qPCR용 올 인 원 RT 슈퍼qqqPCR试剂

저장 운송 조건

-20℃

제품 구성

qPCR용 올 인 원 RT 슈퍼qqqPCR试剂

제품 소개

All-in-One RT SuperMix for qPCR(with dsDNase)은 M-MLV GIIIReverse Transcriptase 및 반응 Buffer, RNA 효소 억제제, dNTPs, Oligo(dT) 20VN 및 무작위 유인물 등 RNA 합성에 필요한 모든 RNA 성분의 템플릿을 포함하여 효율적이고 편리하게 오염을 감소시키는 고품질의 cDNA 합성 시약함이다.All-in-One RT SuperMix for qPCR(withdsDNase)은 업그레이드된 일련의 cDNA 합성 시약함으로서 15분 동안 최장 12kb cDNA를 얻을 수 있으며, 산물은 qPCR, 일반 PCR 등의 실험에 사용할 수 있다.조직이나 세포에서 추출한 RNA는 종종 게놈 DNA 오염이 남아 있는데, 만약 반전록 전에 제거 처리를 하지 않으면 하류에서 qPCR 반응을 할 때 게놈 DNA와 cDNA가 동시에 증폭되는데, 특히 유인물이 같은 외현자에 설계될 때 정량 정확성에 영향을 미친다.이 시약함에 사용되는 dsDNase는 듀얼 체인 DNA 또는 DNARNA가 듀얼 체인에 섞인 DNA를 특이적으로 소화할 수 있으며 열 민감성을 가지고 있어 역전 반응 온도에서 빠르게 불가역적으로 작동할 수 있다.dsDNase는 DNase I를 게놈 DNA 오염을 제거하는 전통적인 방법에 비해 EDTA를 추가로 추가하여 비활성화할 필요가 없어 실험 시간을 절약할 뿐만 아니라 역전록 반응에 대한 억제를 낮춘다.게놈 DNA 오염의 심각도에 따라 게놈 제거 DNA 오염과 반전록을 분리하여 진행하거나 게놈 제거 DNA 오염과 반전록을 한 단계 진행하는 조작 방법을 선택할 수 있다.

사용 방법

게놈 DNA 함량이 낮은 RNA 샘플에 대한(권장 시나리오)

qPCR용 올 인 원 RT 슈퍼qqqPCR试剂

① 얼음에 다음과 같은 반응체계를 배합한다.

a. 시약함에서 추출한 고품질 RNA를 템플릿으로 사용하는 것을 추천합니다.

② 가볍고 부드럽게 잘 섞어 순리한다.

③ 게놈 DNA 오염을 제거하기 위해 37 ℃ 온육 2 min;

④ 55℃ 온육 15min;

⑤ 반응이 끝나면 85℃에서 2min 온육하여 반응을 종료한다.

⑥ 얻은 cDNA를 신속하게 얼음 위에 올려 후속 실험에 사용한다.또는 -20 ℃ 에 즉시 저장합니다.

게놈 DNA 함량이 높은 RNA 샘플에 대한

1. 게놈 DNA 오염 제거

① 얼음에 다음과 같은 반응체계를 배합한다.

a. 시약함에서 추출한 RNA를 템플릿으로 사용하는 것을 추천합니다.

② 가볍고 부드럽게 잘 섞어 순리한다.

③ 게놈 DNA 오염을 제거하기 위해 37 ℃ 온육 2 min;

참고: RNA에서 게놈 DNA 오염이 심하면 37 ℃ 의 온육 시간을 5 min 까지 적당히 연장할 수 있습니다.

④ 65 ℃ 온육 2 min, dsDNase를 비활성화한 후 얼음 위에 놓는다.

2. 제1사슬 cDNA 합성

① 얼음에 다음과 같은 반응체계를 배합한다.

② 가볍고 부드럽게 잘 섞어 순리한다.

③ 50℃ 온육 15min;

참고: 대상 RNA에 Poly(A) 구조가 포함되어 있지 않으면 25 ℃ 에서 10 min 미리 태울 수 있습니다.

④ 반응이 끝나면 85℃에서 2min 온육하여 반응을 종료한다.

⑤ 얻은 cDNA 용액을 얼음 위에 놓아 후속 실험에 사용한다.

참고: cDNA 용액은 -20 ℃ 에 저장되며 1 주를 초과하지 않는 것이 좋습니다.-80 ℃ 에 두면 장기간 저장할 수 있다.

주의사항

프리믹스액에는 이미 올리고(dT) 20VN과 무작위 유인물이 포함돼 있어 폴리(A) 구조가 포함된 진핵생물 mRNA뿐만 아니라 폴리(A) 구조가 없는 원핵생물 RNA, 진핵생물 rRNA, tRNA 등 템플릿에도 적용되지만 miRNA 등 작은 RNA 템플릿에는 적용되지 않는다.

미국 Azaood사는 2004년에 설립되였는데 생명과학연구, 진단 및 생물기술응용에 사용되는 고품질순화효소, 단백질, 핵산 및 세포분리시약함, 태우혈청을 개발하고 생산한것이다.Azood Corporation은 ISO9001 인증을 통과한 주요 제조업체로 연구부터 대규모 대량 바이오 가공 및 OEM 응용 프로그램 및 요구 사항을 충족 할 수 있습니다.