모기 생물인 위상피류 기관 배양기 세트 Plus

인간 위장 상피 Organoid 키트 플러스

인위 상피류 기관 배양기 세트플러스

1、 제품 설명

모기 생물인 위상피류 기관 배양기 세트플러스（인간 위장 상피 Organoid 키트 플러스) 는 성체줄기세포의 원천인 사람의 위상피류기관을 구축하고 유지하는데 사용되는 화학적으로 정의된 세포배양기이다.위상피세포의 자기갱신은 줄기세포와 그 전체세포의 증식에 의해 구동된다.인간의 위상피류 기관은 구조, 세포 유형 구성, 자기 갱신 면에서 위상피의 대부분의 특징을 나타낸다.그래서 사람의 위상피 안정과 질병을 연구하는 데 희망을 제공했다.

2、 제품 정보

3、 기타 자체 재료 및 시약

4、 인위 상피류 기관 배양기 사용 설명

1、 유기관 배지 를 받은 후, 배지 를4℃ 냉장고를 해동한다.

2、 배양기 해동 후 상하가 전도되어 충분히 혼합되어 생물 안전 캐비닛이나 청정 작업대에서 일상 수요량에 따라 분장하고, 분장하는 것을 추천한다10ml/의튜브

3、 분장 후의 배양기는 밀봉하여 저장하시기 바랍니다-20℃, 사용 시 분장된 배양기를 꺼내 실온 균형을 맞춘 후 사용할 수 있다.

5、 인위 상피류 기관의 건립과 전대 배양

참고: 주요 인체 조직 재료와 관련된 연구는 모든 관련 기관 및 정부 규정을 준수해야합니다.주요 인체 조직 재료를 수집하기 전에 모든 피실험자의 알 수 있는 동의를 얻어야 한다.

a) 원대인 위피류 기관의 건립

1、 원대 조직 샘플은 이체에 있어야 한다5분미리 차가워진 살아있는 조직 보존액을 넣는다 (2-8℃샘플 튜브에서 샘플은 활성 조직 보존액으로 덮여 있어야 합니다 (샘플이 이미 다른 완충액 또는 배지 내에 있는 경우 전체 용액을 미리 차가운 활성 조직 보존액으로 대체하십시오).저온(2~8℃) 운송을 실험실로 옮깁니다.

2、 실험 전에 먼저 기질 접착제를 놓다4℃얼음에서 해동하는 동시에 배양기를 꺼내 실온의 균형을 잡는다.세포와 접촉하는 원심관, 시험관 또는 플라스틱 흡입은 유기관으로 배양하여 접착 방지 윤세액을 윤세한 후 사용해야 한다.

3、 청정작업대에서는 샘플을 배양접시에 옮겨 얻은 조직이 상피로 구성되었는지 평가한다.지방이나 근육 조직이 있다면 해부 현미경에서 칼이나 핀셋을 사용하여 가능한 한 많은 비상피 성분을 제거하십시오.지방이나 근육 조직이 없다면 즉시 다음 단계로 넘어가십시오.

4、 상피류 기관 기초배지 또는 이중항성을 함유한DPBS는조직을 두 번 씻다.

5、 핀셋을 사용하여 조직을 다음으로 이동1.5mL원심관 에서 얼음 위 에서 무균 으로 으스러뜨리다0.5~2mm²크기

6、 잘게 자른 조직용50배율 조직 볼륨의 중첩 및 이동15ml원심관 안에서 중현 조직 블록을 불어 치다.에37℃，100rpm조건하의 항온 흔들침대에서 수평 진동 소화15-30분마다10분 동안 조직 소화 상황을 관찰하고, 조직 블록이 뚜렷하게 분산되고, 현액이 비교적 혼탁할 때, 적당량의 조직 소화 현액 거울 검사를 취하고, 현액 중에 비교적 많은 살아있는 세포 덩어리가 있으면 소화를 종료할 수 있으며, 만약 조직 조각이 비교적 크거나 소화가 적당히 소화 시간을 연장할 수 없다.소화 중 다양한 사양 사용 가능 (큰 순서에서 작은 순서로10ml、5mL의、1ml)의 이액관은 조직을 불어 현액을 소화하여 충분한 소화를 돕는다.대부분의 조직 단편이 통과할 수 있을 때1ml이액기가 머리를 빨아들일 때 소화 과정이 완성된다.

7、 ~을FBS는조직 소화 혼합물 중 최종 농도는2%및 사용100μm세포 여과기.

8、 여과액을 모아서4℃다음250g원심3분.보이는 붉은색이 침전된 상태에서 맑은 액체를 마시고2ml적혈구 분해액 중현침전, 실온에서 적혈구 분해1분 및4℃다음250g원심3분.

9、 상청액을 흡입하고 침전중을 상피류기관 기초배지에 매달아4℃다음250g원심3분, 이 단계를 다시 반복하여 소화액과FBS는, 원심분리 전에 적당량의 현액을 취하여 세포활성검사를 진행한다.

10、 상청액을 흡입하고 배양수요에 따라 적당량의 세포침전을 취하여 기질접착제(>70%) 그리고 얼음 위에 섞는다. (주의: 섞고 부는 동작은 가볍고 부드러워야 한다. 대량의 기포가 생기는 것을 절대 피해야 한다. 상온이 섞이면15초간) 얼음 위에 골고루 섞는다.참고: 젤라틴은 굳지 않도록 얼음에 보관해야 합니다.가능한 한 빨리 이 과정을 진행하다.대략10,000개 세포는 접종해야 한다25μL기질 접착제 중.기질접착제를 지나치게 희석하지 말아야 한다 (기질접착제는 비례해야 한다>70%(기질 접착제 볼륨/전체 부피)) 고체 액체의 정확한 형성을 억제할 수 있기 때문이다.

11、 기질접착제와 세포의 혼합현액을 배양공판의 밑부분 정자에 점입하고 총머리를 사용하여 현액을 약간 평평하게 펴고 현액이 공판의 옆벽에 접촉하지 않도록 주의해야 한다.(권장:96공판접종3~10μL/구멍,48공판접종10~20μL/구멍,24공판접종20~30μL/구멍).

주의: 일단 류기관이 기질접착제에 다시 걸려있으면 될수록 빨리 종판을 진행해야 한다. 왜냐하면 기질접착제는 시험관이나 이액기 흡두에서 응고될수 있기때문이다.

12、 배양판을 넣다37℃와5%CO₂의 배양함 속15-25분, 기질 접착제를 굳히세요.

13、 기질접착제가 응고된후 벽을 따라 실온균형의 류기관배지를 천천히 첨가하여 이미 응고된 구조를 파괴하지 않도록 해야 한다.(권장:96슬롯 추가100μL/구멍,48슬롯 추가250μL/구멍,24슬롯 추가500μL/구멍).주: 배양기를 기질 접착제 액적의 상단에 직접 첨가하지 마십시오. 왜냐하면 이것은 이미 응고된 구조를 파괴할 수 있기 때문입니다.

14、 배양판을 배치합니다.37℃와5%CO₂의 항온 배양 상자에 있습니다.

15、 간격2~3하루에 한 번 배지를 교체하고 구멍에서 배지를 조심스럽게 빨아들이며 신선한 실온 균형의 유기관 배지를 넣는다.

16、 장기의 생장 상태를 면밀히 모니터링하고, 이상적인 상황에서 사람의 유선류 기관은7-14천내에 건설하다.

b) 인위 상피류 기관의 전대 배양

1、 대기 기관 배양 지름100~500μm큰 시간 (또는 검게 변하여 더 이상 커지지 않을 때) 에 유기관의 대물림 (세대당 약1~2주).다음과 같은 조작으로 세포와 접촉한 소모품은 모두 윤세액으로 윤세한후 사용해야 한다.

2、 낡은 배양기를 흡입하고 등체적상피류기관 기초배양기를 첨가하여 세포스크레이퍼나 이액관 흡입으로 기질접착제와 류기관 혼합물을 가볍게 긁어1.5mL원심관 중(각 관 최대 수집2~3구멍 기관, 부피가 너무 크고 소화 효율이 낮은 것을 피한다), 취타5~10다음, 유기관과 기질접착제를 분리하고,300g원심3분.

3、 상청액을 제거하고5기질 접착제와 유기관 혼합물의 부피보다 배가되는 유기관 소화액은 불어서 고루 섞은 후 둔다37℃배양함에서 소화5~10분.꺼내고 불고 섞어서10μL혼합액경은 작은 세포 덩어리로 소화되는지 검사하며, 소화가 충분하지 않으면 소화 시간을 적당히 연장할 수 있다.세포 계수를 요구하면 단일 세포로 소화해야 하며, 소화 시간을10~20분 후 소화 종료 후 백그라운드 블루 염색 세포 계수 진행.소화 과정을 면밀히 감시하면 유기관 해리액 중 부화 시간이 가장 짧다.

4、 소화 완료 후, 추가5배 체적 상피류 기관 기초 배양기 를 불어 섞어 소화 반응 을 끝낸 다음250g원심3분.

5、 상청액 을 흡입 하고 상피류 기관 기초 배지 로 세척 하다2다음에 남아 있는 소화액을 제거하다.차세척은 유기관을 병합하여 같은 원심관에 수집할수 있다.

6、 세척이 완료되면 원심침전 중인 세포를 전대배양하고 세포침전에 기질접착제(>70%) 그리고 얼음에 고루 섞는다. (주의, 고루 섞고 부는 동작은 가볍고 부드러워야 한다. 대량의 기포가 생기는 것을 절대 피해야 한다. 상온이 고르게 섞이면15초간) 얼음 위에 골고루 섞는다.참고: 기본 젤라틴 희석 비율은70%이상은 배양 과정 중 기질 접착제의 구조 안정성을 보장합니다.

7、 기질접착제와 세포의 혼합현액을 배양공판의 밑부분 정자에 점입하고 총머리를 사용하여 현액을 약간 평평하게 펴고 현액이 공판의 옆벽에 접촉하지 않도록 주의해야 한다.(권장:96공판접종3~10μL/구멍,48공판접종10~20μL/구멍,24공판접종20~30μL/구멍).참고: 이 단계는 기질 접착제의 실온 응고를 방지하기 위해 가능한 한 빨리 완료되어야 합니다.

8、 배양판을 넣다37℃와5%CO₂의 배양함 속15-25분, 기질 접착제를 굳히세요.

9、 기질접착제가 응고된후 벽을 따라 실온균형의 류기관배지를 천천히 첨가하여 이미 응고된 구조를 파괴하지 않도록 해야 한다.(권장:96슬롯 추가100μL/구멍,48슬롯 추가250μL/구멍,24슬롯 추가500μL/구멍).주: 배양기를 기질 접착제 액적의 상단에 직접 첨가하지 마십시오. 왜냐하면 이것은 이미 응고된 구조를 파괴할 수 있기 때문입니다.

10、 배양판을 배치합니다.37℃와5%CO₂의 항온 배양 상자에 있습니다.

11、 간격2~3하루에 한 번 배지를 교체하고 구멍에서 배지를 조심스럽게 빨아들이며 신선한 실온 균형의 유기관 배지를 넣는다.

12、 유기관의 생장 상태를 면밀히 모니터링하여, 유기관이 다음 실험을 진행해야 할 때까지.

V2.1버전

업데이트 시간:2025/06/20