RNAfixer 무액체 질소 RNA 시료 저장액

상품 속성:

저장 기준:

실온 (18-25 ℃) 을 1년 이상 보존하고, 사용 시 침전 또는 석출이 발견되면 37 ℃ 의 수욕을 할 수 있다열을 다시 녹여 사용하면 재녹인 후 제품의 품질에 영향을 주지 않는다.
제품 설명:
RNAfixer는 액체 상태의 무독성 조직 보존 액체로, 신선한 조직 세포의 포장에 신속하게 스며들 수 있다중, 비동결 상태에서 세포 내의 RNA를 제자리에서 안정시키고 보호한다.조직 슬라이버를 제거한 후 즉시 RNAfixer에 담가 보관하는 것은 향후 추출 RNA의 품질과 양에 영향을 미치지 않습니다.RNAfixer는 RNA 샘플을 즉시 처리해야하는 것을 제거아니면 액체 질소 보존이 불편해야 합니다.RNAfixer에 담그면 신선한 조직 세포에서 RNA가 온전히37℃에서 하루, 25℃에서 일주일, 4℃에서 한 달, -20℃ 또는 -80℃에서 장기간 보관한다.
HCV 및 HIV와 같은 RNA 바이러스 샘플은 37 ℃에서 한 달 동안 보관 될 수 있습니다.동물조직(심장, 간, 신장, 근육, 고환, 뇌, 비장 등), 배양세포, RNA바이러스, 과파리, 세균, 백혈구, 일부 식물 조직 등.
제품 특징:
1. 조작이 쉽다: 적당한 크기로 조직하여 RNAfixer에 담그면 RNA가 분해되지 않도록 할 수 있다.
2. 액체 질소 불필요: 시료의 보존을 액체 질소, 드라이 아이스 또는 -80 ℃ 냉장고가 필요하지 않게 하며, 특히 임상 및 야외 시료에 적합합니다.신속하고 대규모로 채집할 수 있습니다.
3.편리한 운송: 처리된 샘플은 25 ℃ 에서 일주일 동안 보존할 수 있어 샘플의 우편과 운송을 쉽고 저렴하게 할 수 있어 유리하다학술 협력과 교류.
4.여러 번 얼리기: RNAfixer 처리된 샘플은 여러 번 반복적으로 얼릴 수 있으며, 그 사이에 샘플을 여러 가지 처리할 수 있다최종 추출된 RNA의 품질에는 영향을 주지 않습니다.
5.비교 가능성: RNAfixer는 대규모 샘플 처리에서 오차를 줄이고 각 실험 수 간의 비교 가능성을 증가시켜 대규모 유전자 발현 스펙트럼 분석에 특히 유용합니다.
사용 설명:
RNAfixer는 신선한 조직에만 사용되며 RNAfixer에 담그기 전에는 조직을 냉동하는 것이 금지됩니다.신속하게 새신선한 조직은 성장, 너비, 높이 임의의 한쪽 두께 <0.5센티미터에 RNAfixer에 담그면 된다 (한쪽 두께만 있으면 된다도는 0.5cm를 넘지 않으며 RNAfixer는 신속하게 침투 할 수 있으며 다른 양쪽의 크기는 중요하지 않습니다.)신선한 그룹직물은 5배 부피의 RNAfixer에 담가 지시에 따라 적당한 온도에 보관한다.
1. 동물 조직 RNAfixer는 조직 구조를 파괴하거나 용해하지 않기 때문에 RNAfixer에 담가 침투한다균형 잡힌 조직은 RNAfixer에서 제거한 다음 더 작은 조각으로 잘라 RNAfixer에 다시 넣을 수 있습니다.다음에 계속 사용하세요.쥐의 간, 신장, 비장과 같은 작은 기관은 잘라낼 필요가 없으며 RNAfixer에 완전히 보관 될 수 있습니다.
조직별 샘플에 권장되는 RNAstore 사용량:

2.식물 조직의 많은 식물 조직은 RNAfixer에 직접 담그면 된다.어떤 식물은 납질과 같은 천연 침투 장벽이 있다보호층, RNAfixer 침투를 용이하게 하기 위해 먼저 납질층을 파괴해야 한다.
3. 조직배양 세포세포를 불어 떨어뜨린 후, 원심분리하여 세포를 수집하고, 상청을 버리고 얼음욕의 PBS 완충액으로 한 번 씻는다잔류 배양액을 제거하다.소량의 PBS 완충액에 세포를 떠 있다.5 ~ 10배 부피 RNAfixer를 넣고 섞기균.
4.백혈구는 전체 혈중 백혈구의 보존에 대해 백혈구를 적혈구와 혈청에서 분리하고 그룹별로직배양세포처럼 처리하면 백혈구는 RNAfixer에 효과적으로 보존될 수 있다.전혈, 혈장을또는 혈청의 RNA는 단백질 함량이 너무 높기 때문에 RNAfixer와 혼합 된 후 RNAfixer에 보관됩니다.쉽게 용해되지 않는 침전이 형성된다.
5. 세균
박테리아는 RNAfixer에서 자라지 않지만 RNAfixer는 박테리아를 파괴하지 않습니다. E. coli는 4 ℃에서 1을 보관합니다.한 달은 여전히 완전한 RNA를 제안할 수 있습니다.
RNAfixer의 샘플 보관:
1. -80℃에 보관샘플 장기 보존용.RNA fixer에서 샘플을 4 ℃ 에 놓고 밤을 보낸 다음 샘플을 건져 가능한 한RNAfixer 액체를 깨끗하게 제거하고 - 80 ℃ 에 놓습니다.조직 배양 세포에 대해서는 제거할 필요가 없다RNAfixer，-80 ℃ 에 직접 냉동하면 세포가 분해되지 않습니다.샘플 사용 시 실온에서 녹일 수 있으며RNA의 무결성과 생산량에 영향을 주지 않고 다시 냉동할 수도 있다.
2. -20℃에 보관RNAfixer의 샘플을 4 ℃ 에 배치하여 밤을 보낸 다음 -20 ℃ 로 옮깁니다.-20 ℃ 에서 샘플은 얼음에 얼지 않는다얼지만 일부 결정이 형성 될 수 있으며 향후 RNA 추출에 영향을 미치지 않습니다.샘플 사용 시 실내 가능온도가 녹고 RNA의 무결성과 생산량에 영향을 주지 않고 다시 냉동 할 수 있습니다.
3. 4 ℃ 에 보관샘플은 4 ℃ 에서 한 달 동안 보관할 수 있다.
4.25 ℃ 에 보관25 ℃ 샘플에 보관 된 RNA는 1 주 동안 완전하게 유지되며 2 주 동안 보관 된 샘플 RNA는 약간 분해됩니다.northern analysis에는 겨우 사용할 수 있지만 nuclease protection assay or RT-PCR에는 품질이 충분합니다.
5. 37℃에 보관37 ℃ 샘플에 보관 된 RNA는 24 시간 동안 완전하고 3 일 동안 부분적으로 분해되었습니다.RNAfixer 샘플의 RNA 추출을 저장하려면:RNAfixer에서 샘플을 꺼내면 RNAfixer는 직접 연못에 붓고 수돗물로 헹구면 되며 필요 없다특수 처리.
1. 조직
깨끗한 핀셋으로 RNAfixer에서 샘플을 건져내고 흡수지로 남아 있는 RNAfixer를 살짝 빨아들인 후,신선한 조직과 마찬가지로 액체 질소에 따라 연마한 후 균일 펄프 처리의 표준 절차에 따라 RNA를 추출할 수 있다.
2. 세포
RNAfixer에 저장된 세포에는 두 가지 옵션이 있습니다.첫째, RNAfixer를 제거한 후 RNA를 추출하고, 다른하나는 세포와 RNAfixer의 혼합물에서 직접 추출하는 것이다.
1) RNAfixer 제거 후 RNA 추출RNAfixer에 보관 된 세포는 덜 취약해지고 갈라지지 않고 높은 원심 분리 속도를 견딜 수 있습니다해.5000g 원심분리에서 세포 수집에 성공한 경험이 있는데 각 세포의 강도가 다르기 때문에먼저 중요하지 않은 세포로 예비시험을 하여 사용하는 속도에서 원심분리가 세포를 파괴하지 않도록 보장해야 한다.다른 선택택은 원심분리 전에 같은 부피의 PBS를 넣어 RNAfixer와 세포의 혼합물을 희석시켜 용액의 밀도를 줄이고,세포 용액을 가라앉힐 수 있게 하다.
2) RNAfixer를 제거하지 않고 RNA를 직접 추출
또한 TRIpure, TRI reagent와 같은 10배 부피의 단계별 추출 시약을 세포와RNAfixer의 혼합물은 정상적인 단계에 따라 작동합니다.

PCR는기본 단계 및 고려 사항?

1. 실험원리

PCR는체외 인공 선택성 증폭이야DNA는의 한 가지 방법, 그것은 생물체 내와 유사하다DNA는을 (를) 복사합니다.생물체 내에서DNA는복제에는 템플릿, 유인물,DNA는중합효소,DNA는해선효소,dNTP; 그리고 몸 밖PCR는반응 역시 유사한 성분을 필요로 하는데, 템플릿, 유인물,PCR 버퍼、Taq는효소,dNTP.여기서 유인물은 특정 위치에 대한 증폭을 위해 인공적으로 설계된 특정 시퀀스입니다.PCR 버퍼반응하는 완충 환경 제공;반응과정은 생물체내와 마찬가지로DNA는이중 체인이 열리고 템플릿과 결합하여 새 체인으로 확장됩니다.그리고 이 과정들은 생물체 내에서DNA는해선효소는 체인을 분해하고 체외에서는 반응온도를 조절하여 실현된다.자주 사용하는 경우94℃변성 템플릿DNA는쌍사슬을 열고 퇴화온도에서 물건을 템플릿에 결합시키고 마지막으로72℃특정 세그먼트에 대해 확장을 완료하고 반복적으로 반복합니다.DNA는의 대량 증가.세 번째 순환이 시작되어야 과녁이 나온다DNA는구간이 같다DNA는분자, 한층 더 순환적으로 과녁을 산출한다DNA는구간의 지수가 배가되다.

증가 후기에,산물이 축적되다,지수 증폭을 보이던 반응을 평탄한 곡선으로 만들다,산물은 더 이상 순환수에 따라 뚜렷하게 상승하지 않는다,이를 플랫폼 효과라고 합니다.플랫폼 기간(고원)원래 잘못 배합하여 발생한 저농도 비특이성 산물을 계속 대량으로 증가시켜 비교적 높은 수준에 이르게 할 것이다.따라서 순환 횟수를 적절히 조절해 플랫폼 기간 전에 반응을 끝내고 비특이성 산물을 줄여야 한다.플랫폼 도착 기간(고원)필요한 반복 횟수는 샘플의 템플릿 복제본에 따라 달라집니다.

2. 주요 성분

1.템플릿은 여러 가지 형식이 될 수 있는데, 주로 게놈을 포함한다DNA는, 입자DNA는, 바이러스를 가진 게놈DNA는、PCR는결과물,cDNA는기다려야 하지만RNA는. 템플릿 유형에 따라 사전 변성의 시간과 양이 크게 다릅니다.일반적으로 큰 게놈의 경우DNA는예변성 시간10분충분하다DNA2min은, 바이러스를 가진 게놈DNA는예변성2분、PCR는산물 예변성2분됩니다.

주의cDNA는단일 체인DNA는하지만 여전히 할 수 있습니다PCR는의 템플릿은 첫 번째 루프에서 하나의 지시물만 결합하여 다른 체인을 작성합니다.두 번째 라운드부터 두 유인물은 모두 특이한 위치와 결합하여 일반과 실현되었다PCR는의 접속.단일 체인인RNA는진행할 수 없다PCR는증가의 원인은 바로 실현에 있다PCR는반응은DNA는중합 효소, 일부러 식별할 수 있을 뿐DNA는체인

2.템플릿의 양에 대해 말하자면, 보통25ul체계DNA는의 품질은 다음과 같습니다.50100ng. 게놈의 경우DNA는그 구조가 비교적 복잡하기 때문에, 추출의 농도도 왕왕 비교적 크므로, 농도가 너무 큰 쌍을 방지하기 위해서이다PCR는영향을 끼쳤기 때문에 추출한DNA는경도 희석을 하다.그렇지 않으면 농도가 너무 높으면 비특이성 증폭을 일으킬 수 있다.입자 및PCR는산물은 구조가 간단하고 추출 농도가 일반적으로 낮기 때문에 희석할 필요가 없다.

회사에서 판매 중인 제품:

PCR는실험에서 주의해야 할 문제는 무엇이 있는가?

없다CT는값

검사 결과 없음Ct는값 상황,다음 문제 해결:

1, 순환 수 부족(보통 넘지 않는다45순환,배경값뿐만 아니라,정량도 정확하지 않다);

2、PCR는프로그램 설정 오류,형광 신호를 검출하는 절차가 잘못되었다.일반SG는법채택72℃확장 시 채집TaqMan의법칙은 일반적으로 퇴화가 끝날 때나 연장될 때 신호를 채집한다,또한 형광 채집 선택 여부;

3, 유인물 또는 프로브 분해.통과 가능페이지전기 수영은 유인물과 탐침의 분해 여부를 측정한다.;

4, 템플릿 양 분해 또는 이전 스플라인 부족(초과 없음500ng,시약함 설명서에 근거하면 된다),미지의 농도의 샘플은 계열 희석 샘플의 최고 농도부터 시작해야 한다;템플릿 분해가 발생한 경우,샘플 준비 중 불순물의 도입 및 반복적인 동결 상황을 고려해야 한다,템플릿 샘플을 소량으로 나누어 비축하는 것을 건의합니다,반복되는 얼음 녹는 것을 피하다;

5, 유인물 탐지기가 적합한지 여부(특히 내포된 자를 뛰어넘는 유인물,게놈 증폭 보장DNA;상하류 유인물Tm값 초과4℃이상도 증폭에 영향을 줄 수 있다)。

CT는너무 늦다

상대 정량에서Ct값은 일반적으로1525사이가 좋아요.,절대 정량에 있다면,복제본이 적은 샘플, Ct값이 커집니다.,그런데 웬만하면 넘지 말아야 돼요.40순환,그렇지 않으면 정량이 정확하지 않다.

그래서,판단Ct는값이 너무 늦게 나타나는 것이 비정상인지 여부,구체적인 실험 설계와 목적에 따라 진행해야 한다.

1, 증가 효율이 낮다.유인물 사이 또는 유인물과 프로브의 비율이 맞지 않음,최적화 필요;유인물 또는 프로브 설계 불합리,재설계 필요;

2、PCR는절차가 적합하지 않다,삼보법 으로 바꾸어 반응 하다,또는 퇴화 최적화/확장 온도,퇴화 온도를 적당히 낮출 수 있다;퇴화/짧은 연장 시간(권장 시간 조건 하에서 연장 가능10s);

3、MgCl2는농도가 맞지 않다,마그네슘 이온 농도 등을 높이다.PCR는각종 반응 성분의 분해 또는 샘플의 부족;

4、PCR는산물이 너무 길다.PCR는생산물 설계 초과500bp;

5, 템플릿에 억제물이 있습니다.순도 높은 템플릿으로 진행PCR는템플릿을 테스트하거나 희석합니다.