- 이메일
- 전화
-
주소
상해시 서회구 계림로 402호 76동 성달창의원 316실
【응용】SFC를 사용하여 서홍화 주요 추출물 분리
날짜:2025-09-11읽기 :1
스위스 보치
SFC를 사용하여 서홍화 주요 추출물 분리
SFC 애플리케이션
”
1
소개
서홍화는 비싼 향료이다.비록 서홍화 식물의 꽃은 정교한 자색 색조를 가지고 있지만, 그것의 실 모양의 붉은 기둥은 향료와 천연 염료로 사용할 수 있기 때문에 매우 진귀하다.가을에는 붉은 향료를 만들기 위해 기둥을 수작업으로 따서 분리한다.1파운드(0.45kg)의 서홍화를 생산하려면 7만 송이의 꽃이 필요하다.
헤모글로빈, 헤모글로빈의 글리코신 파생물과 마이크로 헤모글로빈은 헤모글로빈의 색깔과 맛의 화합물이다.Safranal，일종의 테르펜 알데히드도 존재한다.이밖에 서홍화에는 또 일부 화합물이 약리활성을 갖고있는데 례를 들면 서홍화소 파생물과 류황케톤이다.예를 들어, 세로토카로틴은 항종양의 대체 약물로 제안되었으며, 장래에 일부 암을 단독으로 또는 다른 화합물과 연합하여 치료할 수 있을 것이다.
그래서 많은 출판물이 서홍화를 추출하고 분석하는 문헌을 처리하고 있다.일반적으로 역액상 크로마토그래프(RP-LC)로 분리됩니다.대표적인 용매는 물/아크릴 또는 물/메탄올 혼합물이다.평소와 마찬가지로 고정상은 C18이다.초기 분리 조건은 높은 수분 함유량이며, 경계법을 사용하여 유기용제 함량을 시간에 따라 현저하게 증가시켜 비극성 화합물을 씻어낸다.메틸산은 항상 유동상에 첨가된다.
초임계 유체 크로마토그래프(SFC)는 초임계 이산화탄소(CO)를 사용하는 것이다2) 는 흐름상의 크로마토그래피 방법으로 사용됩니다.초임계 이산화탄소는높은 확산 계수와 낮은 점도화합물을 분리하고 분석하는 우수한 용제이다.SFC는 다른 종류의 크로마토그래피와 비교하여 다음과 같은 몇 가지 이점을 제공합니다.분석 시간 단축, 용매 사용량 감소 및 다양한 선택성. SFC는 RP-LC에 비해 직교 기술입니다.
이 응용 프로그램은 SFC와 질량 스펙트럼을 결합하여 서홍색 나사 주요 성분을 분리하는 방법을 소개합니다.분석물의 이온화는 전자스프레이 이온화(ESI)를 통해 이뤄진다.흐름상 때문에 CO 사용2 메탄올과 함께 미산성을 띠기 때문에 첨가제를 사용할 필요가 없다.
2
장비
Sepiatec SFC 계기
Advion CMS 감지기
핵관 NH2 5 μm 250 x 4 mm
3
시약과 재료
이산화탄소(99.9%)
메탄올 (≥99%)
서홍화선
4
실험 프로세스
샘플 제조:
1000mg의 서홍화는 10mL의 뜨거운 메탄올로 5회 추출한다.최종 용액은 여과를 거쳐 천연 화합물의 분리에 쓰인다.
실험 조건:
이동상 |
A = 이산화탄소;B = 메탄올 |
위상 조건 이동 |
0 - 1분: 14% B |
1-18분 |
14 - 18% B |
18-40분 |
18 - 50% B |
40-44분 |
50% B |
검사 |
UV 440 nm MS ESI (+/-) |
86/14%의 초임계 이산화탄소와 메탄올 조건에서 Nucleodur NH에 대해 7mL/min의 유속으로25 μm 250 × 4 mm는 5min의 균형을 이룬다.자동 샘플링기를 사용하여 샘플링(V = 100 uL)하고 실행을 시작합니다 (실행 시간 = 44 min).배압 조절기는 150bar로 설정하고 기둥상자는 40도까지 가열한다.
5
실험 결과 및 토론
▲ 그림 1. 서홍화 추출물 순화 후 자외선 크로마토그래프(자외선 파장 440nm)
메탄올로 서홍화의 주성분을 추출했다.메탄올은 극성 용매이기 때문에 일부 극성 화합물을 용해할 수 있다.그림 1440nm 지점의 자외선 크로마토그래프입니다.처음 18 분 동안 흐름 (86 - 82% CO) 때문에2)의 비극적인 특성으로 자외선 활성 화합물이 씻겨지지 않는다.유동상의 극성이 경도를 통해 증가하면 몇 가지 극성 화합물이 씻겨진다.자외선 검사는 성분에 대한 감정을 허용하지 않기 때문에 SFC는 MS와 결합하여 연속적으로 감정할 수 있다.그림 2자외선과 질량 스펙트럼입니다.S 신호는 (b) mass 999–999.5(ESI+); (c) mass 836.9 – 837.4 (ESI+); (d) mass 674.8 – 675.3 (ESI+); (e) mass 975.5 – 976 (ESI-); (f) mass 813.4 – 813.9 (ESI-); (g) mass 651.4 – 651.9 (ESI-) and (h) mass 341.2 – 341.7 (ESI-).
▲ 图2. (a) 사프랑 추출물의 정화의 UV 및 (b - h) MS 크로마토그램; (b) mass 999 – 999.5 (ESI+); (c) mass 836.9 – 837.4 (ESI+); (d) mass 674.8 – 675.3 (ESI+); (e) mass 975.5 – 976 (ESI-); (f) mass 813.4 – 813.9 (ESI-); (g) mass 651.4 – 651.9 (ESI-) and (h) mass 341.2 – 341.7 (ESI-)
표 1위그림 2질량 스펙트럼 감정을 거친 주요 화합물.질량 스펙트럼 분석에 ESI 이온화 분자를 사용하십시오. 이것은 상압에서 온화한 이온화 방법입니다.이온화는 양전압(ESI+) 또는 음전압(ESI-)에서 수행할 수 있습니다.양이온 모드에서는 일반적으로 나트륨 가합물([M+Na]+) 또는 양성자 가합물([M+H]+)이 형성됩니다.음이온 모드에서 ([M-H]-) 이온은 일반적으로 양성자를 잃어 형성됩니다.샘플과 그 성질에 따라 여러 종류의 대전체 산물을 형성할 수도 있다.
헤모글로빈과 몇 가지 설탕 (포도당, 용담이당, 삼감당, 신파당신) 이 결합하여 헤모글로빈을 형성한다.헤모글로빈과 설탕 분자의 공가 결합성이 강하게 증가하여 헤모글로빈이 친수성을 가지게 되는데, 이것이 바로 AN 세척액에서 검출된 주요 성분이 비교적 늦은 이유이다.에서표 1에서 알수 있다싶이 서홍화사선에는 서홍화소와 룡담당과 포도당이 결합된 상황이 존재한다.
복합 크로신 다이옥신 에스테르는 크로신과 두 개의 용담당 분자로 구성되어 있으며, 이 두 분자는 2개의 d-포도당 분자로 구축되어 있다.에서그림 2(b)중, 화합물은 양이온의 질량이 999-999.5로 감정되었다.이 가합물은 나트륨(질량 23g/mol)과 시료 분자(질량 976.4g/mol)로 구성됐다.해당하는 스펙트럼그림 3 (a)와 같습니다.음전리 전압에서도 카테킨 디글리콜(그림 2(e)질량 975.5 - 976), 다음과 같은 질량 스펙트럼그림 3(b)와 같습니다.
ESI+ 모드(그림 2(c))및 ESI- 모드(그림 2(f)) 에서 헤모글로빈 뿌리 바이오메드 글리세린은 각각 ([M+Na] + 품질 836.9 ~ 837.4), ([M-h] - 품질 813.4 ~ 813.9) 이다.대응하는 질량 스펙트럼 그림그림 3(c) 및 (d)와 같습니다.복방 헤모글로빈-용담생물기 당기에스테르는 헤모글로빈, 용담당과 d-포도당 분자로 구성되어 있다.
ESI+ 모드(그림 2(d))및 ESI- 모드(그림 2(g)) 에서 헤모글로빈 gentiobiosyl 에스테르는 각각 ([M + Na] + 질량 674.8 - 675.3) 과 ([M - H] - 질량 651.4 - 651.9) 이다.대응하는 질량 스펙트럼은 다음과 같다.그림 3(e) 및 (f)와 같습니다.Crocetin 메틸은 ESI-모드에서만 인식됩니다(그림 2(h)품질 341.2 - 341.7 및그림 3(g)）。
ESI 과정에서 샘플 분자도 파편화되었는데, 이것이 바로 그림 2에서 일부 서홍화가 여러 질량에 분배된 이유이다.예를 들어, 구아바노이드 디티오네이트는 가합물 ([M + Na] +) 또는 ([M - H]-) 로 이온화할 수 있지만 더 깨질 수도 있습니다.음이온 과정에서 포도당 기단을 제거하면 세그먼트의 질이 헤모글로빈 뿌리 바이오매스와 헤모글로빈 뿌리 바이오매스와 비슷하다.
▲ 표1. 질량분석법이 감정한 서홍색 화사선의 주요 성분의 구조와 분자량 (그림2).
화합물 1은 ESI+와 ESI- 두 가지 모드에서 모두 질량 정방향 분류를 했고, 화합물 2는 ESI+ 모드에서만 질량 정방향 분류를 했다.화합물 4는 ESI-모드에서만 채집할 수 있다.그러나 화합물 No.3의 추출 질량 스펙트럼은 화합물 1 및 2와 비슷한 구조의 조각이 존재하기 때문에 복잡해지며 품질 지향적 분류 과정을 방해합니다.이 문제를 해결하기 위해 별도의 시간 창구를 채택했다.
▲그림 3. 헤모글로빈 디글리콜 (a) ESI+와 (b) ESI-, 헤모글로빈 뿌리 바이오시밀러 (c) ESI+와 (d) ESI-, 헤모글로빈 뿌리 바이오시밀러 (a) ESI+와 (b) ESI-와 (g) 헤모글로빈 메틸 ESI-의 스펙트럼
6
실험 결론
천연 산물을 분석할 때, 미지의 산물은 종종 추출 과정에서 용해된다.이런 미지의 성분을 식별하기 위해서는 질량 스펙트럼 분석이 필요하다.본 연구는 메탄올을 사용하여 헤모글로빈 라인의 주요 성분을 추출하고 SFC-UV/MS를 사용하여 분석합니다.질량 분광법으로 그 주요 성분에 대해 연속 감정을 진행하였다.