인터루킨-6 수용체 ELISA KIT

인터루킨-6 수용체 ELISA KIT

인터루킨-6 수용체 ELISA KIT과학 연구에서 생물 샘플의 인터루킨-6 수용체 함량을 정량적으로 측정하는 데 사용되는 도구이다.IL-6R은 면역 조절, 염증 반응 과정에서 중요한 역할을 하기 때문에 그 함량을 측정하는 것은 관련 연구에 큰 의의가 있다.

1. 검측 원리: 시약함은 대부분 이중항체협심효소연면역흡착측정법을 채용한다.IL-6R에 대한 특이성 항체를 효소 결합판에 미리 패키지합니다.샘플을 넣으면 샘플의 IL-6R이 고체 항체 특이성과 결합됩니다.이어 효소 표시된 항IL-6R 항체를 넣어 이미 고상항체에 결합한 IL-6R과'고상항체-IL-6R-효소표적항체'복합체를 형성한다.충분히 세척하여 미결합물질을 제거하고 바탕물용액 (예를 들면 TMB) 을 첨가하여 효소의 촉매하에 바탕물에 발색반응이 발생하며 색갈의 깊이는 견본중의 IL-6R의 함량과 정비례한다.효소 측정기를 통해 특정 파장(일반적으로 450nm)에서 흡광도를 측정해 표준 곡선과 비교해 샘플의 IL-6R 농도를 산출한다.

2. 시약함 구성

• 효소 결합판: 96 또는 48 구멍, IL-6R 항체에 대한 사전 패키지, 반응 발생 캐리어입니다.

• 표준품: 보통 냉동건조품으로 2병 있어요.사용하기 전에 표준품 희석액을 재용해하고 서로 다른 농도 경도로 희석해야 한다. 예를 들면 0, 31.2, 62.5, 125, 250, 500, 1000pg/mL 등은 표준곡선을 그리는 데 사용된다.

• 샘플 xi 석액: 농도가 너무 높은 측정 대기 샘플을 희석하여 샘플 농도가 시약함 검사 범위 내에 있는지 확인합니다.

• 효소계 항체: 즉 HRP가 표기한 항IL-6R 항체는 농축액으로서 사용시 요구에 따라 효소표시항체 희석액으로 희석해야 한다.

• 효소표 항체 xi 석액: 효소 표적 항체를 희석하는 데 전문적으로 쓰인다.

• 바탕물 용해액: TMB 바탕과 같이 효소 표적 항체의 HRP와 반응하여 색상 변화를 일으킬 수 있습니다.

• 세척액: 보통 농축액으로 사용할 때 비례에 따라 증류수나 이온제거수로 희석하여 효소연합판을 세척하고 결합되지 않은 물질을 제거하여 배경교란을 낮추는데 사용한다.

• 종지액: 대부분 강산용액 (예: 황산) 으로 바탕물의 발색반응을 중지하고 반응액의 색깔을 안정시켜 읽기 편리하게 한다.

• 봉판막: 온육과정에서 효소연합판을 덮어 액체의 증발과 외부오염을 방지하는데 사용한다.

• 사용 설명서: 시약함 사용법, 주의사항, 성능지표 등을 상세히 소개한다.

3. 샘플 요구 사항

• 혈청: 혈액을 채집한 후, 실온에 2시간 또는 4 ℃ 를 두고 밤을 보낸 후, 1000 × g으로 20분간 원심을 분리하여 맑은 것을 취하여 준비한다.채혈은 열원이 없고 내독소가 없는 일회용 기재를 사용해야 한다.

• 혈장: 항응고제로 아세트아미드테트라에틸렌산(EDTA), 헤파린 등을 사용할 수 있다.샘플을 채취한 후 30분 이내에 2-8 ℃ 에서 1000 × g으로 15분간 원심분리하여 제거한다.

• 세포배양상청: 세포배양상청을 1000×g으로 20분간 원심분리하여 세포파편과 불순물을 제거한후 상청을 취하여 검사에 사용한다.

• 조직균장: 미리 차가운 인산염 완충액(PBS, 0.01M, pH = 7.4)으로 조직을 씻어 잔류 혈액을 제거한다.조직을 잘게 자른 후 약 1:9(w/v)의 비율로 PBS를 넣어 얼음 위에서 충분히 연마한다.5000 × g 원심분리 5-10분을 더 거쳐 제거해 검사에 사용한다.

• 샘플 채집 후 단기간 내에 검측하면 4 ℃ 에 보존할 수 있다;만약 장시간 보존해야 한다면, -20 ℃ 또는 -80 ℃ 에 보관하고, 반복적으로 얼지 않도록 해야 하며, 용혈 샘플은 일반적으로 검사에 적합하지 않다.

4. 운영 프로세스

• 준비 작업: 냉장고에서 시약함을 꺼내 30분 전에 실온으로 균형을 잡는다.이와 함께 농축세척액을 요구비율에 따라 증류수나 이온제거수로 희석해 준비한다.

• 샘플링: 빈 구멍, 표준 품목 구멍 및 샘플 구멍을 설정합니다.공백공에는 견본xi석액을 첨가하고 표준품공에는 부동한 농도의 표준품을 첨가하며 견본공에는 처리된 견본을 첨가하는데 매 구멍의 가견량은 보통 100μL로서 가볍게 혼합하고 37 ℃ 로 90분 동안 온육한다.

• 세탁: 온육이 끝나면 구멍 안의 액체를 버리고 세척액으로 각 구멍을 가득 채워 1~2분 정도 담근 후 털어내고 5회 반복 세탁하여 che 바닥이 미결합 물질을 씻어내도록 한다.

• 효소 표시 항체: 구멍당 100μL의 희석된 효소표시항체작업액을 첨가하여 37 ℃ 로 60분간 온육한다.

• 재세탁: 위의 세탁 단계를 반복합니다.

• 발색: 구멍당 90 μL 베이스 용액을 넣고 가볍게 섞으며 37 ℃ 피광 발색 15-30 분 (실제 발색 상황에 따라 판단 필요).

• 종지 반응: 구멍당 50 μL의 종료액을 넣으면 용액 색상이 파란색에서 노란색으로 바뀝니다.

• 독수: 종료액을 넣은 후 15분 이내에 효소표시기로 450nm 파장에서 구멍별 흡광도(OD값)를 측정한다.

• 계산 결과: 표준 농도는 가로, OD값은 누진으로 표준 곡선을 그립니다.샘플의 OD값에 따라 표준 곡선에서 해당 농도를 찾아내고, 샘플이 희석되면 해당 희석 배수를 곱해 실제 농도를 얻어야 한다.

5. 성능 지표

• 검사 범위: 시약함에 따라 차이가 있으며, 흔히 볼 수 있는 검사 범위는 31.2-2000pg/mL 등 구간으로 다양한 샘플의 IL-6R 함량의 검사 수요를 만족시킬 수 있다.

• 감도: 일반적으로 15.6pg/mL 또는 그 이하로 낮을 수 있으며 샘플에서 미량의 IL-6R을 감지할 수 있습니다.

• 특이성: IL-6R에 대한 고도의 특이성을 가지고 있으며, 다른 세포인자 수용체와 같은 물질과는 거의 교차 반응이 없다.

• 반복성: 판내 변이 계수는 일반적으로 10% 미만, 판간 변이 계수는 15% 미만으로 검사 결과의 안정성과 신뢰성을 보장합니다.

6. 주의사항

• 엄격히 설명서에 따라 조작하면 부동한 로트시약함의 시약은 혼용할수 없다.

• 조작할 때 일회용 흡입을 사용하여 교차 오염을 방지하고, 샘플링은 반드시 정확해야 한다.

• 충분히 세탁하는 것은 결과의 정확성을 보장하는 관건이며, 세탁판이 바닥을 가리지 않으면 가짜 양성 결과를 초래하기 쉽다.

• 바탕물 용액은 빛에 민감하기 때문에 빛을 피하여 보존하고 사용해야 하며, 발색 반응은 빛을 피하는 조건에서 진행해야 한다.

• 종지액은 부식성이 있으므로 조작할 때 보호에 주의하여 피부와 눈에 접촉하지 않도록 해야 한다.

• 표준품과 견본은 모두 복공검사를 하여 결과의 정확성을 높일것을 건의한다.이 시약함은 과학연구용도로만 사용되며 림상진단에 사용할수 없다.