인터루킨 - 6 ELISA KIT

인터루킨 - 6 ELISA KIT

인터루킨 - 6 ELISA KIT생물 샘플의 인터루킨-6 함량을 정량적으로 측정하는 도구로 면역학, 염증 연구 등 과학 연구 분야에서 널리 응용되고 있다.다음은 당신에게 소개를 전개합니다.

1. 검측 원리: 이중 항체 협심 ELISA 기술을 사용합니다.시약함의 효소 결합판은 IL-6 특이성 항체에 미리 포장되어 있다.샘플을 넣으면 샘플의 IL-6이 고체 항체 특이성과 결합하여 항원-항체 복합체를 형성한다.그 후 효소 표기된 항IL-6 항체를 첨가하면 이미 고상항체에 결합된 IL-6와 한층 더 결합하여"고상항체-IL-6-효소 표적항체"의 협심 구조를 형성한다.세탁 절차를 거쳐 결합되지 않은 물질을 제거하고 TMB와 같은 베이스 용액을 첨가합니다.효소의 촉매하에 바탕물에 현색반응이 발생하는데 색갈의 깊이는 견본중의 IL-6의 함량과 정비례한다.효소 측정기를 통해 특정 파장(일반적으로 450nm)에서 흡광도를 측정해 표준 곡선과 비교하면 샘플의 IL-6 농도를 계산할 수 있다.

2. 시약함 구성

• 효소 결합판: 96구멍 또는 48구멍 규격이 있으며 사전 패키지는 IL-6 항체에 저항하며 반응하는 캐리어입니다.

• 표준품: 일반적으로 동결건조품으로 보통 2병이 있습니다.사용하기 전에 표준품 희석액을 재용해하고 서로 다른 농도 경도로 희석해야 한다. 예를 들면 0, 15.6, 31.2, 62.5, 125, 250, 500, 1000pg/mL 등은 표준곡선을 그리는 데 사용된다.

• 샘플 xi 석액: 농도가 너무 높은 측정 대기 샘플을 희석하여 샘플 농도가 시약함의 측정 범위 내에 있는지 확인하는 데 사용됩니다.

• 효소계 항체: 즉 HRP가 표기한 항IL-6항체는 농축액으로서 효소표시항체희석액을 사용하여 요구에 따라 희석해야 한다.

• 효소표 항체 희석액: 효소 표적 항체를 희석하는 데 전문적으로 쓰인다.

• 바탕물 용해액: 예를 들어 TMB 바탕은 효소 표지 항체의 HRP와 반응하여 색깔 변화를 일으킨다.

• 세척액: 대부분 농축액으로서 사용시 비례에 따라 증류수 또는 이온제거수로 희석하여 효소연합판을 세척하고 결합되지 않은 물질을 제거하여 배경교란을 낮추는데 사용해야 한다.

• 종지액: 일반적으로 강산용액 (예: 황산) 으로 바탕물의 발색반응을 중지하고 반응액의 색채를 안정시켜 읽기 편리하게 한다.

• 봉판막: 온육과정에서 효소연합판을 덮어 액체의 증발과 외부오염을 방지한다.

• 사용 설명서: 시약함 사용법, 주의사항, 성능지표 등을 상세히 소개한다.

3. 샘플 요구 사항

• 혈청: 혈액을 채집한 후, 실온에 2시간 또는 4 ℃ 로 밤을 보내고, 1000 × g 원심분리 20분, 채취하여 준비한다.채혈은 열원이 없고 내독소가 없는 일회용 기재를 사용해야 한다.

• 혈장: 에틸렌테트라에틸렌산(EDTA), 헤모글로빈 등의 항응고제를 사용할 수 있다.샘플 채취 후 30분 이내에 2-8 ℃ 에서 1000 × g 원심분리 15분, 제거.

• 세포배양상청: 세포를 배양하여 1000×g의 원심분리를 20분간 하고 세포파편과 불순물을 제거한후 청을 취하여 검사에 사용한다.

• 조직균장: 미리 차가운 인산염 완충액(PBS, 0.01M, pH = 7.4)으로 조직을 씻어 잔류 혈액을 제거한다.조직을 잘게 자른 후 1:9(w/v)로 PBS를 넣어 얼음 위에서 충분히 다듬는다.5000 × g 원심분리 5-10분을 더 거쳐 제거해 검사에 사용한다.

• 샘플 채집 후 단기간 내에 검측하면 4 ℃ 에 보존할 수 있다;만약 장시간 보존해야 한다면, -20 ℃ 또는 -80 ℃ 에 보관하고, 반복적으로 얼지 않도록 해야 하며, 용혈 샘플은 일반적으로 검사하기에 적합하지 않다.

4. 운영 프로세스

• 준비 작업: 냉장고에서 시약함을 꺼내 30분 전에 실온으로 균형을 잡는다.이와 함께 농축세척액을 요구비율에 따라 증류수나 이온제거수로 희석해 준비한다.

• 샘플링: 빈 구멍, 표준 품목 구멍 및 샘플 구멍을 설정합니다.공백공에는 견본xi석액을 첨가하고 표준품공에는 부동한 농도의 표준품을 첨가하며 견본공에는 처리된 견본을 첨가하는데 매 구멍의 가견량은 보통 100μL로서 가볍게 혼합하고 37 ℃ 로 90분 동안 온육한다.

• 세탁: 온육이 끝나면 구멍 안의 액체를 버리고 세척액으로 각 구멍을 가득 채워 1~2분 정도 담근 후 털어내고 5회 반복 세탁하여 che 바닥이 미결합 물질을 씻어내도록 한다.

• 효소 표시 항체: 구멍당 100μL의 희석된 효소표시항체작업액을 첨가하여 37 ℃ 로 60분간 온육한다.

• 재세탁: 위의 세탁 단계를 반복합니다.

• 발색: 구멍당 90 μL 베이스 용액을 넣고 가볍게 섞으며 37 ℃ 피광 발색 15-30 분 (실제 발색 상황에 따라 판단 필요).

• 종지 반응: 구멍당 50 μL의 종료액을 넣으면 용액 색상이 파란색에서 노란색으로 바뀝니다.

• 독수: 종료액을 넣은 후 15분 이내에 효소표시기로 450nm 파장에서 구멍별 흡광도(OD값)를 측정한다.

• 계산 결과: 표준 농도는 가로, OD값은 누진으로 표준 곡선을 그립니다.샘플의 OD값에 따라 표준 곡선에서 해당 농도를 찾아내고, 샘플이 희석되면 해당 희석 배수를 곱해 실제 농도를 얻어야 한다.

5. 성능 지표

• 검사 범위: 시약함에 따라 차이가 있으며, 흔히 볼 수 있는 검사 범위는 15.6~1000pg/mL 등 구간으로 다양한 샘플의 IL-6 함량의 검사 수요를 만족시킬 수 있다.

• 감도: 일반적으로 7.8 pg/mL 또는 그 이하로 낮을 수 있으며 샘플에서 미량의 IL-6을 감지할 수 있습니다.

• 특이성: IL-6에 대한 고도의 특이성을 가지고 있으며, 다른 세포인자와 같은 물질과는 거의 교차 반응이 없다.

• 반복성: 판내 변이 계수는 일반적으로 10% 미만, 판간 변이 계수는 15% 미만으로 검사 결과의 안정성과 신뢰성을 보장합니다.