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상해시 포동신구
개요
Annexin V-APC 세포사멸 검사 키트는 분자량 35-36kD의 Ca2+ 의존성 인지 결합 단백질로, 세포사멸 과정에서 막 밖으로 뒤집히는 PS 고친화력 특이성과 결합한다.PS 외반은 세포 핵 파열, DNA 단편화 및 멸망 관련 단백질이 나타나기 전에 발생하며, 이로 인해 Annexin V와 PS의 결합은 멸망 초기의 것이 되었다......
제품 정보
Annexin V 사망검사 키트 소개
보관 온도:2-8 ℃ 피광
Annexin V 사망테스트 키트주의사항
1.장기간 사용하지 않으면 -20 ℃ 로 보관할 수 있다.
2. Annexin V-APC 염색액은 반복적으로 얼지 않도록 한다.여러 번 얼면 효력을 잃게 된다.
3. Annexin V-APC 염색액은 장기간 보관해야 할 경우 사용 상황에 따라 소량 분장 후 -20 ℃ 로 보관할 수 있다.
4. 시약은 개봉 후 빨리 사용하세요!
2. Annexin V-APC 염색액은 반복적으로 얼지 않도록 한다.여러 번 얼면 효력을 잃게 된다.
3. Annexin V-APC 염색액은 장기간 보관해야 할 경우 사용 상황에 따라 소량 분장 후 -20 ℃ 로 보관할 수 있다.
4. 시약은 개봉 후 빨리 사용하세요!
유효기간
1년
검사 방법
1.유동식세포계
2.레이저 공초점
3. 형광현미경
2.레이저 공초점
3. 형광현미경
적용 샘플
1. 부유세포
2. 밀착세포
2. 밀착세포
제품 특징
1. 편리함: 유식세포계 또는 형광현미경으로 검사할 수 있다.
2.신속: 1시간 이내에 실험을 완료할 수 있습니다.
3.정확: 살아있는 세포, 죽은 세포와 괴사 세포를 정확하게 구분하고 각 군세포의 비율을 계산할 수 있다.
2.신속: 1시간 이내에 실험을 완료할 수 있습니다.
3.정확: 살아있는 세포, 죽은 세포와 괴사 세포를 정확하게 구분하고 각 군세포의 비율을 계산할 수 있다.
제품 적용
1.유동식세포계
2.레이저 공초점
3. 형광현미경
2.레이저 공초점
3. 형광현미경
계기 준비
1.유동식 세포계 또는 형광 현미경 또는 레이저 공초점
2.원심분리기
3. 이액기
4. 냉장고
5. 아이스박스
2.원심분리기
3. 이액기
4. 냉장고
5. 아이스박스
시약 준비
1. PBS 완충액(pH7.4, 실험실에서 흔히 사용하는 10mM 인산 완충염 용액(1X))
또는 HBSS(Hank's Balanced Salt Solution)
또는 HBSS(Hank's Balanced Salt Solution)
소모품 준비
1. 원심관
2. 헤드 흡입
3. 일회용 장갑
4. 알루미늄 포일
2. 헤드 흡입
3. 일회용 장갑
4. 알루미늄 포일
Annexin V 사망테스트 키트사용 시 고려 사항
1. 나선형 뚜껑 미량 시약 튜브에 장착된 시약은 뚜껑을 열기 전에 잠시 원심을 분리하여 뚜껑 내벽의 액체를 튜브 밑으로 수집하여 뚜껑을 열 때 액체 손실로 인해 시약량이 부족하지 않도록 하십시오.
2.세포 처리는 인위적인 세포 손상을 피하기 위해 조심스럽게 조작해야합니다.원심력은 세포를 손실하지 않는 전제하에 될수록 작으며 중현세포는 동작이 가볍고 부드러워야 하며 여러차례 반복되는 격렬한 불기를 피해야 한다.소용돌이 발진기를 사용하지 않는다.
3. Annexin V-FITC(등)와 Propidium iodide(등)는 빛에 민감한 물질로 작동 시 빛을 피하고 빛에 노출되는 시간을 최소화하는 데 주의해야 한다.필요하면 뚜껑이 달린 아이스박스나 알루미늄박지를 이용해 빛을 피할 수 있다.표기 후 세포를 빛을 피하는 환경에서 유지한다.액체를 옮기는 과정에서 빛에 잠시 노출되는 것(<30초)은 받아들일 수 있다.
4. 세포가 죽는 것은 빠르고 동적인 과정이기 때문에 염색 후 바로 분석한다.
2.세포 처리는 인위적인 세포 손상을 피하기 위해 조심스럽게 조작해야합니다.원심력은 세포를 손실하지 않는 전제하에 될수록 작으며 중현세포는 동작이 가볍고 부드러워야 하며 여러차례 반복되는 격렬한 불기를 피해야 한다.소용돌이 발진기를 사용하지 않는다.
3. Annexin V-FITC(등)와 Propidium iodide(등)는 빛에 민감한 물질로 작동 시 빛을 피하고 빛에 노출되는 시간을 최소화하는 데 주의해야 한다.필요하면 뚜껑이 달린 아이스박스나 알루미늄박지를 이용해 빛을 피할 수 있다.표기 후 세포를 빛을 피하는 환경에서 유지한다.액체를 옮기는 과정에서 빛에 잠시 노출되는 것(<30초)은 받아들일 수 있다.
4. 세포가 죽는 것은 빠르고 동적인 과정이기 때문에 염색 후 바로 분석한다.
5. Annexin V-FITC(등) 시약함을 사용하여 시체를 검사하려면 살아있는 세포를 대상으로 해야 한다.세포를 고정시키지 마라, 고정 조작은 결과에 방해가 될 수 있다.
사용 방법
샘플 염색:
1. 원심분리는 부유세포를 수집한다.원심분리기 300×g-500×g력, 2-8°C, 원심분리시간 5분, 배양기 포기.
2. 차가운 PBS로 세포를 두 번 세척한다.(300 × g -400 × g, 2-8 °C, 원심 분리 시간 5 분 세포 수집).
3.100 μl 1X Annexin V 결합액 부유 세포, 농도는 약 1-5 X 106 cells/ml입니다.
4. 세포부상액에 5μl Annexin V-APC 염색액을 넣고 가볍게 섞은 후 2-8 °C 피광 조건에서 5-15분간 부화한다.
5. PI(또는 7-AAD) 염색액을 넣고 2-8°C 피광 조건에서 1~3분간 가볍게 섞는다.(이 단계는 실험의 필요에 따라 APC 단일 염색만 할 수 있도록 선택합니다.)
6. PBS 400 μl 또는 1X Annexin V 결합액을 넣고 가볍게 섞는다.
7.즉시 유동식세포계로 검사한다.
흐름식 세포계 분석:
처리된 세포는 이때 유동식 세포계에서 분석할 수 있다.
일반적인 유동식 멸망 검측의 조작에 따라 하면 된다.
Annexin V-APC의 형광 자극 파장은 652m, 발사 파장은 670m입니다. PI 형광 자극 파장은 535m, 발사 파장은 620m입니다.
비행기에 올라 검사하기전에 반드시 측정을 기다리는 세포제조품질제어견본으로 류식세포계의 형광보상과 십자문을 설치하는 범위를 설정해야 한다.
(I) GFP 등 표기된 세포로 전염되지 않음
① 공백관: 음성 대조군 세포, 염색된 세포가 없다.Annexin V/APC, PI를 추가하지 않습니다.전압을 조절하는 데 쓰인다.
② 단염관: 눈에 띄게 죽은 세포가 있으며 Annexin V/APC만 염색한다.보상 조정에 사용됩니다.
③ 단염관: 눈에 띄게 죽은 세포가 있어 PI 염색만 한다.보상 조정
④ 검사관: 측정할 처리세포, Annexin V/APC, PI를 첨가한다.공백관과 단양관으로 전압 보상을 잘 조절한 후 필요한 유동식 데이터를 얻는다.
(II) GFP 세포 전염
① 미전염 공백관: 미전염 세포, 음성 대조군 세포, 염색되지 않은 세포.Annexin V/APC, PI를 추가하지 않습니다.전압을 조절하는 데 쓰인다.
② GFP 여백관 전염: GFP를 전염시킨 대조군 세포, 염색되지 않은 세포.Annexin V/APC, PI를 추가하지 않습니다.보상 조정에 사용
③ 무전염 단염관: 무전염이고 뚜렷하게 죽은 세포가 있으며 Annexin V/APC만 염색한다.보상 조정에 사용됩니다.
④ 미전염 단염관: 미전염이고 뚜렷하게 죽은 세포는 PI 염색만 한다.보상 조정
⑤ 검사관: 측정할 처리세포, Annexin V/APC, PI를 첨가한다.공백관과 단양관으로 전압 보상을 잘 조절한 후 필요한 유동식 데이터를 얻는다.
1. 원심분리는 부유세포를 수집한다.원심분리기 300×g-500×g력, 2-8°C, 원심분리시간 5분, 배양기 포기.
2. 차가운 PBS로 세포를 두 번 세척한다.(300 × g -400 × g, 2-8 °C, 원심 분리 시간 5 분 세포 수집).
3.100 μl 1X Annexin V 결합액 부유 세포, 농도는 약 1-5 X 106 cells/ml입니다.
4. 세포부상액에 5μl Annexin V-APC 염색액을 넣고 가볍게 섞은 후 2-8 °C 피광 조건에서 5-15분간 부화한다.
5. PI(또는 7-AAD) 염색액을 넣고 2-8°C 피광 조건에서 1~3분간 가볍게 섞는다.(이 단계는 실험의 필요에 따라 APC 단일 염색만 할 수 있도록 선택합니다.)
6. PBS 400 μl 또는 1X Annexin V 결합액을 넣고 가볍게 섞는다.
7.즉시 유동식세포계로 검사한다.
흐름식 세포계 분석:
처리된 세포는 이때 유동식 세포계에서 분석할 수 있다.
일반적인 유동식 멸망 검측의 조작에 따라 하면 된다.
Annexin V-APC의 형광 자극 파장은 652m, 발사 파장은 670m입니다. PI 형광 자극 파장은 535m, 발사 파장은 620m입니다.
비행기에 올라 검사하기전에 반드시 측정을 기다리는 세포제조품질제어견본으로 류식세포계의 형광보상과 십자문을 설치하는 범위를 설정해야 한다.
(I) GFP 등 표기된 세포로 전염되지 않음
① 공백관: 음성 대조군 세포, 염색된 세포가 없다.Annexin V/APC, PI를 추가하지 않습니다.전압을 조절하는 데 쓰인다.
② 단염관: 눈에 띄게 죽은 세포가 있으며 Annexin V/APC만 염색한다.보상 조정에 사용됩니다.
③ 단염관: 눈에 띄게 죽은 세포가 있어 PI 염색만 한다.보상 조정
④ 검사관: 측정할 처리세포, Annexin V/APC, PI를 첨가한다.공백관과 단양관으로 전압 보상을 잘 조절한 후 필요한 유동식 데이터를 얻는다.
(II) GFP 세포 전염
① 미전염 공백관: 미전염 세포, 음성 대조군 세포, 염색되지 않은 세포.Annexin V/APC, PI를 추가하지 않습니다.전압을 조절하는 데 쓰인다.
② GFP 여백관 전염: GFP를 전염시킨 대조군 세포, 염색되지 않은 세포.Annexin V/APC, PI를 추가하지 않습니다.보상 조정에 사용
③ 무전염 단염관: 무전염이고 뚜렷하게 죽은 세포가 있으며 Annexin V/APC만 염색한다.보상 조정에 사용됩니다.
④ 미전염 단염관: 미전염이고 뚜렷하게 죽은 세포는 PI 염색만 한다.보상 조정
⑤ 검사관: 측정할 처리세포, Annexin V/APC, PI를 첨가한다.공백관과 단양관으로 전압 보상을 잘 조절한 후 필요한 유동식 데이터를 얻는다.
FAQ 분석
실험 과정에서 Annexin V는 염색되지 않거나 양성률이 낮았다.가능한 이유는 다음과 같습니다.
1. 검사에 사용되는 유식세포계/현미경이 잘못 설치되였다.올바른 기기 설정을 사용하도록 조정합니다.
2. 실험 중인 유도제가 시들어 버릴 수 있는지 확인한다.정확한 사망 유도 효과를 설정하는 양성 약물 대조를 통해 이를 배제할 수 있다.
3. 세포가 시들지 않는다.유도 후 시체 발동 시점을 다시 정한다 (시정 실험).
4. 세포 수가 적은 편이다.세포 수를 늘리다.
5. 밀착세포가 소화되지 않는다.Annexin V와 PS의 결합은 Ca2+ 이온이 필요하며, 결합액에는 Ca2+가 함유되어 있어 EDTA의 소화는 염색에 영향을 줄 수 있으므로 EDTA가 없는 것을 사용하거나 소화 후 PBS로 깨끗이 세탁하는 것이 좋습니다.
실험 과정에서 양성률이 높은 편이다.가능한 이유는 다음과 같습니다.
1. 검사에 사용되는 유식세포계/현미경이 잘못 설치되였다.올바른 기기 설정을 사용하도록 조정합니다.
2.세포 자체의 활력이 너무 떨어진다.실험에서 쇠망을 유도하지 않은 대조세포가 염색된 후 AnnexinV+/PI+ 쌍양성의 세포 비율이 너무 높다는 것을 발견했는데, 이런 결과의 원인은 세포 자체의 활력이 너무 떨어지기 때문일 것이다.대망람 염색으로 세포의 활력을 계산할 것을 건의하며, 대망람 염색을 거부하는 세포는 95% 보다 커야 한다.만약 활력이 낮은 편이라면 세포를 다시 소생시키는 것을 권장하며, 보통 갓 소생한 세포는 적어도 세 번 대물림된 후에야 실험을 할 수 있다.
1. 검사에 사용되는 유식세포계/현미경이 잘못 설치되였다.올바른 기기 설정을 사용하도록 조정합니다.
2. 실험 중인 유도제가 시들어 버릴 수 있는지 확인한다.정확한 사망 유도 효과를 설정하는 양성 약물 대조를 통해 이를 배제할 수 있다.
3. 세포가 시들지 않는다.유도 후 시체 발동 시점을 다시 정한다 (시정 실험).
4. 세포 수가 적은 편이다.세포 수를 늘리다.
5. 밀착세포가 소화되지 않는다.Annexin V와 PS의 결합은 Ca2+ 이온이 필요하며, 결합액에는 Ca2+가 함유되어 있어 EDTA의 소화는 염색에 영향을 줄 수 있으므로 EDTA가 없는 것을 사용하거나 소화 후 PBS로 깨끗이 세탁하는 것이 좋습니다.
실험 과정에서 양성률이 높은 편이다.가능한 이유는 다음과 같습니다.
1. 검사에 사용되는 유식세포계/현미경이 잘못 설치되였다.올바른 기기 설정을 사용하도록 조정합니다.
2.세포 자체의 활력이 너무 떨어진다.실험에서 쇠망을 유도하지 않은 대조세포가 염색된 후 AnnexinV+/PI+ 쌍양성의 세포 비율이 너무 높다는 것을 발견했는데, 이런 결과의 원인은 세포 자체의 활력이 너무 떨어지기 때문일 것이다.대망람 염색으로 세포의 활력을 계산할 것을 건의하며, 대망람 염색을 거부하는 세포는 95% 보다 커야 한다.만약 활력이 낮은 편이라면 세포를 다시 소생시키는 것을 권장하며, 보통 갓 소생한 세포는 적어도 세 번 대물림된 후에야 실험을 할 수 있다.
