ~을1 그램전염급 선형 폴리에틸렌 아민25,000용해900 ml이온을 제거한 물에 섞으면서(가열 가능60-80℃) 변두리 추가12 M염산, 다음으로 조정pH＜2.0, 섞기3시간 이상 용해까지;

⑵ 쓰다10 M* 조정pH다음6.9~7.1；

⑶ 용액을 계량기 (또는 계량컵) 에 넣다안쪽, 물정용1 L；

⑷ 일회용0.2 µm필터 진공 여과 제균, 즉1개의 mg/mL의 저장액;

⑸ 필요에 따라 저장액을 분장하여-20℃ 보존 가능1년저장액을 다시 녹인 후에는 다시 얼려서는 안 된다.

2. 조작 프로세스 전염

세포 접종: 전염 효율을 높이기 위해 전염 전날 세포 접종을 권장하여 전염 시 세포 밀도를에서70~80%적합하다；

준비DNA는- 전염 시약복합물:

⑴ ~을DNA는, 전염 시약과 희석제는 먼저 실온으로 회복한다;

⑵ 적당한 무단백 배지로 적당량을 희석하다DNA는；

⑶ 일정 비율 에 따르다(각1 μg DNA필요1-5 μL전염 시약, 자체 모색 배합 권장), 희석된 전염 시약을 장착할 때까지 첨가DNA는용액의 시험관(추가 순서를 뒤바꾸지 마십시오.), 한쪽살살소용돌이, 실내 온도 고정10~25분부화。

전염 세포:

⑴ 무혈청 조건에서 전염 시 세포배지를 제거하고 무혈청배지로 교체한다.

⑵ 세포 에 적당량 을 첨가 하다DNA는- 전염 시약복합체, 가볍게 섞기, 전염6-8시간 후 신선한 예열 배양기 교체；

⑶ 에서37℃、5%의 CO₂배양함중배양, 전염 후24시간전입 유전자의 발현 (자체적으로 적합한 검사 시간을 결정할 수 있음) 을 검출할 수 있다.

운송 및 저장 조건

운송조건: 실온운송

보관 조건: 가루는 실온이나4℃ 보존, 유효기간2년.

주의사항

1. 대부분의 세포에 대해1 μg DNA사용3 μL전염 시약은 비교적 높은 전염 효율을 얻을 수 있으며, 매 시도 가능1 μg DNA사용1.5 ~ 4 μL전염 시약을 최적화하다.

2. 안전과 건강을 위해 실험복을 입고 일회용 장갑을 끼고 조작하십시오.

3. 본 제품은 과학 연구 용도로만 사용됩니다.