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Mesa Labs
고효율 Gyolab 항체 검사 솔루션으로 조작을 간소화하는 동시에 정확도를 높인다
날짜:2024-12-10읽기 :0
Gyrolab 플랫폼은 자동화 샘플링 방식으로 마이크로 흐름 제어 CD에서 소형화 면역 검사를 진행한다.CD 마이크로 구조물에 스트렙토마이신 친화 소포 이불을 채운 친화 마이크로 구슬은 바이오매스 포획 시약과 분석물 특이성을 결합한 후 형광 표시의 검측 시약과 결합하여 레이저를 통해 친화 기둥의 형광 신호를 자극하고 검측기로 형광 신호를 판독한다.Gyrolab 면역 측정법은자동화, 높은 사용량, 시간 절약, 적은 시약 및 샘플 사용량, 넓은 동적 범위, 낮은 기저 효과등 우세는 이미 생물약물의 연구개발과 생산분야에서 광범위하게 응용되였다.
Gyrolab은 ADA를 균상 브리지 형식(homogenous bridgingformat)으로 검출하며, 약물 분자는 포획 시약(바이오매스)과 검사 시약(Alexa Fluor)으로 동시에 사용된다.® 647 형광표시), 시료와 시약을 혼합한 후 CD 미세구조의 스트렙토마이신 친화소 기둥에 넣은 후 ADA 또는 양성대조를 검사하여 바이오매스화된 약물분자와 형광단에 표시된 약물분자 사이에 브리지 복합물을 형성한다.이 검사 형태는 모든 동종형의 ADA(IgG, IgM, IgA 등)를 검사할 수 있으며 종에 의존하지 않아 임상 전에도 임상 연구에도 사용할 수 있다.
Gyrolab 플랫폼ADA 테스트를 위한 완벽한 솔루션 제공ADA 분석 소프트웨어 모듈, Rexxip ADA 시료 희석 버퍼, 두 가지 다른 형식의 CD를 포함하여 선별 시험에서 확증 시험 개발에 이르는 워크플로우를 단순화합니다.
Gyrolab 혼합 CD 96是산 해법 검출 ADA를 위한 미세 흐름 제어 CD로, 샘플 산 해리 사전 처리 단계를 자동화 검출 프로세스에 통합합니다.. 각 Mixing CD에는 96개의 마이크로 구조물이 있으며, 각 마이크로 구조물에는 샘플 부화와 산 해리에 사용할 수 있는 샘플 혼합실이 있습니다.ADA 검사를 할 때 먼저 시료를 미세구조에서의 체적정의통로에 넣고 200nL 시료는 CD의 원심력에 의해 혼합실에 진입한후 이어서 산성완충액을 혼합실에 첨가하면 ADA-약물복합물은 낮은 pH환경에서 해리할수 있다.그런 다음 캡쳐 시약과 검사 시약이 포함된 Master Mix 중화 완충액에 혼합실을 넣으면 ADA 분자가 마커 시약과 접촉하여 새로운 ADA 복합체를 형성합니다.이렇게 하면 표시 시약과 미표시 유리 약물의 비율이 검사 가능한 표시 시약-ADA 브리지 복합체를 형성하는 데 유리하고, 마지막에는 복합체를 스트렙토마이신 친화소 포피의 마이크로 구슬에 포획하여 레이저를 통해 형광 검사기를 유도하여 검사한다.이 검사 프로세스는 샘플 시약 첨가, 온라인 산 해리, 신호 검사에 이르는 전체 자동화를 실현하며, 자동화 프로그램은 각 단계의 시간과 반응 부피를 정확하게 제어한다.손놀림을 최소화하여 검사 정확도를 크게 향상시켰을 뿐만 아니라 분석 시간도 대폭 단축했습니다.
Gyrolab은ADA 검사에 대한 유리 약물의 간섭을 극복하기 위해 두 가지 다른 샘플 사전 처리 방식을 지원약물의 특성과 응용 상황에 따라 적용 가능한 방법을 유연하게 선택할 수 있다.Gyrolab 기술을 사용하여 ADA 테스트를 수행하는주요 이점다음을 포함합니다.
업그레이드된 반응 체계를 적용하여 시약과 샘플의 사용량이 적다
자동 온라인 산 해리, 검측 정밀도 향상
친화 기둥 흐름 기술은 기질 효과를 최소화하여 검측 민감도와 약물 내성을 높인다
친화주 고적재량은 고농도의 표기시약과 유리약물의 경쟁에 더욱 유리하며 계량우세를 통해 약물의 내수성을 한층 더 높인다
빠른 분석 속도, CD당 약 1시간, Mixing CD 96 온라인 산 해리 감지 2시간
손놀림이 적어 인위적인 오차를 줄이다
전용 ADA 소프트웨어 모듈은 규제 표준에 따라 시험 및 검증 시험 개발 프로세스를 필터링합니다.
면역 원성 검사 방법의 핵심 매개 변수는민감도, 약물 내성 및 선택성 검사.약물 내성이란 치료제가 남아 있는 상태에서 항약물항체(ADA)를 검사하는 능력을 말하며, 유리약물과 ADA의 결합 상황을 평가하는 것은 가짜 음성이 나올 위험을 피하기 위한 것이다.선택성이란 정상 기질이나 질병 기질의 경우 검사의 안정성을 평가하는 것으로, 임상 연구에서 서로 다른 샘플을 평가할 때의 일관성을 확보하는 데 매우 중요하다.또한 브리지 연결법을 사용하여 ADA 검사를 할 때 가장 큰 도전은 표적의 간섭이며, 임상 샘플에 존재하는 2중합체 또는 다중합체 형태의 가용성 표적은 표적의 간섭을 초래할 수 있다가짜 양성 결과。
Novimmune SA 연구진은 치료용 항체 약물 (Novimab) 의 ADA 검사 방법을 개발하는 과정에서 Gyrolab과 ECL (Electochemiluminescence, ECL) 기술로 다른 방식으로 처리된 샘플을 검사했다 (표적 고갈 샘플, 비표적 고갈 샘플, 산화 샘플 및 비산화 샘플) 및 두 가지 검사 방법의 주요 매개변수 예제민감도, 약물 내성, 표적 내성과 같은 평가 및 비교, 목적에 부합하는 (Fit-for-purpose) 임상 면역 원성 검사 방법을 얻기 위해[1].
연구자 사용생분해 된 약물 을 포획 시약 으로 하다，Alexa Fluor® 647 마커(Gyrolab) 또는 Sulfo-tag 마커(ECL)의 약물은 포획 시약으로, 순화된 다크론 토끼 항체 항체는 ADA 양성 참조물로 두 플랫폼에서 균상 브리지 형식으로 ADA 검사를 진행한다.Gyrolab 플랫폼은 Bioaffy 200 CD를 사용하여 비산성 시료 검사를 수행하고 Mixing CD 96은 산성 시료 검사를 수행하며 시료 산 해리 및 중화는 Mixing CD에서 자동으로 수행됩니다.
3일 동안 음성 대조 샘플 1개(NC)와 양성 대조 샘플 9개(PC, 2, 5, 20, 50, 100, 250, 500, 1000 및 10000 ng/mL ADA)를 검사하여 3차례 검사간 실행 결과에 따라 감도를 확정한다. 즉 임계값 신호보다 높은 z 저PC 농도를 지속적으로 반환한다.
두 방법 모두 100 ng/mL 미만으로 민감도가 높습니다.비산화 시료 검사의 경우 Gyrolab과 ECL 플랫폼의 감도는 모두 2 ng/mL입니다.산해리 절차를 채택한 샘플의 경우Gyrolab은 5 ng/mL의 감도를 감지하여 ECL의 20 ng/mL보다 높습니다.
비산해와 산해리 조건에서 Gyrolab 및 ECL 플랫폼이 PC 샘플에서 감지한 신호 값.X축은 ADA 참조물 농도, Y축은 노이즈 비율(PC 신호 평균을 NC 신호 평균으로 나눈 값)
두 플랫폼에서 최적화된 최적의 조건을 사용하여 각각 산화 및 비산화 샘플의 검사를 비교 연구했습니다. 0, 20 및 100 µg/mL 단항 약물이 함유된 상태에서 9 가지 PC 샘플 (5, 20, 50, 100, 250, 500, 1000, 2500 및 10000 ng/mL ADA) 을 검사했습니다.데이터에 따르면 Gyrolab 플랫폼은 더 높은 약물 내성을 보여줍니다.. 산화되지 않은 시료 검사의 경우 Gyrolab은 20 µg/mL와 100 µg/mL의 약물 농도에서 각각 100 ng/mL과 500 ng/mL의 ADA를, ECL 플랫폼은 각각 250 ng/mL과 1000 ng/mL을 감지 할 수 있습니다.산 해리 시료 검사의 경우 약물 농도가 20 µg/mL일 때Gyrolab은 5 ng/mL ADA를 감지합니다.,ECL 플랫폼은 50ng/mL입니다.약물 농도 수준이 100 µg/mL로 높아졌을 때 두 플랫폼의 감지 감도는 모두 50 ng/mL ADA입니다.
약물 수준이 0, 20 및 100 µg/mL인 조건에서 두 플랫폼의 감지 감도.감도는 임계값 신호를 초과하는 z 낮은 PC 농도로 정의됩니다.
본 연구에서 가용성 표적은 이중합체 간섭 검사를 형성하여 가짜 양성 결과를 초래할 수 있으며, 질병자 중 가용성 이중합체 표적의 기초 수준은 건강한 사람의 혈청에서 측정된 수준보다 훨씬 높을 수 있기 때문에측정 방법의 표적 내성 향상임상 분석에 매우 중요합니다.
표적 고갈 단계의 효율을 평가하기 위해, 네 가지 다른 농도의 가용성 이중합체 표적을 함유할 것이다(5、20、50 和 200 ng/mL)의 견본품을 두 조로 나누어 한 조로 진행하다표적 고갈 전 처리, 다른 그룹표적 소모를 하지 않는다그런 다음 두 플랫폼에서 각각 유/무 산 해리 단계를 검사합니다.데이터에 따르면 산해리가 없는 상황에서 Gyrolab과 ECL 검사는 모두 5ng/mL의 가용성 이중합체 표적에만 견딜 수 있다;표적 고갈과 산 해리 단계를 결합함으로써 두 플랫폼의 표적 내성 수준은 모두 200 ng/mL로 향상되었습니다.
무산 해리 또는 무표적 고갈 단계 조건에서 서로 다른 가용성 이중합체 표적 농도에서 두 플랫폼의 내성을 평가한다.점선이 나타내는 임계값은 노이즈 비율 1.25로 고정됩니다.
두 플랫폼이 서로 다른 가용성 이중합체 표적 농도에서 측정한 결과, 기호'+'와'-'는 각각 샘플 신호가 임계값보다 높거나 낮음을 나타낸다.
유리 ADA만 포함된 샘플을 사용하여 수행했습니다.산해리 샘플과 산해리되지 않은 샘플의 검사를 포함한 검사간 정밀도 평가.날짜별로 ECL 플랫폼을 사용하여 9종의 다른 농도의 PC(2, 5, 20, 50, 100, 250, 500, 1000 및 10000 ng/mL)를 3회, Gyrolab 플랫폼을 사용하여 5종의 다른 농도의 PC(5, 20, 100, 500 및 10000 ng/mL)를 5회, 각 PC 수준에서 얻은 신호 값에 따라 운행 간 정밀도(CV)를 계산한다.데이터에 따르면 산 해리 단계 없이 Gyrolab과 ECL 검사의 정밀도는 매우 높으며 모든 PC 샘플의 CV는 10% 미만입니다.그러나 산해리 검사에서 ECL 검사의 CV가 10%에서 26%로 증가한 것이 뚜렷하게 관찰되었고, Gyrolab 검사는 여전히 양호한 정밀도를 유지하여 5ng/mL PC 샘플을 제외한 다른 샘플에서 검사한 CV는 모두 10% 미만이었다.왜냐하면Gyrolab 기술은 완전 자동화 산 해리 처리로 인공 조작과 오차를 줄여 결과의 변이성을 낮춘다.
검출 간 정밀도, "NT"는 검출되지 않았음을 나타냅니다.“
이 연구 자료에 따르면 Gyrolab 및 ECL 기술은 ADA에서 감지되었습니다.민감도, 약물 내성, 표적 내성 및 정밀도기다리다파라미터 방면에서 모두 양호한 성능을 나타내며, 두 가지 검사 방법은 모두 방법 검증과 임상 샘플 분석에 적용된다
산해리 절차를 채택한 샘플 검사에 대해Gyrolab은 더 높은 검사 감도와 약물 내성을 가지고 있습니다.
Gyrolab 플랫폼 통합 전자동 시료산 해리,손놀림과 오류 감소, 검사 간 결과 반복성 향상
Gyrolab 검사에 필요한 시약량 감소, 검사 실행시간 단축, 전체 용량 증가
참조 문서:
[1] Collet-Brose J, Couble PJ, Deehan MR, Nelson RJ, Ferlin WG, Lory S. 가장 적절한 약물과 대상 내용성을 보여주는 항약 항체 분석을 선택하기 위해 다중 면역분석 기술 플랫폼의 평가.J 면역 결정. 2016;2016:5069678.도이: 10.1155/2016/5069678.Epub 2016년 5월 3일PMID: 27243038;PMCID: PMC4868908.