인터루킨-6 수용체(가용성) ELISA KIT

인터루킨-6 수용체(가용성) ELISA KIT

인터루킨-6 수용체(가용성) ELISA KIT, 정량 검사 생물 샘플의 가용성 인터루킨-6 수용체 함량을 위해 설계되었으며, 과학 연구 분야에서 면역 및 염증 연구에 큰 의의가 있다.

1. 검측 원리: 쌍항체 협심효소 연면역 흡착 측정법에 근거한다.효소 결합판 사전 패키지는 가용성 인터루킨-6 수용체에 대한 특이성 항체이다.샘플을 첨가한 후, 그 중의 가용성 인터루킨-6 수체는 고상항체와 결합한다.이어 효소 표기된 항가용성 인터루킨-6 수용체 항체를 넣어'고상항체-가용성 인터루킨-6 수용체-효소 표적항체'복합물을 형성한다.세탁을 거쳐 미결합물을 제거하고 바탕물용액 (예를 들면 TMB) 을 첨가하여 효소의 촉매하에 바탕물이 색을 나타내며 색갈의 깊이와 옅음은 견본중의 이 수용체의 함량과 정비례한다.효소 측정기를 통해 450nm 파장에서 흡광도를 측정하여 표준 곡선과 비교하여 샘플의 가용성 인터루킨-6 수용체 농도를 도출한다.

2. 시약함 구성

• 효소 결합판: 96공 또는 48공 규격이 있으며 사전 패키지는 항체로 반응 적재물이다.

• 표준품: 일반적으로 동결건조품으로서 표준품희석액을 재용해하고 계렬농도경도로 희석해야 한다. 례를 들면 0, 15.6, 31.2, 62.5, 125, 250, 500, 1000pg/mL로서 표준곡선을 그리는데 사용된다.

• 샘플 xi 석액: 농도가 너무 높은 측정 대기 샘플을 희석하여 샘플 농도가 시약함 검사 범위에 적합하도록 하는 데 사용됩니다.

• 효소계 항체: 즉 HRP 표기의 항가용성 인터루킨-6 수용체 항체는 농축액이며, 효소 표시 항체 희석액을 사용하여 요구에 따라 희석해야 한다.

• 효소표 항체 희석액: 효소 표적 항체를 희석하는 데 전문적으로 쓰인다.

• 바탕물 용해액: 예를 들어 TMB 바탕은 효소 표지 항체의 HRP 반응과 색깔 변화를 일으킨다.

• 세척액: 일반적으로 농축액으로 비례에 따라 증류수 또는 이온제거수로 희석한후 효소연합판을 세척하고 미결합물질을 제거하여 배경교란을 낮추는데 사용한다.

• 종지액: 대부분 강산용액 (예: 황산) 으로 바탕물의 발색반응을 중지하고 반응액의 색깔을 안정시켜 숫자를 읽을 수 있도록 한다.

• 봉판막: 온육시 효소연합판을 덮어 액체의 증발과 외부오염을 방지한다.

• 사용 설명서: 사용 방법, 고려 사항, 성능 지표 등을 자세히 설명합니다.

3. 샘플 요구 사항

• 혈청: 혈액을 채집한 후, 실온에 2시간 또는 4 ℃ 를 놓고 밤을 보내고, 1000 × g 원심분리 20분에 제거하며, 채혈은 무열원, 무내독소 일회용 기자재를 사용해야 한다.

• 혈장: EDTA, 간소 등 항응고를 사용할 수 있으며, 샘플 채취 후 30분 이내, 2-8 ℃ 에서 1000 × g 원심분리 15분 동안 제거할 수 있다.

• 세포배양상청: 1000 × g 원심분리 20분, 세포 파편과 불순물을 제거한 후 제거해 검사한다.

• 조직균장: 예냉 PBS(0.01M, pH = 7.4)로 조직을 씻어 잔류 혈액을 제거하고, 조직을 자른 후 1:9(w/v)로 PBS를 더하고, 얼음 위를 충분히 연마하여 5000×g 원심분리 5~10분에 제거한다.

• 샘플 채집 후 단기간 내에 검측하면 4 ℃ 로 보존할 수 있다;장기간 보존하려면 -20 ℃ 또는 -80 ℃ 가 얼어야 하며 반복적으로 얼어붙지 않도록 해야 하며 용혈견본은 일반적으로 검사에 적합하지 않다.

4. 운영 프로세스

• 준비 작업: 냉장고에서 시약함을 꺼내 실온(약 30분)까지 균형을 맞추고 농축세척액을 희석한다.

• 샘플링: 빈 구멍, 표준 품목 구멍 및 샘플 구멍을 설정합니다.공백구멍에 견본xi석액을 첨가하고 표준품구멍에 부동한 농도표준품을 첨가하며 견본구멍에 처리된 견본을 첨가하는데 매 구멍마다 견본량을 보통 100μL로 가볍게 혼합하고 37 ℃ 로 90분 동안 온육한다.

• 세척: 구멍 안의 액체를 버리고 세척액으로 각 구멍을 가득 채워 1~2분 정도 담근 후 털어내고 5회 반복 세탁하여 미결합 물질을 깨끗이 씻는다.

• 효소 표시 항체: 구멍당 100μL의 희석된 효소표시항체작업액을 첨가하여 37 ℃ 의 온도로 60분 동안 육육한다.

• 재세탁: 위의 세탁 단계를 반복합니다.

• 발색: 구멍당 90 μL 베이스 용액을 넣고 가볍게 섞으며 37 ℃ 피광 발색 15-30 분 (실제 발색 상황에 따라 판단).

• 종지 반응: 구멍당 50μL의 종지액을 첨가하여 용액의 색깔이 파란색에서 노란색으로 변한다.

• 독수: 종료액을 넣은 후 15분 이내에 효소표시기로 450nm 파장에서 구멍별 흡광도(OD값)를 측정한다.

• 계산 결과: 표준 농도는 가로, OD값은 누진으로 표준 커브를 그립니다.표본의 OD값에 근거하여 표준곡선에서 대응농도를 찾아내고 만약 표본이 희석되였다면 상응한 희석배수를 곱하여 실제농도를 얻어야 한다.

5. 성능 지표

• 검사 범위: 흔히 15.6-1000pg/mL 등 구간으로서 여러가지 견본검사수요를 만족시킨다.

• 감도: 7.8 pg/mL 또는 그 이하로 낮을 수 있으며, 미량의 가용성 인터루킨-6 수용체를 검출할 수 있다.

• 특이성: 이 수용체에 대해서는 고도로 특이하며 다른 세포인자수용체 등과는 거의 교차반응이 없다.

• 반복성: 판내 변이계수는 일반적으로 10% 미만이고 판간 변이계수는 15% 미만으로 검사결과가 안정적이고 믿음직하도록 보장한다.