인위암류 장기배지 세트 Plus

인간 위장 암 오르가노이드 키트 플러스

인위암류 장기배양기 세트플러스

1、 제품 설명

모기 생물인 위암류 기관 배양기 세트플러스（인간 위장 암 오르가노이드 키트 플러스)는 사람의 위암류 기관을 만들고 유지하는 데 사용되는 화학적 정의의 세포 배양기이다.환자 출처의 종양류 기관은 원시 종양의 게놈과 병리적 특징을 요약하기 때문에 의학 연구와 정밀 의학에서 큰 전망을 가지고 있다.

2、 제품 정보

3、 기타 자체 재료 및 시약

4、 인위암류 기관 배양기 사용 설명

1、 유기관 배지 를 받은 후, 배지 를4℃냉장고를 해동하다.

2、 배양기 해동 후 상하가 전도되어 충분히 혼합되어 생물 안전 캐비닛이나 청정 작업대에서 일상 수요량에 따라 분장하고, 분장하는 것을 추천한다10ml/의관.

3、 분장 후의 배양기는 밀봉하여 저장하시기 바랍니다-20℃, 사용 시 분장된 배양기를 꺼내 실온 균형을 맞춘 후 사용할 수 있다.

5、 암 환자 유래 의 위암류 기관 의 건립 과 전대 배양

참고: 주요 인체 조직 재료와 관련된 연구는 모든 관련 기관 및 정부 규정을 준수해야합니다.주요 인체 조직 재료를 수집하기 전에 모든 피실험자의 알 수 있는 동의를 얻어야 한다.

a) 원대인 위암류 기관의 건립

1、 대체 조직 샘플은 이체에 있어야 한다5분미리 차가워진 살아있는 조직 보존액을 넣는다 (2-8℃샘플 튜브에서 샘플은 활성 조직 보존액으로 덮여 있어야 합니다 (샘플이 이미 다른 완충액 또는 배지 내에 있는 경우 전체 용액을 미리 차가운 활성 조직 보존액으로 대체하십시오).저온(2~8℃) 운송을 실험실로 옮깁니다.

2、 실험 전에 먼저 기질 접착제를 놓다4℃얼음에서 해동하는 동시에 배양기를 꺼내 실온의 균형을 잡는다.세포와 접촉하는 원심관, 시험관 또는 플라스틱 흡입은 유기관으로 배양하여 접착 방지 윤세액을 윤세한 후 사용해야 한다.

3、 청정작업대에서는 샘플을 배양접시에 옮겨 얻은 조직이 상피로 구성되었는지 평가한다.지방이나 근육 조직이 있다면 해부 현미경에서 칼이나 핀셋을 사용하여 가능한 한 많은 비상피 성분을 제거하십시오.지방이나 근육 조직이 없다면 즉시 다음 단계로 넘어가십시오.

4、 상피류 기관 기초배지 또는 이중항성을 함유한DPBS는조직을 두 번 씻다.

5、 핀셋을 사용하여 조직을 다음으로 이동1.5mL원심관 에서 얼음 위 에서 무균 으로 으스러뜨리다0.5~2mm²크기

6、 잘게 자른 조직용50배 조직 부피의 종양이 중태되어15ml원심관 안에서 중현 조직 블록을 불어 치다.에37℃，100rpm조건하의 항온 흔들침대에서 수평 진동 소화15-30분마다10분 동안 조직 소화 상황을 관찰하고, 조직 블록이 뚜렷하게 분산되고, 현액이 비교적 혼탁할 때, 적당량의 조직 소화 현액 검사를 취하고, 현액 중에 비교적 많은 종양 세포 덩어리가 있으면 소화를 종료할 수 있으며, 만약 조직 조각이 비교적 크거나 소화가 적당히 소화 시간을 연장할 수 없다.소화 중 다양한 사양 사용 가능 (큰 순서에서 작은 순서로10ml、5mL의、1ml)의 이액관은 조직을 불어 현액을 소화하여 충분한 소화를 돕는다.대부분의 조직 단편이 통과할 수 있을 때1ml이액기가 머리를 빨아들일 때 소화 과정이 완성된다.

7、 ~을FBS는조직 소화 혼합물 중 최종 농도는2%및 사용100μm세포 여과기.

8、 여과액을 모아서4℃다음250g원심3분.보이는 붉은색이 침전된 상태에서 맑은 액체를 마시고2ml적혈구 분해액 중현침전, 실온에서 적혈구 분해1분 및4℃다음250g원심3분.

9、 상청액을 흡입하고 침전중을 상피류기관 기초배지에 매달아4℃다음250g원심3분, 이 단계를 다시 반복하여 소화액과FBS는, 원심분리 전에 적당량의 현액을 취하여 세포활성검사를 진행한다.

10、 상청액을 흡입하고 배양수요에 따라 적당량의 세포침전을 취하여 기질접착제(>70%) 그리고 얼음 위에 섞는다. (주의: 섞고 부는 동작은 가볍고 부드러워야 한다. 대량의 기포가 생기는 것을 절대 피해야 한다. 상온이 섞이면15초간) 얼음 위에 골고루 섞는다.참고: 젤라틴은 굳지 않도록 얼음에 보관해야 합니다.가능한 한 빨리 이 과정을 진행하다.대략10,000개 세포는 접종해야 한다25μL기질 접착제 중.기질접착제를 지나치게 희석하지 말아야 한다 (기질접착제는 비례해야 한다>70%(기질 접착제 볼륨/전체 부피)) 고체 액체의 정확한 형성을 억제할 수 있기 때문이다.

11、 기질접착제와 세포의 혼합현액을 배양공판의 밑부분 정자에 점입하고 총머리를 사용하여 현액을 약간 평평하게 펴고 현액이 공판의 옆벽에 접촉하지 않도록 주의해야 한다.(권장:96공판접종3~10μL/구멍,48공판접종10~20μL/구멍,24공판접종20~30μL/구멍).

12、 주의: 일단 류기관이 기질접착제에 다시 걸려있으면 될수록 빨리 종판을 진행해야 한다. 왜냐하면 기질접착제는 시험관이나 이액기 흡두에서 응고될수 있기때문이다.

13、 배양판을 넣다37℃와5%CO₂의 배양함 속15-25분, 기질 접착제를 굳히세요.

14、 기질접착제가 응고된후 벽을 따라 실온균형의 류기관배지를 천천히 첨가하여 이미 응고된 구조를 파괴하지 않도록 해야 한다.(권장:96슬롯 추가100μL/구멍,48슬롯 추가250μL/구멍,24슬롯 추가500μL/구멍).주: 배양기를 기질 접착제 액적의 상단에 직접 첨가하지 마라. 왜냐하면 이것은 이미 응고된 구조를 파괴할 수 있기 때문이다.

15、 배양판을 배치합니다.37℃와5%CO₂의 항온 배양 상자에 있습니다.

16、 간격2~3하루에 한 번 배지를 교체하고 구멍에서 배지를 조심스럽게 빨아들이며 신선한 실온 균형의 유기관 배지를 넣는다.

17、 장기의 생장 상태를 면밀히 모니터링하고, 이상적인 상황에서 위암류 기관은7-14천내에 건설하다.

b) 인위암류 기관의 대물림 배양

1、 대기 기관 배양 지름100~500μm큰 시간 (또는 검게 변하여 더 이상 커지지 않을 때) 에 유기관의 대물림 (세대당 약1~2주).다음 조작으로 세포와 접촉한 소모품은 모두 윤세액으로 윤세한 후 사용해야 한다.

2、 낡은 배양기를 흡입하고 등체적상피류기관 기초배양기를 첨가하여 세포스크레이퍼나 이액관 흡입으로 기질접착제와 류기관 혼합물을 가볍게 긁어1.5mL원심관 중(각 관 최대 수집2~3구멍 기관, 부피가 너무 크고 소화 효율이 낮은 것을 피한다), 취타5~10다음, 유기관과 기질접착제를 분리하고,300g원심3분.

3、 상청액을 제거하고5기질 접착제와 유기관 혼합물의 부피보다 배가되는 유기관 소화액은 불어서 고루 섞은 후 둔다37℃배양함에서 소화5~10분.꺼내고 불고 섞어서10μL혼합액경은 작은 세포 덩어리로 소화되는지 검사하며, 소화가 충분하지 않으면 소화 시간을 적당히 연장할 수 있다.세포 계수를 요구하면 단일 세포로 소화해야 하며, 소화 시간을10~20분 후 소화 종료 후 백그라운드 블루 염색 세포 계수 진행.소화 과정을 면밀히 감시하면 유기관 해리액 중 부화 시간이 가장 짧다.

4、 소화 완료 후, 추가5배 체적 상피류 기관 기초 배양기 를 불어 섞어 소화 반응 을 끝낸 다음250g원심3분.

5、 상청액 을 흡입 하고 상피류 기관 기초 배지 로 세척 하다2다음에 남아 있는 소화액을 제거하다.차세척은 유기관을 병합하여 같은 원심관에 수집할수 있다.

6、 세척이 완료되면 원심침전 중인 세포를 전대배양하고 세포침전에 기질접착제(>70%) 그리고 얼음에 고루 섞는다. (주의, 고루 섞고 부는 동작은 가볍고 부드러워야 한다. 대량의 기포가 생기는 것을 절대 피해야 한다. 상온이 고르게 섞이면15초간) 얼음 위에 골고루 섞는다.

참고: 기본 젤라틴 희석 비율은70%이상은 배양 과정 중 기질 접착제의 구조 안정성을 보장합니다.

7、 기질접착제와 세포의 혼합현액을 배양공판의 밑부분 정자에 점입하고 총머리를 사용하여 현액을 약간 평평하게 펴고 현액이 공판의 옆벽에 접촉하지 않도록 주의해야 한다.(권장:96공판접종3~10μL/구멍,48공판접종10~20μL/구멍,24공판접종20~30μL/구멍).참고: 이 단계는 기질 접착제의 실온 응고를 방지하기 위해 가능한 한 빨리 완료되어야 합니다.

8、 배양판을 넣다37℃와5%CO₂의 배양함 속15-25분, 기질 접착제를 굳히세요.

9、 기질접착제가 응고된후 벽을 따라 실온균형의 류기관배지를 천천히 첨가하여 이미 응고된 구조를 파괴하지 않도록 해야 한다.(권장:96슬롯 추가100μL/구멍,48슬롯 추가250μL/구멍,24슬롯 추가500μL/구멍).주: 배양기를 기질 접착제 액적의 상단에 직접 첨가하지 마십시오. 왜냐하면 이것은 이미 응고된 구조를 파괴할 수 있기 때문입니다.

10、 배양판을 배치합니다.37℃와5%CO₂의 항온 배양 상자에 있습니다.

11、 간격2~3하루에 한 번 배지를 교체하고 구멍에서 배지를 조심스럽게 빨아들이며 신선한 실온 균형의 유기관 배지를 넣는다.

12、 류기관의 생장상태를 면밀히 감시하여 류기관이 다음단계의 실험을 진행해야 할 때까지 해야 한다.

V2.0버전

업데이트 시간:2025/6/21