Fluo-8 AM 무세척 세포 칼슘 흐름 검사 키트

Fluo-8 AM 무세척 세포 칼슘 흐름 검사 키트그룹화 및 사양은 다음과 같습니다.Fluo-8 세포 적재 시약 사용량 96-공판은 구멍당 100μL, 384-공판은 구멍당 25μL를 권장한다.96T, 960T 및 9600T는 각각 96-구멍 1, 10 및 100 개 또는 384- 공판의 실험을 완료 할 수 있습니다.

1. 실험의 수요에 따라 세포를 96-공 또는 384-공 밑부분의 투명한 흑색세포배양판에 접종하고 세포배양기의 혈청농도는 10% 를 초과하지 않는다.실험에 따라 37 ℃ 5% CO 필요2부화 상자는 일정 시간 부화한다.
2. Fluo-8을 꺼내 완충액과 QF (10x) 시약을 적재하고 실온까지 균형을 맞추며 충분히 혼합한다.
3. Fluo-8 AM을 꺼내 실온에서 녹이고 원심에서 내용물을 수집하여 관 바닥에 놓고 얼음 위에 놓는다.Fluo-8 AM을 한 번에 다 쓰지 않으면 분장하고 -20 ℃ 는 빛을 피하여 보관하여 반복적으로 얼지 않도록 해야 한다.
4. 구멍당 첨가 및 구멍내 배양기 등 부피의 Fluo-8 세포 적재 시약에 따라 필요한 Fluo-8 세포 적재 시약 용량을 계산한다
5. Fluo-8 세포 적재 시약 조제: 10x QF 시약을 10배로 희석하여 Fluo-8 적재 완충액에 첨가한다. 예를 들어 1mL 10x QF 시약은 9mL Fluo-8 적재 완충액에 첨가하여 충분히 혼합한다.Fluo-8 AM은 400X이며, 상기 조제된 Fluo-8 적재 완충액(1x QF 포함)을 1X로 첨가하면 Fluo-8 세포 적재 시약이다.
6. CHO 세포와 같은 일부 세포는 Fluo-8 세포 적재 시약에 프로베네시드 (Probenecid, CAS: 57-66-9) 를 첨가하여 세포가 세포 안으로 들어가는 Fluo-8을 세포 밖으로 운반하는 것을 억제해야 한다.프로필유황슈는 고객 스스로 제공하며, 플루오-8 세포 적재 시약을 넣은 프로필유황슈의 최종 농도는 2.5mM을 권장한다. 세포별로 최적 농도를 최적화해야 할 수도 있다.
술폰슈 조제:1N NaOH로 500mM 원액으로 조제하고, 사용 전 1X HBSS 완충액을 250mM으로 희석한 후 Fluo-8 세포 적재 시약에 첨가하여 최종 농도 2.5mM(HBSS 완충액은 고객 스스로 제공하며, 조제는 20mM HEPES buffer pH7.4 + 1X Hank's Balanced Salt Solution, pH 7.4)이다.
7. 표준방법검측: 세포배양판의 구멍내배양기 등 체적의 Fluo-8 세포적재시약을 첨가한다. 례를 들면 96-공판의 구멍당 100μL 배양기에 100μL Fluo-8 세포적재시약을 첨가한다.
（옵션 검사 방법:FBS가 10% 함유된 배지는 판독값을 낮추고 배경을 증가시킬 수 있어 구멍 내 배지를 제거하고 Fluo-8 세포 적재 시약(단계 5 및 6 조제)과 HBSS 완충액을 1:1로 혼합해 부피원 배지의 2배에 해당하는 이 혼합액을 넣어 검사한다.또는 저농도 FBS의 배지를 사용하여 세포 배양을 하고 7단계 표준 방법으로 검사합니다.)
8, 37 ℃ 에서 1시간 동안 부화한다.구체적인 부화 온도 (예: 실온 또는 37 ℃) 와 시간 (0.5hr-2hr 이상) 은 구체적인 실험에 따라 최적화되어야합니다.
9, 세포 내 칼슘 흐름 검측: 실험 수요와 검측 설비에 따라 검측 파라미터 설정을 진행하고, 테스트 화합물을 첨가하고, 하단 판독으로 형광 강도를 검측한다.적용 가능한 감지 장치로는 FlexStation, FLIPR(Molecular Devices) 등이 있습니다.여기서 FlexStation 3은 Ex/Em = 485/525nm로 형광을 읽습니다.

1. 차수에 따라 혼용을 권장하지 않는다.
2. 비경험증, 검측 시약 용량을 변경하는 것을 권장하지 않습니다.