인결직장선 암세포 순보 내약주 HCT15/DDP

세포 이름:인결직장선 암세포 순보 내약주HCT15/DDP는　

품번:WS155(HCT15)STR鉴定）　　

사양:1 × 10 ⁶cells/T25 배양병

용도: 과학 연구용

1. 세포 소개

이 세포는HCT15 세포가 구축한 DDP 내성 약물 세포주.

2. 세포 특성

1) 출처: 직장암

2) 형태: 상피세포 샘플, 밀착생장

3) 함량:>1x106 세포수

4) 규격: T25병 또는 1mL 냉동보관관 포장

5) 용도: 과학 연구에만 사용.

3. 배양기 및 배양냉동저장조건 준비

1）자세한 내용은 설명서를 참조하십시오.

혈청. 추천합니다. FBS500-WP-002는

2) 배양조건: 기상: 공기, 95%;이산화탄소, 5%온도: 섭씨 37도, 배양함 습도는 70~80% 입니다.

3) 동존액: 90% 혈청, 10% DMSO, 현용 현배.

넷째,세포 처리

1) 동존세포의 소생

포함1mL 세포현액의 동존관은 37℃ 수욕에서 빠르게 흔들어 해동하고 4~6mL 배지를 함유한 원심관에 넣어 골고루 섞는다.1000RPM 조건에서 원심분리 3-5min, 상청액 제거, 배양기중현세포.그런 다음 세포 현액을 6-8ml 배양기가 함유 된 배양병 (또는 그릇) 에 37 ℃ 배양하여 밤을 보냅니다.다음 날 현미경으로 세포의 생장 상태와 세포 밀도를 관찰한다.

2) 세포 대물림: 세포 밀도가 80~90% 에 달하면 대물림 배양을 할 수 있다.

밀착 세포 전대 에는 다음과 같은 방법 을 참고할 수 있다

1. 상청 배양을 버리고 칼슘, 마그네슘 이온이 함유되지 않은 PBS로 세포를 1~2회 윤색한다.

2.0.25%(w/v)인슐린백색효소-0.53mM EDTA를 배양병(T25병 1-2mL, T75병 2-3mL)에 넣고 37℃ 배양함에 1~2분(소화가 어려운 세포는 소화시간을 적당히 연장할 수 있음) 소화시킨 후 현미경으로 세포의 소화상태를 관찰한 후 세포의 큰 부분이 동그랗게 변하고 떨어지면 신속하게 조작대로 가져가 배양기 10ml를 가볍게 두드린 후 배양기 10ml를 첨가한다.

3.가볍게 두드린 후 흡출, 1000RPM 조건에서 원심 3-5min, 맑은 액체를 버리고 1-2mL 배양액을 보충한 후 불어준다.세포현액을 1:2의 비율로 새 T25병에 나누어 6~8ml의 설명서에 따라 배치한 새로운 배양기를 첨가하여 세포의 생장활력을 유지하고 후속전대는 실제상황에 따라 1:2~1:5의 비율로 진행한다.

주의: 세포 전대1~2회 후에도 증식을 유지할 수 있으면 약물 농도를 0.5ug/mL로 높여 계속 배양할 수 있다.이 과정에서 세포가 증식을 멈추고 상태가 좋지 않다면 약물 농도를 낮추거나(약물 농도를 절반으로 낮추는 것) 약물이 함유되지 않은 배지 배양을 사용해 세포밀도가 약 8 × 105개/mL이고 성장 상태가 좋을 때 필요한 약물 농도로 교체해야 한다.

3) 세포동존: 세포를 접수한후 배양전 3세대에 일련의 세포종자를 동존시켜 후속실험에 사용할것을 건의한다.

아래T25병의 경우

1.세포가 동존할 때 세포가 대물림되는 과정에 따라 소화된 세포를 원심관에 수집하면 혈구계수판계수를 사용하여 세포의 동존밀도를 결정할수 있다.일반세포의 추천동존밀도는 1×106~1×107개의 활세포/ml이다.

1000rpm 원심분리 3-5min, 상청 제거.조제된 세포동존액 중현세포로 1ml당 1×106~1×107개의 활세포/ml를 함유한 동존관에 분배하여 세포를 동존관에 분배하고 명칭, 대수, 날짜 등 정보를 잘 표기한다.

주의: 세포가 동존하는 과정에서 약물을 첨가해서는 안 된다.

2. 냉동 보관할 세포를 프로그램 냉각 상자에 넣고 -80도 냉장고에서 밤을 보낸 후 액체 질소 용기에 넣어 저장한다.동시에 액체 질소 용기에 냉동 보관관의 위치를 잘 기록하여 후속적으로 열람하고 사용할 수 있도록 한다.

인결직장선 암세포 순보 내약주 HCT15/DDP