단일 클론 항체 제조 서비스

단일 클론 항체 (Mab) 는 침전-의 항원 결정 클러스터에서 생성 된 항체이며, 단일 클론 기술은 교잡종 기술이라고도 하며 1975 년에 G. KOhler와 Milstein에 의해 설립되었습니다.주요 원리는 항체를 만드는 B세포를 이용해 종양세포와 교잡해 교잡종 세포로 융합해 항체를 생산하는 것이다.

교잡종 기술로 단일 클론 저항을 제조하는 것이 목적체의 주요 단계는 다음과 같다.

(1) 항원 제조,

(2) 면역동물,

(3) 면역비장세포와 골수종양세포의 제조,

(4) 세포 융합;

(5) 교잡종 세포의 선택 배양,

(6) 교잡종 세포의 선별;

(7) 교잡종 세포의 복제화;

(8) 단일 클론 항체의 검정;

(9) 분비 단클론 항체 교잡종 세포계의 구축:

(10) 단일 클론 항체의 대량 제조.

단일 클론 항체 제조 프로세스:

1. 면역동물 면역동물은 목적항원으로 쥐를 면역하여 알레르기 B림프세포를 생성하는 과정이다.일반적으로 6~8주령의 암컷 Balb/c 생쥐를 선택하여 사전에 제정한 면역방안에 따라 면역주사를 진행한다.항원은 혈액순환이나 림프순환을 통해 외주 면역기관에 들어가 해당 B림프구 복제를 자극해 활성화·증식하고 알레르기 B림프구로 분화한다.

2. 세포융합은 안구적출방혈법으로 쥐를 처형하고 무균조작으로 비장을 제거하여 평그릇안에서 압출하고 연마하여 비장세포현액을 제조한다.준비된 동종 골수종 세포와 생쥐 비장 세포를 일정 비율로 섞고 융해 촉진제인 폴리에틸렌글리콜을 넣는다.폴리에틸렌글리콜의 작용하에 각종 림프세포는 골수종양세포와 융합되여 교잡종양세포를 형성할수 있다.

3. 선택적 배양의 목적은 융합된 교잡종 세포를 선별하는 것이며, 일반적으로 HAT 선택적 배지를 채택한다.HAT 배지에서 융합되지 않은 골수종 세포는 차황푸린인 리보핵당 전이효소가 부족해 보완 경로를 이용해 DNA를 합성하지 못해 죽는다.융합되지 않은 림프세포는 차황푸린구푸린린산핵당전이효소를 갖고있지만 그 자체가 체외에서 장기적으로 생존하지 못하고 점차 사망하고있다.융합된 교잡종 세포만 비장세포로부터 차황푸린구아닌리보핵당 전이효소를 얻었고 골수종 세포가 무한히 증식할 수 있는 특성이 있어 HAT 배지에서 생존하고 증식할 수 있다.

4. 교잡종 양성 복제의 선별과 복제화는 HAT 배양기에서 생장하는 교잡종 세포, 소수만이 예정된 특이성 단일 복제 항체를 분비하는 세포이기 때문에 반드시 선별하고 복제해야 한다.일반적으로 유한 희석법으로 교잡종 세포의 복제화 배양을 한다.민감하고 빠르며 특이한 면역학적 방법으로 필요한 단일 클론 항체를 생성할 수 있는 양성 교잡종 세포를 선별해 클론 증폭을 진행한다.

그가 분비하는 단클론항체의 면역글로불린류형, 아류, 특이성, 친화력, 항원의 표위 및 그 분자를 전면적으로 감정한후 제때에 동존한다.

5、단클론 항체의 대량 제조 단클론 항체의 대량 제조는 동물 체내 유생법과 체를 채택하는 것이 중요하다

외배양법.

(1) 체내 유생법은 Balb/c 생쥐를 취하고, 우선 복강 주사 0.5ml 액체 석랍이나 강식탄을 예처리한다.1~2주 후에 복강 내에 교잡종 세포를 접종한다.교잡종 세포는 쥐의 복강 내에서 증식하고 단클론 항체를 생성하고 분비한다.약 1~2주 동안 쥐의 복부가 팽창하는 것을 볼 수 있다.주사기로 복수를 뽑아내면 다량의 단클론 항체를 얻을 수 있다.

(2) 체외배양법은 교잡종세포를 배양병에 넣어 배양한다.배양과정에 교잡종세포는 단클론항체를 산생하고 분비하며 배양상청액을 수집하고 원심분리하여 세포와 그 파편을 제거하면 필요한 단클론항체를 얻을수 있다.그러나 이 방법으로 발생하는 항체의 양은 제한되어 있다.최근 몇 년 동안 각종 신형 배양 기술과 장치가 끊임없이 출현하여 항체의 생산량을 크게 향상시켰다.교잡종 세포가 융합되면 선별한 후에야 사용할 수 있다.교잡종 세포는 두 번으로 나뉜다: 하나, 교잡종 세포를 선별한다;2. 초선의 교잡종양세포에서 특이성항체를 산생할수 있는 교잡종양세포를 선별하는데 이 두차례의 선별방법과 원리는 각기 다르다.

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