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PCR는반응에는 어떤 시약과 설비가 필요합니까?

시약:
템플릿DNA는：PCR는반응 필요 템플릿DNA는세포, 조직, 혈액에서 추출DNA는등;유인물:PCR는반응하는 두 개의 유인물, 각각 템플릿DNA는의 양쪽 끝을 페어링하여 확장하는 데 필요한 특정 영역, 유인물도TA는복제 등의 과정에서 사용된 유인물;dNTP：PCR는반응 중에 네 가지가 필요해요.dNTP, 디옥시 아데노신 포함 (dATP는), 디옥시브로신산(dCTP는), 디옥시리신(dGTP는), 디옥시토신 산 (dTTP는), 세포 분열,DNA는합성 등 생물학 과정, 사용PCR는확장된 템플릿DNA는체인의 확장과 확장;Taq DNA는중합효소:PCR는반응에 필요한 중합효소, 일반적으로 사용Taq는중합 효소, 그리고 다른 종류의 중합 효소PFU는、Phusion은등, 확장에 사용DNA는체인,PCR 버퍼용액: 예PCR는반응 은 완충 작용 을 가지고 있어 반응 을 조절한다pH, 황산수소염SDS는, 포름알데히드와 같은 소분자 유기화합물은 증강할 수 있다PCR는반응 특이성으로 반응 효율을 높인다.효소 절단 체계:PCR는증폭은 흔히 재조합, 구축과 서열분석 등 실험절차와 관련되며 흔히 효소절단조작을 진행해야 한다.마크:분자량 의 기준 으로 판별 에 쓰인다DNA는세그먼트 크기 도구.DNA는순화 시약함: 순화에 사용PCR는반응산물;
장치:
PCR는기기: 반응 온도 제어, 보장PCR는반응 시 서로 다른 온도 단계의 엄격한 통제;수영 슬롯: 분리용PCR는산물을 늘리다.핵산 추출기: 조직 샘플에서 핵산을 전자동으로 추출한다. 이 시약과 장비들은PCR는분자생물학 기술에서 모두 질서가 완비된 기초 위에서만 진행할 수 있다PCR는반응하여 정확한 결과를 얻다.

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PCR는관련 기초 실험:

PCR는반응 기본 단계 일반적인 중합효소 체인 반응은20에35다음 항목을 포함하는 개의 루프 구성3단계:

1. 변성:

고온(93-98℃) 이중 체인DNA는분리하다.고온은 두 갈래로 연결될 것이다DNA는체인의 수소 결합이 끊어지다.첫 번째 루프 이전에는 일반적으로 템플릿과 지시자가 분리되어 단일 체인으로만 존재하는지 확인하기 위해 장시간 가열됩니다.단계 시간1-2분, 다음PCR는기기는 온도를 조절하여 순환 단계에 들어간다.

2. 퇴화 또는 접합,복성:

에서DNA는이중 체인을 분리한 후, 온도를 낮추어 유인물을 단일 체인에 결합시킬 수 있게 한다DNA는위.이 단계의 온도는 일반적으로 유인물 용해점보다 낮다5℃. 잘못된 퇴화 온도로 인해 템플릿과 결합되지 않거나 잘못 결합될 수 있습니다.단계 시간1-2분.

3. 연장:

DNA는중합효소는 온도가 내려갈 때 결합된 유인물로부터 따라서DNA는체인 합성 상호 보완 체인.이 단계의 온도는DNA는중합 효소.이 단계의 시간은 중합효소와 합성이 필요한DNA는세그먼트 길이.전통적인Taq는예상 작성1000bp/분, 최신Tbr는기열균부씨서열균) 약40초, 상업회사가 생산한 융합형중합효소는 약10-15초.

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PCR는반응 조건 최적화:

1, 변성 온도 및 시간:

보증 템플릿DNA는체인 해제는 전체 보장PCR는확대 성공의 관건.가열90~95°C, 30~60s, 아무리 복잡해도DNA는분자도 단일 체인으로 변성할 수 있다.온도가 너무 높거나 고온의 지속 시간이 너무 길면Taq는효소 활성 및dNTP는분자가 손해를 입히다.

2, 복성 온도 및 시간:

PCR는특이성을 증폭시키는 것은 복성 과정 중 유인물과 템플릿의 결합에 달려 있다.복성 온도가 높을수록 산물 특이성이 높다.복성 온도가 낮을수록 산물 특이성이 낮다.유인물의Tm값 발생.

3, 확장 온도 및 시간:

일반 위치Taq는효소 최적 작용 온도70~75°C사이.유인물이 작음16개의 뉴클레오티드 시, 너무 높은 연장 온도는 유인물과 템플릿의 결합에 불리하며, 천천히 온도를 올릴 수 있다70~75°C. 확장 반응 시간은 확장할 세그먼트의 길이에 따라 달라질 수 있으며 보다 작습니다.1kb, 1분충분하다;보다 큼1kb의연장 시간이 필요합니다.Taq는효소는 근거할 수 있다1kb/분시간을 늘리다.여기서 주의해야 할 것은 연장 시간이 너무 길면 비특이 증폭이 나타날 수 있다는 것이다.따라서 적절한 연장 시간을 설정해야 합니다.

4, 주기 수:

다른 매개변수를 선택하면PCR는반복 횟수는 주로 템플릿에 따라 다름DNA는의 농도.이론적으로 말하면20〜25회 순환 후,PCR는생산물 의 축적 은 최대치 에 도달할 수 있지만, 실제 작업 중 매 단계 반응 의 생산율 은 도달할 수 없기 때문 이다100%따라서 템플릿 농도에 관계없이20~30차는 비교적 합리적인 순환 횟수이다.순환 횟수가 많을수록 비특이 증폭이 증가한다.