U-Ch1인 천골척추종양세포/STR 감정

U-Ch1인 천골척추종양세포/STR 감정

세포 소개

U-CH1은 1998년에 56세의 백인 남성 척추종 환자의 천골에서 분리된 간충질 샘플 세포계이다.이 세포계는 첫 수술 4년 후 방사선 치료 후 천추부 국소 재발에 따라 만들어졌다.척추종은 희귀하게 성장이 느린 종양 유형으로, U-CH1은 상대적으로 성장이 느린 세포계다.U-CH1은 장세포와 점액성 세포 간질로 이루어진 이질적인 형태를 가지고 있으며 전형적인 척추종 특징을 대표한다.이 세포들은 척추종양의 가장 특이한 표지물인 전사인자 T (Brachyury) 를 과도하게 발현시킨다.

세포 특성

1) 출처: 56세 백인 남성 척추종 환자의 천골

2) 형태: 간충질양, 가변 액포(긴 북형 불규칙한 형태) 접벽생장

3) 함량:>1x106 세포수

4) 규격: T25병 또는 1mL 냉동보관관 포장

5) 용도: 과학 연구에만 사용.

운송 및 보존

드라이아이스 운송 및 소생 좋은 생존 세포

(1) 1mL 냉동보관관 포장 드라이아이스 운송, 수령 후 -80도 냉장고 보존 후 밤 경과 후 액체 질소로 전입 또는 직접 소생, 만약 드라이아이스가 이미 깨끗하게 휘발되었고, 냉동보관관 병뚜껑이 탈락, 파손 및 세포에 오염이 있는 것을 발견하면 즉시 우리에게 연락하십시오.

(2) T25병이 소생된 생존세포는 상온으로 발송되며 접수한후 세포접수후의 처리방법에 따라 조작한다.

세포 접수 후 처리

1) 세포를 받은 후, 75% 의 알코올 소독병 벽은 T25병을 37 ℃ 배양함에 약 2-3h 배치하고, 배양병이 파손되고, 액체가 넘치고, 세포가 오염된 것을 발견하면, 사진을 찍은 후 즉시 우리에게 연락하십시오.

2) 4 또는 5X 현미경으로 세포 상태를 확인하고, 동시에 방금 받은 세포에 사진 (10 ×, 20 ×) 각 2-3장 및 배양병 외관 사진 1장을 남겨 판매 후 받았을 때 세포 상태의 근거로 삼으십시오.

3) 밀착 세포: 세포는 37 ℃ 배양함에 2-3h를 배치하고 현미경으로 세포의 성장과 밀착 상황을 관찰한다. 일부 밀착 세포는 택배 운송 과정에서 진동으로 탈락하고 탈락한 후 뭉치는 경우가 있다.거울로 세포의 생장밀도가 60% 이하인 것을 관찰하면 배양병의 관액배양기 (벽에 붙지 않은 세포가 원심회수가 필요하다면 원배양병에 다시 걸어넣는다) 를 제거하고 새로 배합한 완quan배양기 6-8mL를 첨가하여 세포배양함에 넣어 계속 배양할 수 있다.세포의 성장밀도가 70~80% 이상이면 세포를 대물림할 수 있다.전대 과정에서 운송 진동으로 탈락한 세포는 원심 회수가 필요하다.

4) 비고: 운송용 배양기(관액배양기)는 더 이상 세포배양에 사용할 수 없습니다. 설명서 세포배양조건에 따라 새로 배합한 완quan배양기로 바꾸어 세포배양하십시오.세포를 받은 후 한 번 대물림하면 T25 배양병 1: 2 대물림을 권장한다.

U-Ch1인 천골척추종양세포/STR 감정

1. 배양기 및 배양 냉동 보존 조건 준비

1) IMDM(iCell-0008 권장)에 RPMI-1640(iCell-0002 권장)(4:1) 배지 준비;양질의 태우 혈청, 10%;1% L-글루타민;이중 저항, 1%.

참고:

1. 쥐꼬리 I형 콜라겐(BD Biosciences, 목록번호 354236)을 사용하여 50μg/ml로 희석한다.소병에 2-3ml 패킷 피완충액을 넣고 실온에서 1시간 동안 부화하거나 세포패킷 피작업액(iCell-8280 권장)을 사용한다.남은 용액을 빨아들이지 않도록 조심해라.1x DPBS를 사용하여 버너를 2회 헹구어 산을 제거합니다.코팅 플라스크는 즉시 사용하거나 무균 조건에서 2-8 ℃ 에서 일주일 동안 보관할 수 있습니다.

2. 이 세포는 성장이 느리다.배증 기간은 1주일 남짓이며, 발송은 3~4주 정도 될 것으로 예상된다.

2) 배양조건: 기상: 공기, 95%;이산화탄소, 5%온도: 섭씨 37도, 배양함 습도는 70~80% 입니다.

3) 동존액: 90% 혈청, 10% DMSO, 현용 현배.

2. 세포 처리:

1) 동존세포의 소생:

세포현액 1mL를 함유한 동존관을 37℃ 수욕에서 빠르게 흔들어 해동하고, 완quan 배양기 4~6mL를 함유한 원심관에 넣어 골고루 섞는다.1000RPM 조건에서 원심 3-5min, 상청액을 버리고 quan 배양기 중현세포를 완성한다.그런 다음 세포현액을 6-8ml의 완quan배지를 함유한 배양병(또는 그릇)에 넣어 37℃로 밤을 지새운다.다음 날 현미경으로 세포의 생장 상태와 세포 밀도를 관찰한다.

2) 세포 대물림: 세포 밀도가 80~90% 에 달하면 대물림 배양을 할 수 있다.

밀착 세포 전대 에는 다음과 같은 방법 을 참고할 수 있다

1. 상청 배양을 버리고 칼슘, 마그네슘 이온이 함유되지 않은 PBS로 세포를 1~2회 윤색한다.

2.0.25%(w/v) 인슐린 mei-0.53 mM EDTA를 배양병(T25병 1-2mL, T75병 2-3mL)에 넣고 37℃ 배양상자에 넣어 세포층이 분산될 때까지(보통 5~15분 이내) 배양기가 정상 pH(7.0~7.6)에 도달하도록 소화시킨 후 현미경으로 세포의 소화 상태를 관찰하여 결괴를 피하기 위해 세포를 휘젓거나 병에서 분리할 때까지 기다리지 마십시오.분리하기 어려운 세포는 분산을 위해 37 ° C에 놓을 수 있습니다.세포가 대부분 동그랗게 변하고 떨어지면 신속하게 조작대로 가져가 배양병을 몇 번 두드린 뒤 FBS 10% 를 함유한 배양기 3-4ml를 넣어 소화를 멈춘다.

3.가볍게 두드린 후 흡출, 1000RPM 조건에서 원심 3-5min, 맑은 액체를 버리고 1-2mL 배양액을 보충한 후 불어준다.세포현액을 1:2의 비율로 새 T25병에 나누어 6-8ml를 첨가하여 설명서의 요구에 따라 배치한 새로운 wan 전배지를 첨가하여 세포의 생장활력을 유지하고 후속전대는 실제상황에 따라 1:2~1:5의 비율로 진행한다.

3) 세포동존: 세포를 접수한후 배양전 3세대에 일련의 세포종자를 동존시켜 후속실험에 사용할것을 건의한다.

다음 T25병을 예로 들자;

1.세포가 동존할 때 세포가 대물림되는 과정에 따라 소화된 세포를 원심관에 수집하면 혈구계수판계수를 사용하여 세포의 동존밀도를 결정할수 있다.일반세포의 권장동존밀도는 1×10^6~1×107개 활세포/ml이다.

2.1000rpm 원심분리 3-5min, 상청 제거.조제된 세포동존액 중현세포로 1ml당 1×10 ^ 6~1×107개의 활세포/ml를 한 동존관에 분배하여 세포를 동존관에 분배하고 명칭, 대수, 날짜 등 정보를 표시한다.

3. 냉동 보관할 세포를 프로그램 냉각 상자에 넣고 -80도 냉장고에서 밤을 보낸 후 액체 질소 용기에 넣어 저장한다.동시에 액체 질소 용기에 냉동 보관관의 위치를 잘 기록하여 후속적으로 열람하고 사용할 수 있도록 한다.