핵산 추출기

TriZol 총 RNA 추출 시약

제품 번호:R1000

저장 조건:TriZol 총 RNA 추출 시약실온에서 12개월 동안 안정적으로 보관할 수 있다.에 저장하는 것이 좋습니다.2~8°C의 환경에서.

중요 팁:

본 제품은 페놀을 함유하고 있어 독성과 부식성을 가지고 있다.만약 체내에 흡입하거나 피부에 접촉하거나 삼키면 중독, 화상 및 기타 신체상해를 초래할수 있다.본 제품을 사용할 때에는 장갑, 안대, 마스크 등 보호물품을 착용해야 한다.만약 부주의로 접촉했다면 즉시 대량의 물로 씻어 병원으로 가서 치료해야 한다.

제품 설명:

TriZol 총 RNA 추출 시약스펙트럼형 총 RNA 추출 시약입니다.실험 조작이 빠르고 편리하며 색깔이 선명하고 층을 나누기 쉽다.이 시약은 동물 조직, 식물 재료, 각종 미생물 및 배양 세포 등의 시료에서 총 RNA를 추출할 수 있는 광범위한 적용 범위를 가지고 있다.이 방법은 소량의 조직(50-100mg)과 세포(5×106) 및 대량의 조직(≥1g)과 세포(>107)에 비교적 좋은 분리 효과가 있다.시료는 TriZol 총 RNA 추출 시약에서 충분히 분해됨과 동시에 가능한 한 RNA의 무결성을 보장 할 수 있습니다.클로로포름 원심을 넣으면 용액은 상층 무색 수상, 중간층, 하층 적색 유기상, RNA는 상청층에 분포하는 세 층으로 나뉜다.상청층을 수집한 후 이소프로필알코올이 침전되면 총 RNA를 회수할 수 있다.추출된 총 RNA는 완전성이 좋고 단백질 및 DNA 오염이 없으며 다양한 분자 생물학의 일반적인 실험에 사용할 수 있습니다.RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern blot、Dot Blot、체외 번역 등.

TriZol 총 RNA 추출 시약 시약은 다양한 종류의 다른 분자량 크기의 다양한 RNA의 석출을 촉진합니다.예를 들어, 쥐의 간에서 추출 된 RNA 글리세린 겔은 전영하고 브롬화 에틸 리딘으로 염색되어 7 kb와 15 kb 사이의 불연속 한 많은 고분자량 스트립 (mRNA와 hnRNA 성분), 두 개의 우세 한 리보카도 ~ 5 kb (28S) 와 ~ 2 kb (18S), 저분자량 RNA 0.1 과 0.3 kb (tB) 사이의 RNA) 를 볼 수 있습니다.추출된 RNA가 TE로 희석되었을 때 그 A260/A280 비율은 ≥1.8이다.일반 글리세린 겔 전영이라면 28S의 위치는 약 2kb, 18S는 약 1kb의 위치로 농도에 따라 젤의 위치 변화가 크다.

참고 사항:

1.견본용TriZol 총 RNA 추출 시약은 균일한 펄프 후, 즉시 클로로포름을 넣기 전에 -70 ° C에서 한 달 이상 배치 할 수 있습니다.에탄올 75%에 보관된 RNA 침전은 2-8 °C에서 일주일, -20 °C 조건에서 1 년 보관 할 수 있습니다.RNA는 반감기가 비교적 짧고 분해가 쉬우므로 추출 후 가능한 한 빨리 cDNA, Northern Blot 등으로 반전록하는 등 후속 실험을 진행하는 것이 좋습니다.

2. 다운스트림 실험이 DNA에 매우 민감하다면 RNA를 RNase free DNase I로 처리하는 것이 좋습니다.

3.자체 시약: 클로로포름, 이소프로필알코올(새 개봉 또는 추출RNA 전용), 에탄올 75%(DEPC로 처리된 물 조제), RNase free water 또는 DEPC로 처리된 물.

4.본사는 TriZol 총 RNA 추출 시약 Reagent를 생산하여 품질이 우수하여 Invitrogen의 Trizol Reagent를 대체할 수 있습니다.추출 품질은 다운스트림 실험 * 과 동일합니다.

RNA 추출 작업 단계: (실험 전에 주의 사항을 읽으십시오.)

팁:

쓰다트리졸의 총 RNA 추출 시약은 RNA를 추출할 때 장갑과 안대를 착용해야 한다.피부와 옷의 접촉을 피하다.화학 통풍장에서 조작을 마치다.호흡기 흡입을 피하다.특별한 지침이 없는 경우 모든 작업은 15 ~ 30 ° C의 실온 조건에서 수행되어야 합니다.

1. 풀을 고르게 섞다

a. 식물 조직:

신선한 식물 조직을 취하여 액질소 속에서 충분히 연마하거나 식물 조직을 부서뜨린 후 직접TriZol 총 RNA 추출 시약에서 신속하게 연마하여 50-100mg 조직당 1ml TriZol 총 RNA 추출 시약을 넣고 골고루 섞는다.참고: 샘플 부피는 일반적으로 TriZol 전체 RNA 추출 시약 부피의 10% 를 초과하지 마십시오.

b. 동물 조직:

신선도를 취하거나-70 ℃ 동존동물조직은 될수록 잘게 자르고 매 30-100mg 조직마다 1ml TriZol 총RNA추출시약을 첨가하여 균장기는 균장처리를 한다.또는 액체 질소에 연마한 후 TriZol 총 RNA 추출 시약 1ml를 첨가하여 혼합한다.참고: 샘플 부피는 일반적으로 TriZol 전체 RNA 추출 시약 부피의 10% 를 초과하지 마십시오.

c. 단층배양세포:

최대한 잔류 배양액을 깨끗이 제거한 후 직경으로 바로3.5cm의 배양판에 1ml의 TriZol 총 RNA 추출 시약을 넣어 분해 세포를 덮고 반복적으로 불었다.필요한 트리졸의 총 RNA 추출 시약량은 세포의 수가 아닌 배양판의 면적에 따라 결정됩니다(10cm2당 1ml).트리졸의 총 RNA 추출 시약량이 부족할 때 추출된 RNA에서 DNA가 오염될 수 있다.

참고:

벽에 붙인 배양 세포는 종종 * 배양병 (그릇) 에서 떨어질 수 없다. 이것은 분해가 * 되지 않는다는 것을 의미하지는 않는다. 이때 세포막은 실제로 이미 * 파열되어 이미 모든 것을 방출했다RNA，계속하면 됩니다.

d. 세포 현액:

원심 수집 세포.에서TriZol 총 RNA 추출 시약 시약에서 이액관으로 분해 세포를 반복적으로 불어옵니다.매 5 ~ 10 ×10⁶동물 세포, 식물 또는 효모균 세포 또는 1 × 107 세균당 1 ml의TriZol 총 RNA 추출 시약. TriZol 총 RNA 추출 시약을 넣기 전에 세포 세척을 피해야 한다. 그러면 mRNA 분해 가능성이 높아지기 때문이다.일부 효모균과 세균을 파열시키려면 균장기를 사용해야 할 수도 있다.

f. 혈액:

사용TriZol 총 RNA 추출 시약반응제 LS.

2.균장 샘플을 격렬하게 진동시킨 후 실온 조건에서 놓다핵단백질을 분해하기 위해 5분.

3. 선택적 단계:

에서4°C의 조건에서 12000rpm의 원심력으로10분 동안 원심을 떠나 깨끗이 정리하다.

례를 들면 견본에 비교적 많은 단백질, 지방, 다당류 또는 근육이 함유되여있으며 식물의 덩어리줄기결절 등은 원심에서 제거할수 있다.원심 분리 후의 침전에는 세포 외막, 다당류, 그리고 고분자량이 포함되어 있다DNA，상청에는 RNA가 함유되어 있다.지방 조직의 샘플을 처리할 때, 상층부는 대량의 유지를 제거해야 한다.맑은 액체를 취하여 다음 단계로 진행하다.

4.매1mlTriZol 총 RNA 추출 시약클로로포름 0.2ml 첨가.튜브 뚜껑을 꼭 닫고 15초 동안 심하게 진동하며 실온에서 2~3분 동안 방치한다.

5.에서4 ° C 12000 rpm의 원심력 고속 냉동 원심 10-15 분.원심 분리 후 혼합물은 세 층으로 나뉜다: 하층 적색 유기 페놀 클로로포름층, 중간층, 상층 무색의 물 견본층.RNA는 예외 없이 물 표본층에 존재한다.물 샘플 레이어의 용량은 추가된 TriZol 전체 RNA 추출 시약 용량의 약 50~60% 입니다.(유기층과 중간층은 단백질과 DNA이므로 추출이 필요하면 추출방법을 문의하십시오.)

6.물샘플층을 깨끗한 원심관으로 옮기고 등체적 이소프로필알코올을 넣는다.뒤바꾸어 섞은 후 실온 배치10분.

RNA 침전은 원심 전에는 일반적으로 보이지 않으며, 원심 후에는 관 옆과 관 바닥에 접착제 침전이 형성됩니다.

7.실온이나4°C 12000rpm 원심분리 10분, 상청을 포기한다.

8.가입에탄올 75% 세척 침전.TriZol 총 RNA 추출 시약 1 ml를 사용할 때마다 1 ml 75% 에탄올로 침전을 세척합니다.

9.실온이나4°C 12000rpm 원심분리 3분, 상청을 버리고 RNA침전을 잃어버리지 않도록 주의한다.

주의: 남은 소량의 액체는 잠시 원심을 분리한 후 총머리로 빨아들일 수 있으며, 침전을 흡수하지 않도록 주의한다.

10.실온 배치2-3분, 말리기.30-100 μl RNase free water를 넣어 RNA를 충분히 녹이고 얻은 RNA는 -70 ℃에 보관하여 분해를 방지합니다.

주의: 남은 소량의 액체는 잠시 원심을 분리한 후 총머리로 빨아들일 수 있으며, 침전을 흡수하지 않도록 주의한다.