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숙주 세포 단백질 (HCP) 잔류 분석을 더 효율적이고 신뢰할 수있는 방법
날짜:2024-12-10읽기 :0
숙주 세포 단백질 (Host cell protein, HCP) 은 숙주 세포 (CHO, HEK293, E.coli, Sf9 등) 가 생산하거나 코딩하여 생성 한 비목표 단백질로 생물 약물 중 과정 관련 불순물의 주요 구성 부분입니다. 대부분의 숙주 세포 단백질 (99% 이상) 은 하류 공정에서 제거되지만 여전히 소량의 HCP 잔류가 약물 제품과 함께 순화 될 수 있습니다. 따라서 PHCs, HCS 또는 HCS 활성 물질은 안전하거나 활성 물질에 영향을 미칠 가능성이 높습니다. 제약 기업과 규제 기관이 주목하는 중점.
중국 햄스터 난소 세포 CHO 발현 시스템은 단항 등 생물 기술 약물 생산에서 자주 사용되는 포유류 발현 시스템 중 하나로, 인간이 생성한 번역 후 수식과 유사한 복잡한 단백질을 생산할 수 있기 때문이다.CHO 세포 배양액에 대한 하류 순화는 일반적으로 단백질 A 친화 계층 분석을 포함하며, 그 다음에는 집결물, 전하 변종, HCP 및 숙주 세포 DNA를 더 제거하기 위한 정제 단계가 있습니다.순화 과정에서 대부분의 HCP가 지워지지만 다음 두 가지 방법으로 인해 일부 HCP가 지워질 수 있습니다.
1
HCP는 제품의 특이성 또는 비특이성과 결합할 수 있는 능력을 갖추고 공정 과정에서 휴대된다;
2
HCP는 단백질 A 크로마토그래피 충전재와 상호작용하는 능력이 있어 제품과 함께 씻어낸다.
HCP 피해 및 분류
HCP의 잠재적 위험은 약물 적응증, 약물 공급 경로, 약물 공급 빈도, 각 약물 공급량의 HCP 수, 환자 그룹, HCP와 인간 대응물의 동원성 및 이전의 비임상 및/또는 임상 경험을 포함한 다양한 요인의 영향을 받는다.
제품 품질, 보안 및 유효성에 대한 HCP의 잠재적 영향:
면역원성:항체 항체, 세포인자 생성 유도 등
효과:단백질 집합 또는 분해
안정성: 지방 효소 분해 보조재료
보안:내원 단백질과 상호작용, 면역 보조제 작용
BPDG HCP 작업팀은 단일 HCP를 제품과 함께 순화하는 능력, 다운스트림 프로세스에서 나타나는 빈도, 약물/보조재를 변경하거나 분해하는 능력, 잠재적 면역 원성을 기반으로 고위험 HCP의 영향을 네 가지 범주로 나눕니다.
1) 제품의 품질, 2) 제제, 3) 인체에 대한 직접적인 생물학적 기능, 그리고 4) 면역원성.
현재 다양한 방법으로 약물 개발 과정에서 존재하는 모든 것과 개별 특정 HCP의 수준을 식별하고 정량화할 수 있다.모든 방법에는 자기의 장점과 단점이 있다.알려진 HCP 불순물은 다음과 같은 종합적인 분석 정책에 따라 정확하게 측정할 수 있으며, 위험성이 높은 HCP로 확인되면 이를 모니터링하거나 제거하기 위한 제어 정책을 개발할 수 있습니다.
01 ELISA와 같은 면역 측정법을 통해 총 HCP를 측정하는 것은 공정 개발을 안내하고 GMP 배치 검사를 지원하기 위해 잔류 HCP 수준을 결정하는 주요 작업 수단입니다.총 HCP 면역 측정법을 개발하는 데 필요한 핵심 시약은 상세한 표징을 거쳐야 한다.
02 2D 겔 전영/Western, 및/또는 항체 친화 추출(Antibody Affinity Extraction, AAE)과 같은 추가 직교 방법을 사용하여 공정 특정 HCP에 대한 핵심 항체 시약의 커버리지를 평가하는 스펙트럼 분석을 수행해야합니다.
03 총 HCP 면역 측정은 공정 샘플에서 HCP의 수준을 결정하기 위해 일반적으로 수행되어야합니다.
04 질량 스펙트럼 및/또는 추가 단일 HCP 검사 방법과 같은 직교 방법을 사용하여 제품 순도를 보장하는 것이 좋습니다. 특히 면역 측정이 총 HCP 수준 상승, 희석 비선형 관찰 또는 제품 품질 영향을 관찰 할 때 그렇습니다.
05 개별 HCP가 확인되고 잠재적으로 높은 위험으로 간주되는 경우:
a
알려진 불순물을 모니터링하기 위한 특정 면역 측정법을 개발하거나 HCP의 수준과 잠재적 영향을 더 잘 이해하기 위한 목적성 있는 질량 스펙트럼 분석 방법을 개발해야 할 수도 있습니다.
b)
만약 확정된 불순물이 효소의 활성을 가지고 있다면, 공정과 제품 개발을 지도하고, 이 단백질을 모니터링, 제거 및/또는 불활성화할 수 있는 활성 측정법을 개발할 수 있다.
c
인실리코 방법으로 면역원성 평가를 하고, 면역원성 위험이 높다는 예측이 나오면 체외비교면역원성평가(IVCIA)를 할 수 있다.
d
독리학 연구는 임상 위험을 평가한다.
총 HCP 정성 및 정량 분석에 사용되는 방법은 주로 면역 측정법이며 일반적으로 하나 이상의 ELISA 방법을 사용하여 검사합니다.그러나 기존 ELISA는 다음과 같은 한계를 가지고 있습니다.
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여러 개의 부화와 세척 절차는 대량의 손놀림과 분석 시간이 필요하며, 샘플 검측 통량은 매우 제한되어 있다;
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동적 범위가 매우 좁음 (± 100 ng/mL) 하류 공정 연구 기간에 대량의 중복 검사를 진행해야 한다;
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샘플과 시약의 소비량이 많은 것은 약물 물질에서 충분한 HCP를 생성하는 것이 매우 어렵기 때문에 특정 낮은 수준의 HCP 검사에 도전입니다.이로 인해 ELISA는 다운스트림 프로세스 개발팀의 증가하는 속도, 전체 및 샘플 소비량 등을 충족시키는 데 한계를 겪고 있습니다.
그래서 현재 점점 더 많은 제약 기업들이 Gyros사의 Gyrolab과 같은 대량 면역 분석 플랫폼과 회전 속도를 높이고 가속화하는 데 도움이 되는 대량 면역 분석 플랫폼으로 전환하고 있습니다.®전자동 면역 분석 플랫폼, Gyrolab 기술은 스트렙토마이신 친화 소포 피의 마이크로 구슬을 이용하여 생물 소화의 포획 시약을 포획하고, 시료와 포획 시약을 결합한 후 형광 표기의 검측 시약 검측을 결합한 시료를 포획한다.친화 기둥에서 플로우 스루(Flow-through) 모드로 진행되는 이 면역 측정은 매우 빠르고 부화 시간이 필요하지 않으며, 기존 ELISA에 비해 분석을 완료하는 데 걸리는 시간과 샘플과 시약량 소비를 크게 줄였다.완전 자동화 제어 실행으로 Gyrolab 테스트는 우수한 반복성을 제공합니다.따라서 Gyrolab 자동화 하이패스 분석 방법은 공정 개발 및 QC 통과 테스트에서 HCP 분석을 효과적으로 지원할 수 있습니다.
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회전 효율을 신속하게 분석한다.
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뛰어난 검사 통량;
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신뢰할 수 있는 데이터 품질과 높은 결과 반복성
총체적으로 이런 방법은 생물분석부문의 효률을 높이고 수공작업시간을 크게 줄일수 있으며 희석착오나 인위적인 조작오차로 인한 재측정요구를 제거하고 분석결과의 생산량, 품질과 중복성을 대폭 높일수 있다.
