인터루킨5 수용체(가용성) ELISA KIT

인터루킨5 수용체(가용성) ELISA KIT

인터루킨5 수용체(가용성) ELISA KIT생물 샘플의 가용성 인터루킨5 수용체 함량을 정량적으로 측정하는 데 사용되는 도구로 과학 연구 분야에서 중요한 역할을 발휘하고 있으며 면역 조절, 염증 반응 등 생리 병리 과정을 깊이 이해하는 데 도움이 된다.다음은 다방면으로 소개해 드리겠습니다.

1. 검측 원리: 이중항체협심효소연면역흡착측정(ELISA) 기술을 활용한다.시약함의 효소 결합판은 가용성 인터루킨5 수용체에 대한 특이성 항체로 미리 포장되어 있다.샘플을 넣으면 샘플의 가용성 인터루킨5 수체와 고상항체 특이성이 결합된다.이어 효소 표기된 항가용성 인터루킨5 수용체 항체를 넣어 이미 고상항체에 결합한 수용체와'고상항체-가용성 인터루킨5 수용체-효소표시 항체'복합물을 형성한다.충분히 세탁하여 결합되지 않은 물질을 제거한 다음 바탕물 용액 (예: 3, 3', 5, 5'- 테트라메틸렌구아니딘, 즉 TMB) 을 첨가한다.효소표항체에서 효소의 촉매하에 바탕물에 현색반응이 발생하는데 색갈의 깊이는 견본중의 가용성백색소 5수체의 함량과 정비례한다.효소 측정기를 통해 특정 파장(일반적으로 450nm)에서 흡광도를 측정해 표준 곡선과 비교하면 샘플에서 해당 수용체의 농도를 계산할 수 있다.

2. 시약함 구성

• 효소 결합판: 96공 또는 48공의 규격이 있으며 이미 항가용성 인터루킨5 수용체 항체를 미리 포장하여 반응하는 담체이다.

• 표준품: 보통 동결건조품으로 보통 2병을 갖추고 있습니다.림용하기전에 표준품희석액을 사용하여 재용해하고 부동한 농도경도로 희석해야 한다. 례를 들면 0, 15.6, 31.2, 62.5, 125, 250, 500, 1000pg/mL 등은 표준곡선을 그리는데 사용된다.

• 샘플 xi 석액: 농도가 너무 높은 측정 대기 샘플을 희석하여 샘플 농도가 시약함의 유효한 검사 범위 내에 있는지 확인하는 데 사용됩니다.

• 효소계 항체: 즉 HRP (매운 뿌리 과산화물 효소) 표기된 항가용성 인터루킨5 수용체 항체는 농축액이며, 사용 시 요구에 따라 효소 표시 항체 희석액으로 희석해야 한다.

• 효소표 항체 희석액: 효소 표적 항체를 희석하는 데 전문적으로 쓰인다.

• 바탕물 용해액: TMB 바탕과 같이 효소 표적 항체의 HRP와 반응하여 색상 변화를 일으킬 수 있습니다.

• 세척액: 일반적으로 농축액으로서 사용시 일정한 비례에 따라 증류수 또는 이온제거수로 희석하여 효소연합판을 세척하고 결합되지 않은 물질을 제거하여 배경교란을 낮추는데 사용한다.

• 종지액: 대부분 강산용액 (예: 황산) 으로 바탕물의 발색반응을 중지하고 반응액의 색깔을 안정시켜 읽기 편리하게 한다.

• 봉판막: 온육과정에서 효소연합판을 덮어 액체의 증발과 외부오염을 방지한다.

• 사용 설명서: 시약함 사용법, 주의사항, 성능지표 등을 상세히 소개한다.

3. 샘플 요구 사항

• 혈청: 혈액을 채집한 후, 실온에 2시간 또는 4 ℃ 를 두고 밤을 보낸 후, 1000 × g으로 20분간 원심을 분리하여 맑은 것을 취하여 준비한다.채혈은 열원이 없고 내독소가 없는 일회용 기재를 사용해야 한다.

• 혈장: 항응고제로 아세트아미드테트라에틸렌산(EDTA), 헤파린 등을 사용할 수 있다.샘플을 채취한 후 30분 이내에 2-8 ℃ 에서 1000 × g으로 15분간 원심분리하여 제거한다.

• 세포배양상청: 세포배양상청을 1000×g으로 20분간 원심분리하여 세포파편과 불순물을 제거한후 상청을 취하여 검사에 사용한다.

• 조직균장: 미리 차가운 인산염 완충액(PBS, 0.01M, pH = 7.4)으로 조직을 씻어 잔류 혈액을 제거한다.조직을 잘게 자른 후 약 1:9(w/v)의 비율로 PBS를 넣어 얼음 위에서 충분히 연마한다.5000 × g 원심분리 5-10분을 더 거쳐 제거해 검사에 사용한다.

• 샘플 채집 후 단기간 내에 검측하면 4 ℃ 에 보존할 수 있다;만약 장시간 보존해야 한다면, -20 ℃ 또는 -80 ℃ 에 보관하고, 반복적으로 얼지 않도록 해야 하며, 용혈 샘플은 일반적으로 검사하기에 적합하지 않다.

4. 운영 프로세스

• 준비 작업: 냉장고에서 시약함을 꺼내 30분 전에 실온으로 균형을 잡는다.이와 함께 농축세척액을 요구비율에 따라 증류수나 이온제거수로 희석해 준비한다.

• 샘플링: 빈 구멍, 표준 품목 구멍 및 샘플 구멍을 설정합니다.공백공에는 견본xi석액을 첨가하고 표준품공에는 부동한 농도의 표준품을 첨가하며 견본공에는 처리된 견본을 첨가하는데 매 구멍의 가견량은 보통 100μL로서 가볍게 혼합하고 37 ℃ 로 90분 동안 온육한다.

• 세척: 온육이 끝나면 구멍 안의 액체를 버리고 세척액으로 각 구멍을 가득 채워 1~2분 정도 담근 후 털어내고 5회 반복 세탁하여 che 바닥이 미결합 물질을 씻어내도록 한다.

• 효소 표시 항체: 구멍당 100μL의 희석된 효소표시항체작업액을 첨가하여 37 ℃ 로 60분간 온육한다.

• 재세탁: 위의 세탁 단계를 반복합니다.

• 발색: 구멍당 90 μL 베이스 용액을 넣고 가볍게 섞으며 37 ℃ 피광 발색 15-30 분 (실제 발색 상황에 따라 판단 필요).

• 종지 반응: 구멍당 50 μL의 종료액을 넣으면 용액 색상이 파란색에서 노란색으로 바뀝니다.

• 독수: 종료액을 넣은 후 15분 이내에 효소표시기로 450nm 파장에서 구멍별 흡광도(OD값)를 측정한다.

• 계산 결과: 표준 농도는 가로, OD값은 누진으로 표준 곡선을 그립니다.샘플의 OD값에 따라 표준 곡선에서 해당 농도를 찾아내고, 샘플이 희석되면 해당 희석 배수를 곱해 실제 농도를 얻어야 한다.