모기생물 간내담관암류 기관배양기 세트

인간 Intrahepatic Cholangiocarcinoma Organoid 키트

인간내담관암 장기배양기 세트

1、 제품 설명

모기생물인 간내담관암류 기관배지 세트(인간 Intrahepatic Cholangiocarcinoma Organoid 키트)는 사람의 간내담관암류기관을 구축하고 유지하는데 사용되는 화학정의의 세포배양기이다.환자 출처의 종양류 기관은 원시 종양의 게놈과 병리적 특징을 요약하기 때문에 의학 연구와 정밀 의학에서 큰 전망을 가지고 있다.

2、 제품 정보

3、 기타 자체 재료 및 시약

4、 인간내담관암류 기관배지의 제조

무균 조작 기술을 사용하여 간내담관암류 기관 배양기를 조제하다.다음은 제조10ml필요에 따라 사용량을 조정할 수 있는 배지의 예

1、 빙상 해동 간내담관암류 기관 배양인자B(50x)간내담관암 장기배양인자와C(250x)。

주의: 해동 후에는 간내담관암류 기관배양인자를 권장한다B(50x)간내담관암 장기배양인자C(250x). 분리하여 포장한 후 보관하여 사용하며, 반복적으로 얼지 않도록 한다.

2、 ~을200uL의간내담관암 기관 배양인자B(50x)，40μL간내담관암 기관 배양인자C(250x)더하기9.76ml간내담관암류 기관배양기초배지에서 충분히 혼합하여 조제하다10ml간내담관암 기관 배양기.

주의: 조제 후의 간내담관암류 기관 배양기는2-8°C저장, 2주 이내 사용을 권장합니다.간내담관암 기관 배양인자B(50x)세균과 진균 항생제가 들어 있다.

5、 환자 출처의 간내담관암류 기관의 원대 배양

참고: 주요 인체 조직 재료와 관련된 연구는 모든 관련 기관 및 정부 규정을 준수해야합니다.주요 인체 조직 재료를 수집하기 전에 모든 피실험자의 알 수 있는 동의를 얻어야 한다.

a) 원대인 간내담관암류 기관의 건립

1、 원심관으로 원발성 간내담관암류 조직 파편을 차가운 원발조직 저장 용액에 수집한다.조직 샘플을4℃, 분리가 시작될 때까지.

2、 획득한 조직 파편이 상피로 구성되었는지 평가합니다.지방이나 근육 조직이 있다면 해부 현미경에서 칼이나 핀셋을 사용하여 가능한 한 많은 비상피 성분을 제거하십시오.지방이나 근육 조직이 없다면 즉시 다음 단계로 넘어가십시오.

3、 상피기관 기초배지 또는DPBS는조직을 두 번 씻다.

4、 칼을 사용하거나 조직을 잘게 썰기1-3mm³의 작은 조각, 세포 배양 그릇에 넣습니다.

5、 에서37℃사용10ml종양 조직 소화 용액은15ml원심관에서 조직 조각을 소화, 소화 시간 변경,30분 이내1.5시간이 같지 않다.소화 과정을 자세히 모니터링하면 적당히 불어서 청을 취하고 소화 정도를 관찰할 수 있다.대부분의 조직 단편이 통과할 수 있을 때1ml이액기가 머리를 빨아들일 때 소화 과정이 완성된다.

6、 ~을FBS는조직 소화 혼합물 중 최종 농도는2%및 사용100μm세포 여과기.

7、 수집 및4°C다음250g원심 여과 세포3분.보이는 붉은색이 침전된 상태에서 청액을 흡입하여 사용2ml적혈구 분해액 중현침전, 실온에서 적혈구 분해1분 및4°C다음250g원심3분.

8、 상청액을 빨아들이고 침전을 기초배지에 다시 걸면,4°C다음250g원심3분, 이 단계를 다시 반복합니다.

9、 상청액을 빨아들여 기질 접착제에 침전시키다.기질 접착제는 응고를 방지하기 위해서 얼음 위에 보관해야 한다.가능한 한 빨리 이 과정을 진행하다.사용하는 기질 접착제의 양은 입자의 크기에 달려 있다.대략10，000개 세포는 접종해야 한다25μL기질 접착제 중.

10、 기질접착제를 지나치게 희석하지 말아야 한다 (기질접착제는 비례해야 한다>70%(기질 접착제 볼륨/전체 부피)) 고체 액체의 정확한 형성을 억제할 수 있기 때문이다.유기관을 함유한 기질 접착제를24구멍 세포 배양판의 밑부분, 각 액체 방울은 구멍의 중심을 중심으로 약30μL。

주의: 일단 류기관이 기질접착제에 다시 걸려있으면 될수록 빨리 종판을 진행해야 한다. 왜냐하면 기질접착제는 시험관이나 이액기 흡두에서 응고될수 있기때문이다.기질 입자가 관벽에 닿지 않도록 해라.

11、 배양판을 넣다37°C와5%CO₂의 배양함 속15-25분, 기질 겔을 굳히세요.

12、 필요한 양의 간내담관암 장기배지 준비.

13、 일단 기질 접착제가 굳으면(15-25분), 보드를 열고 각 구멍에 조심스럽게 추가500μL간내담관암 기관 배양기.

참고: 이미 응고된 구조를 손상시킬 수 있으므로 배양기를 기질 접착제 액체 방울의 상단에 직접 추가하지 마십시오.

14、 배양판을 배치합니다.37℃와5%CO₂의 항온 배양 상자에 있습니다.

15、 간격3-4하루에 한 번 배지를 교체하고 구멍에서 배지를 조심스럽게 빨아들이며 신선한 예열된 유기관 배지로 대체합니다.

16、 장기의 생장 상태를 면밀히 모니터링하고, 이상적인 상황에서 간내담관암 장기는7-10천내에 건설하다.

b) 인간내담관암류기관의 전대배양

1、 윤세액 윤세된 창머리로 류기관을 불어 긁어내고, 류기관과 배지의 현액을 윤세액 윤세된 것으로 옮긴다1.5mLEP관리 중.

2、 윤세액을 거쳐 윤세된 총머리로 류기관부상액을 힘껏 중상하여 류기관과 기질접착제를 분리시켰다.

3、 250g원심력 실온 원심3분。

4、 상청을 버리고 유기관 소화액을 사용하거나 기계로 파괴한다.류기관 소화액을 사용하는 세포의 해리에 대하여, 류기관 소화액 중 류기관 부유액을 중현하고, 이액기는 반복적으로 위아래로 불어서 놓는다37°C유기관이 해리될 때까지 부화하다.필터링 헤드 사용2분 반복 상하 흡입8부류기관의 해리를 돕다.소화 과정을 면밀히 감시하면 유기관 해리액 중 부화 시간이 가장 짧다.기계 고장이 발생하면1.5mL상피류 기관 기초배지 중 중현류 기관 현액.조심스럽게 이액관 으로 유기관 의 부유액 을 흡수하여 상하 를 반복 하다30다음, 이것은 소화에 도움이 될 것이다.

주의: 유기관 해리액에서 해리를 초과하지 마라7분, 이는 비교적 나쁜 종류의 기관의 성장과 심지어 파괴를 초래할 수 있기 때문이다.경험에 의하면 작은 세포의 혼합물이라면10-50개의 세포로 이루어진 세포 덩어리는 소화가 완료된다.

5、 소화 완료 후, 사용1ml상피류 기관 기초 배양기 를 한 차례 씻은 후 실온 하250g원심3분.

6、 상청을 버리고 적당량의 기질접착제로 중현류기관을 침전시키고 중현한후 얼음우에 놓으며 중현시간은 초과하지 않는다30년대기질 접착제가 너무 일찍 굳는 것을 피하다.

참고: 기본 젤라틴 희석 비율은70%이상은 배양 과정 중 기질 접착제의 구조 안정성을 보장합니다.

7、 기질 접착제와 유기관의 혼합 현액을 점입하다48대시보드의 아래쪽이 바르고 액체가 대시보드의 옆벽에 닿지 않도록 합니다. 각 구멍마다15-20uL좌우.참고: 이 단계는 기질 접착제의 실온 응고를 방지하기 위해 가능한 한 빨리 완료되어야 합니다.

8、 접종이 완료된 배양판을37℃이산화탄소 항온 배양 상자 중, 부화15분좌우 대기 젤라틴 응고.

9、 간내담관암류 기관 배양기를 조제하다.

10、 기질접착제가 굳으면 이미 조제된 사람의 간내담관암류기관배지를 첨가하여48슬레이트 구멍마다 추가250uL의배양기.

11、 ~을48구멍 플레이트 배치37℃이산화탄소 배양함에서 배양하여 유기관에 이르기까지 진일보한 실험이 필요하다.

V2.0버전

업데이트 시간:2025/6/21