인터루킨7 수용체(가용성) ELISA KIT은 생체 샘플의 가용성 인터루킨7 수용체 함량을 정량적으로 측정하는 도구로 면역학 연구 등에서 널리 활용된다.
인터루킨7 수용체(가용성) ELISA KIT
인터루킨7 수용체(가용성) ELISA KIT, 생물 샘플의 가용성 인터루킨7 수용체 함량을 정량 검사하는 데 사용되는 도구로 면역학 연구 등 분야에서 널리 응용되고 있다.
검측 원리: 이중 항체 협심 ELISA 방법을 사용합니다.시약함의 마이크로 공판은 가용성 인터루킨7 수용체에 대한 특이성 항체를 미리 포장했다.샘플을 넣으면 샘플에 있는 가용성 인터루킨7 수체와 고상항체가 결합된다.그 후 효소 표기된 항가용성 인터루킨7 수용체 항체를 첨가하면 이미 고상에 결합된 수용체와'고상항체-가용성 인터루킨7 수용체-효소표시 항체'복합물이 형성된다.세척 절차를 거쳐 미결합 물질을 제거하고, 다시 바탕물 용액 (예: TMB) 을 첨가하면, 효소의 촉매 작용으로 바탕물에 발색 반응이 발생하며, 색깔의 깊이와 옅음은 샘플의 가용성 인터루킨7 수용체의 함량과 정비례한다.효소 측정기를 통해 특정 파장(일반적으로 450nm)에서 흡광도를 측정해 표준 곡선과 비교하면 샘플에서 해당 수용체의 농도를 계산할 수 있다.
시약함 구성
효소 결합판: 96공 또는 48공, 프리패키지는 항가용성 인터루킨7 수용체 항체로 반응하는 운반체이다.
표준품: 보통 동결건조품으로 2병이 있습니다.사용하기 전에 표준품 희석액을 복용하여 서로 다른 농도 경도로 희석해야 하는데, 예를 들면 0, 31.2, 62.5, 125, 250, 500, 1000pg/mL 등은 표준곡선을 그리는 데 사용된다.
샘플 xi 석액: 농도가 너무 높은 측정대기 샘플을 희석하여 그 농도가 시약함의 검측범위내에 있음을 보장하는데 사용한다.
효소계 항체: 즉 HRP가 표기한 항가용성 인터루킨7 수용체 항체는 농축액이며, 사용 시 요구에 따라 효소표시 항체 희석액으로 희석해야 한다.
효소표 항체 희석액: 효소 표적 항체를 희석하는 데 전문적으로 쓰인다.
바탕물 용해액: TMB 바탕과 같이 효소 표적 항체의 HRP와 반응하여 색상 변화를 일으킬 수 있습니다.
세척액: 일반적으로 농축액으로 사용할 때 비례에 따라 증류수 또는 이온제거수로 희석하여 효소연합판을 세척하고 결합되지 않은 물질을 제거하여 배경교란을 낮추는데 사용한다.
종지액: 대부분 강산용액 (예: 황산) 으로 바탕물의 발색반응을 중지하고 반응액의 색깔을 안정시켜 읽기 편리하게 한다.
봉판막: 온육과정에서 효소연합판을 덮어 액체의 증발과 외부오염을 방지하는데 사용한다.
사용 설명서: 시약함 사용법, 주의사항, 성능지표 등을 상세히 소개한다.
샘플 요구 사항
혈청: 혈액을 채집한 후, 실온에 2시간 또는 4 ℃ 로 밤을 보내고, 1000 × g 원심분리 20분, 채취하여 준비한다.채혈은 열원이 없고 내독소가 없는 일회용 기재를 사용해야 한다.
혈장: EDTA, 헤모글로빈 등의 항응고제를 사용할 수 있다.샘플 채취 후 30분 동안 2-8 ℃ 에서 1000 × g 원심분리 15분, 제거.
세포배양상청: 세포를 배양하여 1000×g의 원심분리를 20분간 하고 세포파편과 불순물을 제거한후 청을 취한다.
조직균장: 미리 차가운 PBS로 조직을 씻어 잔류 혈액을 제거하고 조직을 자른 후 1:9(w/v)로 PBS를 넣어 얼음 위에서 충분히 연마한다.5000 × g 원심분리 5-10분을 더 거쳐 제거해 검사에 사용한다.
샘플 채집 후 단기간 내에 검측하면 4 ℃ 로 보존할 수 있다;만약 장시간 보존할 경우, -20 ℃ 또는 -80 ℃ 의 냉동이 필요하며, 반복적인 냉동을 피해야 하며, 용혈 샘플은 일반적으로 검사에 적합하지 않다.
운영 프로세스
준비 작업: 냉장고에서 시약함을 꺼내 실온(약 30분)까지 균형을 잡는다.희석 농축 세척액.
샘플링: 빈 구멍, 표준 품목 구멍 및 샘플 구멍을 설정합니다.공백구멍에 견본xi석액을 첨가하고 표준품구멍에 부동한 농도의 표준품을 첨가하며 견본구멍에 처리된 견본을 첨가하는데 매 구멍의 가견량은 보통 100μL이고 가볍게 혼합하며 37 ℃ 로 90분 동안 온육한다.
세탁: 구멍 안의 액체를 버리고 세척액으로 각 구멍을 가득 채워 1~2분 정도 담근 후 털어내고 5회 반복 세탁하여 미결합 물질을 깨끗이 씻는다.
효소 표시 항체: 구멍당 100μL의 희석된 효소표시항체작업액을 첨가하여 37 ℃ 로 60분간 온육한다.
재세탁: 위의 세탁 절차와 같습니다.
발색: 구멍당 90 μL 베이스 용액을 넣고 가볍게 섞으며 37 ℃ 피광 발색 15-30 분 (실제 발색 상황에 따라 판단).
종지 반응: 구멍당 50 μL의 종료액을 넣으면 용액 색상이 파란색에서 노란색으로 바뀝니다.
독수: 종료액을 넣은 후 15분 이내에 효소표시기로 450nm 파장에서 구멍별 흡광도(OD값)를 측정한다.
계산 결과: 표준 농도는 가로, OD값은 누진으로 표준 곡선을 그립니다.표본의 OD값에 근거하여 표준곡선에서 대응되는 농도를 찾아내고 만약 표본이 희석되였다면 상응한 희석배수를 곱하여 실제농도를 얻어야 한다.
성능 지표
검사 범위: 흔히 31.2-2000pg/mL 등 부동한 구간으로서 여러가지 견본중의 가용성백색소 7수용체의 함량에 대한 검사수요를 만족시킬수 있다.
감도: 15.6pg/mL 또는 그 이하로 낮을 수 있으며, 샘플에서 미량의 이 수용체를 검출할 수 있다.
특이성: 가용성 인터루킨7 수용체에 대해 고도의 특이성을 가지고 있으며, 다른 세포인자 수용체 등의 물질과 뚜렷한 교차 반응이 없다.
반복성: 판내 변이 계수는 일반적으로 10% 미만, 판간 변이 계수는 15% 미만으로 검사 결과의 안정성과 신뢰성을 보장합니다.
주의사항
엄격히 설명서에 따라 조작하면 부동한 로트시약함 시약을 혼용할수 없다.
조작 과정 중에 일회용 흡입을 사용하여 교차 오염을 피하고, 샘플링을 정확하게 해야 한다.
세탁은 충분한 결과가 정확함을 보장하는 관건으로서 세척판이 바닥을 가리지 않으면 가양성을 초래하기 쉽다.
바탕물 용액은 빛에 민감하기 때문에 빛을 피하여 보존하고 사용해야 하며, 발색 반응은 빛을 피하는 조건에서 진행해야 한다.
종지액은 부식성이 있으므로 조작 시 보호에 주의하여 피부와 눈에 접촉하지 않도록 한다.
표준품과 견본은 모두 복공검사를 하여 결과의 정확성을 높일것을 건의한다.이 시약함은 과학연구에만 사용되며 림상진단에는 사용할수 없다.
