AU565명 유방암세포/STR 감정

AU565명 유방암세포/STR 감정

세포 소개

AU565 세포계는 캘리포니아주 오클랜드 hai군 생물과학실험실의 유방암 환자 흉강 축액에서 유래했다.이 세포계는 SK-BR-3(ATCC HTB-30)와 같은 환자에게서 만들어졌다.이 환자는 백인 여성으로 43세, A+형으로 방사선, 스테로이드, 환린아미드, 5-플루오린미딘 치료를 받았다.AU565 세포계는 HER-2/neu 암 유전자를 증폭 및 발현했습니다.그것은 HER-3, HER-4 및 p53 암 유전자를 나타냅니다.페놀산(MPA), 프로포폴 12-육두구산 에스테르 13-아세트산 에스테르(PMA), 시후앙산(RA) 또는 HER-2/neu 단백포 외 구조역에 대한 TA-1 단클론 항체 처리 세포로 세포 분화를 유도할 수 있다.AU565 세포를 Neu분화인자(NDF)로 처리하는 것도 세포의 형태 외관이 특징인 성숙 표형을 유도한다.처리되지 않은 AU565 세포는 치밀한 세포핵과 얇은 세포질을 가지고 있지만, 처리된 세포는 상당한 세포질로 둘러싸인 편평한 대세포핵과 같은 분화표형과 관련된 형태를 보인다.

세포 특성

1) 출처: 백인 여성, 43세 흉강 축액

2) 형태: 상피 견본이 벽에 붙어 생장

3) 함량:>1x106 세포수

4) 규격: T25병 또는 1mL 냉동보관관 포장

5) 용도: 과학 연구에만 사용.

운송 및 보존

드라이아이스 운송 및 소생 좋은 생존 세포

(1) 1mL 냉동보관관 포장 드라이아이스 운송, 수령 후 -80도 냉장고 보존 후 밤 경과 후 액체 질소로 전입 또는 직접 소생, 만약 드라이아이스가 이미 깨끗하게 휘발되었고, 냉동보관관 병뚜껑이 탈락, 파손 및 세포에 오염이 있는 것을 발견하면 즉시 우리에게 연락하십시오.

(2) T25병이 소생된 생존세포는 상온으로 발송되며 접수한후 세포접수후의 처리방법에 따라 조작한다.

세포 접수 후 처리

1) 세포를 받은 후, 75% 의 알코올 소독병 벽은 T25병을 37 ℃ 배양함에 약 2-3h 배치하고, 배양병이 파손되고, 액체가 넘치고, 세포가 오염된 것을 발견하면, 사진을 찍은 후 즉시 우리에게 연락하십시오.

2) 4 또는 5X 현미경으로 세포 상태를 확인하고, 동시에 방금 받은 세포에 사진 (10 ×, 20 ×) 각 2-3장 및 배양병 외관 사진 1장을 남겨 판매 후 받았을 때 세포 상태의 근거로 삼으십시오.

3) 밀착 세포: 세포는 37 ℃ 배양함에 2-3h를 배치하고 현미경으로 세포의 성장과 밀착 상황을 관찰한다. 일부 밀착 세포는 택배 운송 과정에서 진동으로 탈락하고 탈락한 후 뭉치는 경우가 있다.거울로 세포의 생장밀도가 60% 이하인 것을 관찰하면 배양병의 관액배양기 (벽에 붙지 않은 세포가 원심회수가 필요하다면 원배양병에 다시 걸어넣는다) 를 제거하고 새로 배합한 완quan배양기 6-8mL를 첨가하여 세포배양함에 넣어 계속 배양할 수 있다.세포의 성장밀도가 70~80% 이상이면 세포를 대물림할 수 있다.전대 과정에서 운송 진동으로 탈락한 세포는 원심 회수가 필요하다.

4) 비고: 운송용 배양기(관액배양기)는 더 이상 세포배양에 사용할 수 없습니다. 설명서 세포배양조건에 따라 새로 배합한 완quan배양기로 바꾸어 세포배양하십시오.세포를 받은 후 한 번 대물림하면 T25 배양병 1: 2 대물림을 권장한다.

AU565명 유방암세포/STR 감정

1. 배양기 및 배양 냉동 보존 조건 준비

1) RPMI-1640(추천 iCell-0002) 배양기 준비;양질의 태우 혈청, 10%;이중 저항, 1%.

2) 배양조건: 기상: 공기, 95%;이산화탄소, 5%온도: 섭씨 37도, 배양함 습도는 70~80% 입니다.

3) 동존액: 90% 혈청, 10% DMSO, 현용 현배.

2. 세포 처리:

1) 동존세포의 소생:

세포현액 1mL를 함유한 동존관을 37℃ 수욕에서 빠르게 흔들어 해동하고, 완quan 배양기 4~6mL를 함유한 원심관에 넣어 골고루 섞는다.1000RPM 조건에서 원심 3-5min, 상청액을 버리고 quan 배양기 중현세포를 완성한다.그런 다음 세포현액을 6-8ml의 완quan배지를 함유한 배양병(또는 그릇)에 넣어 37℃로 밤을 지새운다.다음 날 현미경으로 세포의 생장 상태와 세포 밀도를 관찰한다.

2) 세포 대물림: 세포 밀도가 80~90% 에 달하면 대물림 배양을 할 수 있다.

밀착 세포 전대 에는 다음과 같은 방법 을 참고할 수 있다

1. 상청 배양을 버리고 칼슘, 마그네슘 이온이 함유되지 않은 PBS로 세포를 1~2회 윤색한다.

2.0.25%(w/v) 인슐린 mei-0.53 mM EDTA를 배양병(T25병 1-2mL, T75병 2-3mL)에 넣고 37℃ 배양상자에 넣어 세포층이 분산될 때까지(보통 5~15분 이내) 배양기가 정상 pH(7.0~7.6)에 도달하도록 소화시킨 후 현미경으로 세포의 소화 상태를 관찰하여 결괴를 피하기 위해 세포를 휘젓거나 병에서 분리할 때까지 기다리지 마십시오.분리하기 어려운 세포는 분산을 위해 37 ° C에 놓을 수 있습니다.세포가 대부분 동그랗게 변하고 떨어지면 신속하게 조작대로 가져가 배양병을 몇 번 두드린 뒤 FBS 10% 를 함유한 배양기 3-4ml를 넣어 소화를 멈춘다.

3.가볍게 두드린 후 흡출, 1000RPM 조건에서 원심 3-5min, 맑은 액체를 버리고 1-2mL 배양액을 보충한 후 불어준다.세포현액을 1:2의 비율로 새 T25병에 나누어 6-8ml를 첨가하여 설명서의 요구에 따라 배치한 새로운 wan 전배지를 첨가하여 세포의 생장활력을 유지하고 후속전대는 실제상황에 따라 1:2~1:5의 비율로 진행한다.

3) 세포동존: 세포를 접수한후 배양전 3세대에 일련의 세포종자를 동존시켜 후속실험에 사용할것을 건의한다.

다음 T25병을 예로 들자;

1.세포가 동존할 때 세포가 대물림되는 과정에 따라 소화된 세포를 원심관에 수집하면 혈구계수판계수를 사용하여 세포의 동존밀도를 결정할수 있다.일반세포의 권장동존밀도는 1×10^6~1×107개 활세포/ml이다.

2.1000rpm 원심분리 3-5min, 상청 제거.조제된 세포동존액 중현세포로 1ml당 1×10 ^ 6~1×107개의 활세포/ml를 한 동존관에 분배하여 세포를 동존관에 분배하고 명칭, 대수, 날짜 등 정보를 표시한다.

3. 냉동 보관할 세포를 프로그램 냉각 상자에 넣고 -80도 냉장고에서 밤을 보낸 후 액체 질소 용기에 넣어 저장한다.동시에 액체 질소 용기에 냉동 보관관의 위치를 잘 기록하여 후속적으로 열람하고 사용할 수 있도록 한다.