2세대 서열 분석

2세대 서열 분석소개:

표관유전학 (epigenetics) 은 현재 분자생물학 연구의 이슈 중의 하나이며, DNA 메틸화 서열 분석은 표관유전학의 중요한 내용이며, 게놈 DNA의 주요 표관유전 수식 형식 중의 하나이다.DNA 메틸화는 DNA 메틸전이효소(DNMTs)의 촉매로 메틸기단을 시토신 염기에 옮기는 수식 방식이다.이는 주로 뉴클레오티드 CpG 섬이 풍부한 지역에서 발생한다.정상적인 상황에서 CpG 섬은 비메틸화 형태(활성 형태)로 존재하며, DNA 메틸화는 유전자 발현 침묵을 초래할 수 있다.DNMTs의 활성 이상은 질병과 밀접한 관련이 있습니다.정상적인 세포 기능 유지, 게놈 유전 흔적 전달, 배아 발육 및 인간 종양 발생에 매우 중요한 역할을 한다.

상해익과 생물은 아황산수소염 (bisulfite) 처리를 통해 다중PCR로 목적부분을 확대하여 barcode와 서렬측정통용접선을 첨가하여 Illumina X10에2세대 서열 분석플랫폼은 PCR 산물에 대해 높은 통량 서열 분석을 진행하고, 생물정보학 방법을 이용하여 목표 구간 내의 메틸화 위치의 메틸화 상태를 정확하게 정량 계산하여 목표 구역 검측을 완료하는 동시에 연구 비용을 대폭 낮춘다.

Hi-MethylSeq는 아황산염 변환, 표적 증폭자 고통량 시퀀싱 기술을 결합하여 다구간, 다위점의 메틸화 정밀 정량 분석을 실현할 수 있다.이 방법은 관심 있는 목적 단편의 메틸화 연구에 적용되며, 큰 샘플에서 전체 게놈 메틸화 연구에서 고른 양성 위치를 더욱 확인한다.

중아황산염 처리는 DNA 메틸화 서열 분석에서 게놈 DNA 처리의 금 표준으로 DNA의 손상을 초래할 수 있는 화학 과정으로 100% 의 전환 효율과 DNA의 완전성을 동시에 실현하기 어려우며 양자는 일정한 균형을 이루어야 한다.Hi-MethylSeq 목표 영역 외에 3단의 비CpG 섬 서열을 내부 대조로 선택하여 샘플의 전환율을 정확하게 평가한다.