- 이메일
- 전화
-
주소
상해시 포동신구
개요
총단백질추출시약함에 함유된 조제법은 세포질막, 핵막과 각종 세포기막을 포함한 세포막의 성분을 효과적으로 용해할수 있다.이 시약함에 함유된 프로테아제 억제제 혼합물은 프로테아제의 단백질 분해를 막아 순도 높은 단백질 추출을 보장한다.
제품 정보
온도 저장2-8℃
총 단백질 추출 시약함주의사항
1. 프로테아제 억제제는 뚜껑을 열지 않고 사용하기 전에도 2-8 ℃ 로 저장할 수 있다.뚜껑을 열고 사용한 후 -20 ℃ 에 저장한다.
2.프로테아제 억제제는 2-8 ℃ 의 저온에서 고체 상태이며, 냉장고에서 꺼낸 후 실온으로 회복되거나 37 ℃ 의 짧은 시간 수욕으로 액체 상태가 된 후 원심에서 관 밑부분까지 다시 뚜껑을 연다.
3. 시약은 개봉 후 빨리 사용하세요!
2.프로테아제 억제제는 2-8 ℃ 의 저온에서 고체 상태이며, 냉장고에서 꺼낸 후 실온으로 회복되거나 37 ℃ 의 짧은 시간 수욕으로 액체 상태가 된 후 원심에서 관 밑부분까지 다시 뚜껑을 연다.
3. 시약은 개봉 후 빨리 사용하세요!
유효기간
일 년
검사 방법
WB, IP, 공동 IP, ELISA, EMSA等
적용 샘플
동물세포/조직
총 단백질 추출 시약함제품 특징
1. 사용이 편리하고 세포, 조직에서 단백질을 추출할 때 연마, 반복적인 동융, 초음파 파쇄 등 전처리를 거치지 않아도 된다.
2. 추출과정이 간단하고 편리하여 단백질추출시간을 30분-1시간으로 단축한다.
3. 단백질 안정제를 함유하고 추출한 단백질은 안정적이다.
4.자외선은 단백질 농도를 측정할 때 배경 간섭이 낮다.
5. 총단백질추출액은 여러가지 유효성분을 함유하고있어 포장단백질, 핵단백질과 막단백질을 충분히 방출할수 있으며 또 방출된 단백질과 결합하여 침전을 방지할수 있다.
6. 프로테아제 억제제는 단백질의 분해를 억제하고 프로테아제 억제제의 처방이 최적화된다.프로테아제 억제제 혼합물에는 6개의 독립적인 프로테아제 억제제인 AEBSF, Aprotinin, Leupeptin, Pepstatin A, Bestatin, E-64가 포함되어 있으며, 각 억제제는 특정 또는 여러 종류의 프로테아제 활성을 특이적으로 억제할 수 있다.이 혼합물은 최적화된 구성으로 단백질효소, 반단백질효소, 텐동아미노산단백질효소, 아세트아미노-아미노펩타이드 등 거의 모든 중요한 단백질효소의 활성을 억제할수 있다.
2. 추출과정이 간단하고 편리하여 단백질추출시간을 30분-1시간으로 단축한다.
3. 단백질 안정제를 함유하고 추출한 단백질은 안정적이다.
4.자외선은 단백질 농도를 측정할 때 배경 간섭이 낮다.
5. 총단백질추출액은 여러가지 유효성분을 함유하고있어 포장단백질, 핵단백질과 막단백질을 충분히 방출할수 있으며 또 방출된 단백질과 결합하여 침전을 방지할수 있다.
6. 프로테아제 억제제는 단백질의 분해를 억제하고 프로테아제 억제제의 처방이 최적화된다.프로테아제 억제제 혼합물에는 6개의 독립적인 프로테아제 억제제인 AEBSF, Aprotinin, Leupeptin, Pepstatin A, Bestatin, E-64가 포함되어 있으며, 각 억제제는 특정 또는 여러 종류의 프로테아제 활성을 특이적으로 억제할 수 있다.이 혼합물은 최적화된 구성으로 단백질효소, 반단백질효소, 텐동아미노산단백질효소, 아세트아미노-아미노펩타이드 등 거의 모든 중요한 단백질효소의 활성을 억제할수 있다.
제품 적용
WB, IP, 공동 IP, ELISA, EMSA等
계기 준비
1.원심분리기
2. 발진기
3. 균장기/균장기
4. 와선 혼합기
5. 이액기
6. 냉장고
7. 아이스박스
2. 발진기
3. 균장기/균장기
4. 와선 혼합기
5. 이액기
6. 냉장고
7. 아이스박스
시약 준비
1. PBS 완충액
2. 단백질 정량 시약함
2. 단백질 정량 시약함
소모품 준비
1. 원심관
2. 헤드 흡입
3. 일회용 장갑
2. 헤드 흡입
3. 일회용 장갑
사용 시 고려 사항
• 헬멧 원심관에 장착된 시약은 뚜껑을 열기 전에 잠시 원심을 분리하고 뚜껑 내벽의 액체를 관 밑으로 던져 뚜껑을 열 때 액체가 쏟아지지 않도록 한다.
단백질 효소 억제제는 2-8 ℃ 에서 고체 상태이며, 냉장고에서 꺼낸 후 실온 또는 37 ℃ 로 회복되어 짧은 시간 수욕하고, 액체 상태가 된 후 원심에서 관 밑부분으로 분리되어 다시 뚜껑을 연다.
실험 과정 중의 모든 시약은 반드시 예냉해야 한다.모든 기구는 -20 ℃ 냉장고에 넣어 예냉해야 한다.전체 과정은 반드시 샘플이 저온에 있는 것을 유지해야 한다.
단백질 효소 억제제 저장 기간 용액이 침전되면 사용에 영향을 주지 않고 용해 후 정상적으로 사용한다.
만약 시약함을 단시간에 다 쓸 수 없다면 프로테아제 억제제 혼합물은 한 번에 모두 추출액을 넣을 수 없다.
자신의 실험에 따라 다른 프로테아제 억제제 아이템을 추가할 수 있다.
다운스트림 실험은 특정 프로테아제나 인산 효소의 효소 활성 검사를 하는 경우, 추출액은 프로테아제 억제제나 인산 효소 억제제를 넣지 않고 추출 과정에 저온 조작을 유지하여 원심 분리 시간을 단축할 수 있다.
Western Blot 실험 내삼은 beta-actin, GAPDH, Tubulin을 선택할 수 있습니다.
원심분리기 회전 속도는 상대적 원심력 (RCF, ×g) 과 분당 회전 속도 (RPM, r/min) 의 두 가지 표현 방식이 있으며, 일부 원심분리기는 RPM과 ×g 디스플레이 전환을 설정하지만 일부 원심분리기는 자동 전환 기능이 없다.g=r×1.118×10-5×rpm2 (r는 유효 원심 반경, 즉 원심 분리기 축에서 원심 수집관 하단 중심 위치까지의 길이, 단위는 센티미터) 예를 들면 회전 속도는 3000rpm, 유효 원심 반경은 10cm이면 상대 원심력 (RCF, ×g) 은 10×1.118×10-5×30002=1006g이다.
단백질 효소 억제제는 2-8 ℃ 에서 고체 상태이며, 냉장고에서 꺼낸 후 실온 또는 37 ℃ 로 회복되어 짧은 시간 수욕하고, 액체 상태가 된 후 원심에서 관 밑부분으로 분리되어 다시 뚜껑을 연다.
실험 과정 중의 모든 시약은 반드시 예냉해야 한다.모든 기구는 -20 ℃ 냉장고에 넣어 예냉해야 한다.전체 과정은 반드시 샘플이 저온에 있는 것을 유지해야 한다.
단백질 효소 억제제 저장 기간 용액이 침전되면 사용에 영향을 주지 않고 용해 후 정상적으로 사용한다.
만약 시약함을 단시간에 다 쓸 수 없다면 프로테아제 억제제 혼합물은 한 번에 모두 추출액을 넣을 수 없다.
자신의 실험에 따라 다른 프로테아제 억제제 아이템을 추가할 수 있다.
다운스트림 실험은 특정 프로테아제나 인산 효소의 효소 활성 검사를 하는 경우, 추출액은 프로테아제 억제제나 인산 효소 억제제를 넣지 않고 추출 과정에 저온 조작을 유지하여 원심 분리 시간을 단축할 수 있다.
Western Blot 실험 내삼은 beta-actin, GAPDH, Tubulin을 선택할 수 있습니다.
원심분리기 회전 속도는 상대적 원심력 (RCF, ×g) 과 분당 회전 속도 (RPM, r/min) 의 두 가지 표현 방식이 있으며, 일부 원심분리기는 RPM과 ×g 디스플레이 전환을 설정하지만 일부 원심분리기는 자동 전환 기능이 없다.g=r×1.118×10-5×rpm2 (r는 유효 원심 반경, 즉 원심 분리기 축에서 원심 수집관 하단 중심 위치까지의 길이, 단위는 센티미터) 예를 들면 회전 속도는 3000rpm, 유효 원심 반경은 10cm이면 상대 원심력 (RCF, ×g) 은 10×1.118×10-5×30002=1006g이다.
사용 방법
세포 샘플 총 단백질 추출:
부유 세포 단백질 추출:
1. 추출액 준비:
차가운 총단백질 추출액 500μl당 프로테아제 억제제 혼합물 2μl와 인산효소 억제제 혼합물 2μl를 섞어 섞은 뒤 얼음에 비치한다.
2.5 × 106개의 세포를 취하여 4 ℃, 2500 × g의 조건에서 5분 동안 원심을 분리하고 배양기를 조심스럽게 흡수하여 가능한 한 빨아들이고 세포를 수집한다.
3.차가운 PBS로 세포를 두 번 씻고, 매번 씻은 후 가능한 한 상청을 빨아들인다.
4.각 5×106-1×107개 세포(약 50mg 세포/50μl 세포침전 부피)에 차가운 총단백질 추출액 500μl를 넣고 섞어서 4℃ 조건에서 20-30분간 진동하여 세포가 충분히 분해될 때까지 뚜렷한 세포침전이 없다.
5.4 ℃, 12000 × g 조건에서 15 분 동안 원심분리.
6.상청을 다른 예냉된 깨끗한 원심관으로 흡입하면 총단백질을 얻을 수 있다.
7. 상기 단백질 추출물을 정량하여 -80 ℃ 냉장고에 나누어 보관하여 준비하거나 하류 실험에 직접 사용한다.
밀착 세포 단백질 추출:
1. 추출액 준비:
차가운 총단백질 추출액 500μl당 프로테아제 억제제 혼합물 2μl와 인산효소 억제제 혼합물 2μl를 섞어 섞은 뒤 얼음에 비치한다.
2. 벽에 붙인 세포의 배양액을 조심해서 섭취한다.
3. 차가운 PBS로 세포를 두 번 세척하고, 매번 세척 후 가능한 한 PBS를 빨아들인다.
4.적당량의 차가운 총단백질추출액을 넣고 15-30분 동안 진동하여 세포가 충분히 분해될 때까지 세포스크래치로 한번 긁어 분해액을 다른 깨끗한 원심관에 흡입한다.
5.4 ℃, 12000 × g 조건에서 15 분 동안 원심분리.
6.상청을 다른 예냉된 깨끗한 원심관으로 흡입하면 총단백질을 얻는다.
7. 상기 단백질 추출물을 정량하여 -80 ℃ 냉장고에 나누어 보관하여 준비하거나 하류 실험에 직접 사용한다.
조직 샘플 총 단백질 추출:
1. 추출액 준비:
차가운 총단백질 추출액 500μl당 프로테아제 억제제 혼합물 2μl와 인산효소 억제제 혼합물 2μl를 섞어 섞은 뒤 얼음에 비치한다.
2.50-100 mg의 조직 샘플을 채취하여 PBS로 깨끗이 씻은 다음 칼로 가능한 한 잘게 자르고, 500 μl의 총 단백질 추출액을 첨가하고, 조직 균장기/균장기로 뚜렷한 육안 가시 고체가 없을 때까지 균일한다.
3.조직 균일한 풀을 예냉된 깨끗한 원심관에 흡입하여 4 ℃ 조건에서 10-20 분 동안 진동한다.
4.4 ℃, 10000-14000×g 조건에서 15분간 원심분리한다.
5.상청을 다른 예냉된 깨끗한 원심관으로 흡입하면 총단백질을 얻는다.
6. 상기 단백질 추출물을 정량한 후 -80 ℃ 냉장고에 나누어 보관하여 준비하거나 하류 실험에 직접 사용한다.
부유 세포 단백질 추출:
1. 추출액 준비:
차가운 총단백질 추출액 500μl당 프로테아제 억제제 혼합물 2μl와 인산효소 억제제 혼합물 2μl를 섞어 섞은 뒤 얼음에 비치한다.
2.5 × 106개의 세포를 취하여 4 ℃, 2500 × g의 조건에서 5분 동안 원심을 분리하고 배양기를 조심스럽게 흡수하여 가능한 한 빨아들이고 세포를 수집한다.
3.차가운 PBS로 세포를 두 번 씻고, 매번 씻은 후 가능한 한 상청을 빨아들인다.
4.각 5×106-1×107개 세포(약 50mg 세포/50μl 세포침전 부피)에 차가운 총단백질 추출액 500μl를 넣고 섞어서 4℃ 조건에서 20-30분간 진동하여 세포가 충분히 분해될 때까지 뚜렷한 세포침전이 없다.
5.4 ℃, 12000 × g 조건에서 15 분 동안 원심분리.
6.상청을 다른 예냉된 깨끗한 원심관으로 흡입하면 총단백질을 얻을 수 있다.
7. 상기 단백질 추출물을 정량하여 -80 ℃ 냉장고에 나누어 보관하여 준비하거나 하류 실험에 직접 사용한다.
밀착 세포 단백질 추출:
1. 추출액 준비:
차가운 총단백질 추출액 500μl당 프로테아제 억제제 혼합물 2μl와 인산효소 억제제 혼합물 2μl를 섞어 섞은 뒤 얼음에 비치한다.
2. 벽에 붙인 세포의 배양액을 조심해서 섭취한다.
3. 차가운 PBS로 세포를 두 번 세척하고, 매번 세척 후 가능한 한 PBS를 빨아들인다.
4.적당량의 차가운 총단백질추출액을 넣고 15-30분 동안 진동하여 세포가 충분히 분해될 때까지 세포스크래치로 한번 긁어 분해액을 다른 깨끗한 원심관에 흡입한다.
5.4 ℃, 12000 × g 조건에서 15 분 동안 원심분리.
6.상청을 다른 예냉된 깨끗한 원심관으로 흡입하면 총단백질을 얻는다.
7. 상기 단백질 추출물을 정량하여 -80 ℃ 냉장고에 나누어 보관하여 준비하거나 하류 실험에 직접 사용한다.
조직 샘플 총 단백질 추출:
1. 추출액 준비:
차가운 총단백질 추출액 500μl당 프로테아제 억제제 혼합물 2μl와 인산효소 억제제 혼합물 2μl를 섞어 섞은 뒤 얼음에 비치한다.
2.50-100 mg의 조직 샘플을 채취하여 PBS로 깨끗이 씻은 다음 칼로 가능한 한 잘게 자르고, 500 μl의 총 단백질 추출액을 첨가하고, 조직 균장기/균장기로 뚜렷한 육안 가시 고체가 없을 때까지 균일한다.
3.조직 균일한 풀을 예냉된 깨끗한 원심관에 흡입하여 4 ℃ 조건에서 10-20 분 동안 진동한다.
4.4 ℃, 10000-14000×g 조건에서 15분간 원심분리한다.
5.상청을 다른 예냉된 깨끗한 원심관으로 흡입하면 총단백질을 얻는다.
6. 상기 단백질 추출물을 정량한 후 -80 ℃ 냉장고에 나누어 보관하여 준비하거나 하류 실험에 직접 사용한다.
FAQ 분석
1. 단백질 농도가 낮다?
일부 조직 샘플을 처리할 때 분해되지 않아 단백질 농도가 낮을 수 있다.시약 A의 처리 시간을 적당히 연장하면 된다.진동이 지속되는 조건에서 처리하면 발진기가 없어도 몇분 간격으로 흡두로 불어 섞을수 있다.
2.세포 분해 속도가 느리다?
추출된 단백질의 활성을 충분히 보장하기 위하여 추출액은 보호단백질의 처방을 채용하여 분해능력이 온화하고 하류응용범위가 넓다.분해 시간을 적당히 늘리면 된다.
3. 어떤 방법으로 단백질을 정량합니까?
BCA 법을 사용하는 것이 좋습니다.Bradford법은 시약 A에 Bradford법을 방해하는 성분이 함유되어 있어 정량이 정확하지 않기 때문에 사용하기에 적합하지 않다.이미 투석 처리를 했거나 탈염 기둥으로 완충 체계를 바꾼 경우 Bradford 법정량을 사용할 수 있습니다.
4. 추출 시 접착제 침전이 나타난다?
단백질 추출액 처리 산물에는 때때로 소량의 투명 접착제가 나타나는 정상적인 현상이다.이 투명 접착제는 게놈 DNA 등이 포함된 복합체다.게놈 DNA와 특히 밀접하게 결합한 특정 단백질을 검출하지 않고 직접 원심분리해 상청을 채취해 후속 실험을 하면 된다.게놈과 특별히 밀접하게 결합된 단백질을 검사해야 할 경우 초음파 처리를 통해 300w/10초 간격으로 10초, 초음파 3분, 이후 원심분리를 통해 청을 채취해 후속 실험에 사용할 수 있다.NF-kappaB, p53 등과 같은 일반적인 전사 계수를 감지할 때 초음파 처리를 할 필요가 없습니다.
5. 추출한 단백질은 활성이 있나요?
이 시약함에는 이온형 때 제거제 성분이 함유되어 있지 않으며, 단백질의 구조를 파괴하지 않으며, 단백질 사이의 원래의 상호작용에 대한 파괴가 없으며, 단백질은 모두 천연적인 구조와 활성을 유지한다.
일부 조직 샘플을 처리할 때 분해되지 않아 단백질 농도가 낮을 수 있다.시약 A의 처리 시간을 적당히 연장하면 된다.진동이 지속되는 조건에서 처리하면 발진기가 없어도 몇분 간격으로 흡두로 불어 섞을수 있다.
2.세포 분해 속도가 느리다?
추출된 단백질의 활성을 충분히 보장하기 위하여 추출액은 보호단백질의 처방을 채용하여 분해능력이 온화하고 하류응용범위가 넓다.분해 시간을 적당히 늘리면 된다.
3. 어떤 방법으로 단백질을 정량합니까?
BCA 법을 사용하는 것이 좋습니다.Bradford법은 시약 A에 Bradford법을 방해하는 성분이 함유되어 있어 정량이 정확하지 않기 때문에 사용하기에 적합하지 않다.이미 투석 처리를 했거나 탈염 기둥으로 완충 체계를 바꾼 경우 Bradford 법정량을 사용할 수 있습니다.
4. 추출 시 접착제 침전이 나타난다?
단백질 추출액 처리 산물에는 때때로 소량의 투명 접착제가 나타나는 정상적인 현상이다.이 투명 접착제는 게놈 DNA 등이 포함된 복합체다.게놈 DNA와 특히 밀접하게 결합한 특정 단백질을 검출하지 않고 직접 원심분리해 상청을 채취해 후속 실험을 하면 된다.게놈과 특별히 밀접하게 결합된 단백질을 검사해야 할 경우 초음파 처리를 통해 300w/10초 간격으로 10초, 초음파 3분, 이후 원심분리를 통해 청을 채취해 후속 실험에 사용할 수 있다.NF-kappaB, p53 등과 같은 일반적인 전사 계수를 감지할 때 초음파 처리를 할 필요가 없습니다.
5. 추출한 단백질은 활성이 있나요?
이 시약함에는 이온형 때 제거제 성분이 함유되어 있지 않으며, 단백질의 구조를 파괴하지 않으며, 단백질 사이의 원래의 상호작용에 대한 파괴가 없으며, 단백질은 모두 천연적인 구조와 활성을 유지한다.
