모기생물인 결장류 기관배양배지 세트 Plus(증폭)

인간 Colonic Organoid Kit 플러스（확장）

인간 결장류 기관 배양기 세트플러스(증가)

1、 제품 설명

모기 생물인 결장류 기관 배양기 세트플러스(증폭)【인간 Colonic Organoid Kit Plus (확장) 플러스"인간결장류기관을 증식하는데 사용되는 배양기로서 증식시의 인간결장류기관은 주로 결장줄기세포와 결장조세포로 구성되였다.결장류 기관은 자기 갱신과 분화 능력, 조직 구조, 세포 유형과 기능 면에서 체내 결장 상피의 특징을 재현하기 때문에 인간 결장 연구의 이상적인 체외 모델이다.

2、 제품 정보

3、 기타 자체 시약 및 소모품

4、 인간 결장류 기관 배양기(증폭) 사용 설명

1、 유기관 배지 를 받은 후, 배지 를4냉장고를 녹이다.

2、 배양기 해동 후 상하가 전도되어 충분히 혼합되어 생물 안전 캐비닛이나 청정 작업대에서 일상 수요량에 따라 분장하고, 분장하는 것을 추천한다10ml/의관.

3、 분장 후의 배양기는 밀봉하여 저장하시기 바랍니다-20℃, 사용 시 분장된 배양기를 꺼내 실온 균형을 맞춘 후 사용할 수 있다.

5、 인간 결장류 기관의 건립과 전대 배양

참고: 원래 인체 조직 재료와 관련된 연구는 모든 관련 기관 및 정부 규정을 준수해야합니다.주요 인체 조직 재료를 수집하기 전에 모든 피실험자의 알 수 있는 동의를 얻어야 한다.

a) 원대인 결장류 기관의 건립

1、 원대 조직 샘플은 이체에 있어야 한다5분미리 차가워진 살아있는 조직 보존액을 넣는다 (2-8℃샘플 튜브에서 샘플은 활성 조직 보존액으로 덮여 있어야 합니다 (샘플이 이미 다른 완충액 또는 배지 내에 있는 경우 전체 용액을 미리 차가운 활성 조직 보존액으로 대체하십시오).저온(2~8℃) 운송을 실험실로 옮깁니다.

2、 실험 전에 먼저 기질 접착제를 놓다4℃얼음에서 해동하는 동시에 배양기를 꺼내 실온의 균형을 잡는다.세포와 접촉하는 원심관, 시험관 또는 플라스틱 흡입은 유기관으로 배양하여 접착 방지 윤세액을 윤세한 후 사용해야 한다.

3、 청정작업대에서는 샘플을 배양접시에 옮겨 얻은 조직이 상피로 구성되었는지 평가한다.지방이나 근육 조직이 있다면 해부 현미경에서 칼이나 핀셋을 사용하여 가능한 한 많은 비상피 성분을 제거하십시오.지방이나 근육 조직이 없다면 즉시 다음 단계로 넘어가십시오.

4、 조직 샘플을 예비 냉각 및 이중 임피던스 장착으로 이동DPBS는의 배양그릇에서 장강면은 위를 향하고 한손은 장조직의 한쪽 끝을 끼우고 다른 한손은 조각을 사용하여 장강표면의 점액이나 잔류한 분뇨를 가볍게 긁어낸후 결장조직을 새로운 이중항성을 함유한 곳에 놓는다DPBS는의 배양그릇에서 세척2-3차.세척 후 의 장 을 약 까지 으스러뜨리다2mm * 5mm의크기, 다음으로 이동50ml원심관 에서 격렬한 진동 이 일어났다30s(수직 상하 진동20차례차례 계산하다1s세 번)상청 을 버리고 중복 하다3차.

5、 소화: 첨가30ml의DPBS는용액에 재첨가300μL 0.5M EDTA, 까지EDTA는최종 농도는5mM의설치하다.4℃요상 위,80rpm, 소화20~30분샘플 양에 따라 소화 가능20분 동안 흔들어 섞은 후 거울 아래에서 소화 상황을 관찰하고, 완전한 은둔 구조를 관찰하면 다음 작업을 진행할 수 있다.)

6、 세척: 소화가 완료된 후, 조용히 장단이 침전될 때까지 기다리고, 상청을 버린다.예냉 가입DPBS는, 가볍고 부드럽게 흔들고, 조용히 한 후 상청을 버리고, 반복2보조 제거EDTA는。

7、 다시 걸기: 가입30ml예냉의 함유0.1%BSA의DPBS는소용돌이10초, 상청100μm여과망 여과, 여과망을 뚫은 조직 현액 수집, 중복 수집2차.

8、 수집:300g원심력4℃원심3분。

9、 상청액을 흡입하고 침전중을 상피류기관의 기초배지에 매달아 현액을 취하여 은닉계수를 한다.

10、 300g원심력4℃원심3분, 상청액을 흡입하고 배양수요에 따라 적당량의 세포침전을 취하여 기질접착제를 첨가한다 (>70%) 그리고 얼음 위에 섞는다. (주의: 섞고 부는 동작은 가볍고 부드러워야 한다. 대량의 기포가 생기는 것을 절대 피해야 한다. 상온이 섞이면15초간) 얼음 위에 골고루 섞는다.참고: 젤라틴은 굳지 않도록 얼음에 보관해야 합니다.가능한 한 빨리 이 과정을 진행하다.대략50은닉처는 접종해야 한다25μL기질 접착제 중.기질접착제를 지나치게 희석하지 말아야 한다 (기질접착제는 비례해야 한다>70%(기질 접착제 볼륨/전체 부피)) 고체 액체의 정확한 형성을 억제할 수 있기 때문이다.

11、 기질접착제와 세포의 혼합현액을 배양공판의 밑부분 정자에 점입하고 총머리를 사용하여 현액을 약간 평평하게 펴고 현액이 공판의 옆벽에 접촉하지 않도록 주의해야 한다.(권장:96공판접종3~10μL/구멍,48공판접종10~20μL/구멍,24공판접종20~30μL/구멍).

12、 주의: 일단 류기관이 기질접착제에 다시 걸려있으면 될수록 빨리 종판을 진행해야 한다. 왜냐하면 기질접착제는 시험관이나 이액기 흡두에서 응고될수 있기때문이다.

13、 배양판을 넣다37℃와5%CO₂의 배양함 속15-25분, 기질 접착제를 굳히세요.

14、 기질접착제가 응고된후 벽을 따라 실온균형의 류기관배지를 천천히 첨가하여 이미 응고된 구조를 파괴하지 않도록 해야 한다.(권장:96슬롯 추가100μL/구멍,48슬롯 추가250μL/구멍,24슬롯 추가500μL/구멍).주: 배양기를 기질 접착제 액적의 상단에 직접 첨가하지 마십시오. 왜냐하면 이것은 이미 응고된 구조를 파괴할 수 있기 때문입니다.

15、 배양판을 배치합니다.37℃와5%CO₂의 항온 배양 상자에 있습니다.

16、 간격2~3하루에 한 번 배지를 교체하고 구멍에서 배지를 조심스럽게 빨아들이며 신선한 실온 균형의 유기관 배지를 넣는다.

17、 장기의 생장 상태를 면밀히 모니터링하다.

b) 인간 결장류 기관의 전대 배양

1、 대기 기관 배양 지름600μm큰 시간 (또는 검게 변하여 더 이상 커지지 않을 때) 에 유기관의 대물림 (세대당 약1주).다음과 같은 조작으로 세포와 접촉한 소모품은 모두 윤세액으로 윤세한후 사용해야 한다.

2、 낡은 배양기를 흡입하고 등체적상피류기관 기초배양기를 첨가하여 세포스크레이퍼나 이액관 흡입으로 기질접착제와 류기관 혼합물을 가볍게 긁어1.5mL원심관 중(각 관 최대 수집2~3구멍 기관, 부피가 너무 크고 소화 효율이 낮은 것을 피한다), 취타5~10다음, 유기관과 기질접착제를 분리하고,300g원심3분.

3、 상청액을 제거하고5기질 접착제와 유기관 혼합물의 부피보다 배가되는 유기관 소화액은 불어서 고루 섞은 후 둔다37℃배양함에서 소화3분.꺼내고 불고 섞어서10μL혼합액경은 소화 여부를 검사한다300μm좌우 기관 덩어리.

주: 한 단계 중현침전은 취타의 강도와 횟수를 통제해야 하는데, 류기관 덩어리가 크기로 통제되는 것이다300μm左右。

4、 소화 완료 후, 추가5배 체적 상피류 기관 기초 배지 를 부드럽게 불어 섞어 소화 반응 을 중지시킨 다음250g원심3분.

5、 상청액 을 흡입 하고 상피류 기관 기초 배지 로 세척 하다2다음에 남아 있는 소화액을 제거하다.차세척은 유기관을 병합하여 같은 원심관에 수집할수 있다.

6、 세척이 완료되면 원심침전 중인 세포를 전대배양하고 세포침전에 기질접착제(>70%) 그리고 얼음에 고루 섞는다. (주의, 고루 섞고 부는 동작은 가볍고 부드러워야 한다. 대량의 기포가 생기는 것을 절대 피해야 한다. 상온이 고르게 섞이면15초간) 얼음 위에 골고루 섞는다.참고: 기본 젤라틴 희석 비율은70%이상은 배양 과정 중 기질 접착제의 구조 안정성을 보장합니다.

7、 기질접착제와 세포의 혼합현액을 배양공판의 밑부분 정자에 점입하고 총머리를 사용하여 현액을 약간 평평하게 펴고 현액이 공판의 옆벽에 접촉하지 않도록 주의해야 한다.(권장:96공판접종3~10μL/구멍,48공판접종10~20μL/구멍,24공판접종20~30μL/구멍).대략50개별 기관 덩어리 접종은25μL기질 접착제 중.참고: 이 단계는 기질 접착제의 실온 응고를 방지하기 위해 가능한 한 빨리 완료되어야 합니다.

8、 배양판을 넣다37℃와5%CO₂의 배양함 속15-25분, 기질 접착제를 굳히세요.

9、 기질접착제가 응고된후 벽을 따라 실온균형의 류기관배지를 천천히 첨가하여 이미 응고된 구조를 파괴하지 않도록 해야 한다.(권장:96슬롯 추가100μL/구멍,48슬롯 추가250μL/구멍,24슬롯 추가500μL/구멍).주: 배양기를 기질 접착제 액적의 상단에 직접 첨가하지 마십시오. 왜냐하면 이것은 이미 응고된 구조를 파괴할 수 있기 때문입니다.

10、 배양판을 배치합니다.37℃와5%CO₂의 항온 배양 상자에 있습니다.

11、 간격2~3하루에 한 번 배지를 교체하고 구멍에서 배지를 조심스럽게 빨아들이며 신선한 실온 균형의 유기관 배지를 넣는다.

12、 류기관의 생장상태를 면밀히 감시하여 류기관이 다음단계의 실험을 진행해야 할 때까지 해야 한다.

V2.0버전

업데이트 시간:2025/6/12