1. 샘플 이전: 오염과 손실을 피하다

샘플이 샘플링기에서 처리 용기 (예: 배양접시, 원심관) 로 옮겨질 때 외부 오염과 대상 미생물의 손실을 동시에 방지해야 합니다.

무균 환경 작업:

전이는 생물안전궤내에서 진행해야 하며 조작전에 75% 의 알콜로 표본추출기 표본추출머리, 용기표면 및 조작자의 손을 소독해야 한다.무균 빨대, 이액총 (총머리는 멸균해야 함) 을 사용하여 비무균 구역 (예: 용기 외벽) 에 접촉하지 않도록 한다.

잘못된 제시: 만약 개방환경에서 조작한다면 공기중의 잡균이 견본에 혼입되여 균락수가 지나치게 높으며 특히 저농도견본에 뚜렷한 영향을 미치게 된다.

샘플링액의 충분한 세척:

충돌식, 체구멍식 샘플링기의 경우 샘플링 후 무균 세척액 (예: 0.85% 무균 생리식염수, 인산염 완충액 PBS) 으로 샘플링 헤드 (최소 3회) 를 반복적으로 씻어 부착된 미생물이 완전히 세척액에 들어가도록 해야 한다;소용돌이 진동은 1~2분(회전속도 2000~3000rpm) 미생물이 모인 균단을 깨뜨려 분산도를 높인다.

2. 샘플 희석: 희석 배수의 정확성을 확보한다

샘플에서 미생물 농도가 높을 때 계수할 수 있는 균락수 (30~300CFU/그릇) 를 얻기 위해 계단식으로 희석해야 하며, 희석 과정의 오차는 결과의 정확성에 직접적인 영향을 줄 수 있습니다.

희석액 및 용기: 멸균된 그라데이션 희석관 (예: 10mL 용량의 나선형 뚜껑 시험관) 을 사용하여 무균 희석액 9mL 사전 설치 (오차는 ≤±0.1mL 필요);명확한 희석 배수(10⁻¹, 10⁻² 등)를 표시하여 혼동을 방지합니다.

작업 사양:

액체를 옮길 때 빨대/총머리 끝이 액면 아래 1~2cm에 닿아 기포가 흡입되지 않도록 한다.

고농도에서 저농도로 희석할 때는 단계마다 골고루 섞어(시험관을 10∼15회 손으로 비비는 것) 희석해야 한다.

동일한 희석배수로 2~3개의 평행샘플을 만들어 무작위 오차를 줄인다.

3. 배양과 계수: 배양조건을 통제하고 계수표준을 규범화한다

미생물의 생장은 배양조건의 영향을 매우 많이 받으므로 매개 변수를 엄격히 통일해야 한다.

배양기 선택 및 제조:

대상 미생물 유형에 따라 배지 (예를 들어 세균용 영양 조지, 진균용 감자 포도당 조지 PDA 검출) 를 선택하고, 배지는 멸균이 철저히 (121 ℃ 고압 증기 멸균 20분) 되어야 하며, pH 수치가 요구 사항 (세균 pH7.2~7.4, 진균 pH5.6~5.8) 에 부합하여 영양 결함이나 산성 알칼리 불편으로 미생물이 자라지 못하는 것을 피해야 한다.

배양 조건 제어:

온도: 세균 36±1 ℃, 진균 28±1 ℃, 항온 배양함은 매일 온도를 교정해야 한다(오차 ≤±0.5 ℃).

시간: 세균배양 48±2시간, 진균배양 72±2시간, 배양이 너무 짧아 균락루계를 초래하거나 너무 길어 균락이 중첩되지 않도록 한다.

카운트 규칙:

균락수가 30~300CFU인 평판계수를 선택한다 (30보다 낮으면 결과오차가 크고 300보다 높으면 균락이 중첩되기 쉽다).

동일한 희석도의 평행평판균락수차치가 1배 이상(예: 10⁻희석도평판균락수는 20과 50)이면 재검사해야 한다.

계수 시 대상 미생물과 오염균(균락 형태, 염색경 검사를 통해 보조 판단 가능)을 구분해야 한다.

4. 품질 제어: 전 과정 신뢰성 검증

공백 대조 실험:

각 샘플을 처리할 때, 샘플링 공백 (샘플링기는 공기를 채취하지 않고, 샘플링 헤드만 세척한 후 배양) 과 조작 공백 (무균 세척액을 직접 접종하여 배양) 을 설치하고, 만약 공백 균의 낙수가 > 5CFU이면 오염이 존재한다는 것을 설명하며, 다시 실험해야 한다.

양성 대조 및 회수율 검증:

정기적으로 대장균, 황색포도상구균과 같은 알려진 농도의 표준 균액으로 시뮬레이션하여 회수율을 계산합니다 (회수율은 70~130% 사이여야 하며, 그렇지 않으면 샘플링 효율 또는 처리 프로세스를 검사해야합니다).

계기 교정:

샘플링기는 정기적으로 유량(오차 ≤±5%)을 교정하여 유량 부정확으로 인한 샘플링 부피 편차를 피해야 한다;

이액총, 배양함 등 설비는 매년 계량인증을 거쳐 매개변수가 정확하도록 확보해야 한다.