SILAC 대사 마커 정량 실험 서비스

SILAC 대사 마커 정량 실험 서비스

실험기술 소개: SIL AC의 기본원리는 세포배지의 상응한 아미노산을 각각 천연동위원소(경량) 또는 안정동위원소(중형) 표기의 필수아미노산으로 대체하는것인데 세포가 5~6배증주기를 거친후 안정동위원소 표기의 아미노산*을 세포가 새로 합성한 단백질에 섞어 기존의 아미노산을 대체하였다.서로 다른 표기 세포의 분해 단백질은 세포 수나 단백질량 등 비율에 따라 혼합하여 분리, 순화 후 질량 스펙트럼 감정을 진행하고, 1급 질량 스펙트럼 도표의 두 동위원소형 펩타이드 구간의 면적 비교에 따라 상대적으로 정량을 진행한다.체내 대사 표기법에 속한다.

실험 작업 프로세스:

1. 단백질 추출 및 샘플 제조

2. 태그 효율 테스트

3. 견본 혼합대

4. SDS-PAGE 등급

5. 효소분해

6. 질량 스펙트럼 감정

7. 소프트웨어 분석

8. 정성 정량 단백질 그룹 결과

9. 생물정보학 데이터 발굴과 통계 분석

실험 고려 사항:

고객이 제공하는 기능:

1. 단백질 추출물: 농도>1μg/ul, 단백질총량>300μg.

2. 세포: 세포계수를 통해 2x106개 이상의 세포를 EP관에 취하고 생리식염수 또는 단백질보호제 05ml를 첨가하여 혼합한후 랭장고 (-80°C, 반복적으로 얼지 않음) 에 보관한다.

제공 기준:

1. 단백질 감식과 SIL AC 정량 분석 결과;

2. 고객 지정단백질에 대응하는 질량 스펙트럼 피크맵;

3. SIL AC 실험의 완전한 실험 절차, 사용 기기, 소프트웨어 검색 파라미터 등.

기타:

1. SILAC는 체내표기기술로서 동위원소표기를 안정시키는 아미노산은 천연아미노산과 화학성질이 기본적으로 같으며 표기된 세포와 미표기세포는 생물학행위에서 거의 차이가 없으며 표기효률이 100% 에 달할수 있다.

2. 질량 스펙트럼 정량을 채택하여 정량 결과가 정확하고 로트 변이가 작으며 중복성이 좋다.

3. 체내 대사 표기는 SDS-PAGE 또는 크로마토그래피 분리 기술과 결합하여 소수성 단백질과 편알칼리성 단백질과 호환되며 단백질 성질의 제한을 받지 않는다.

4. 여러 샘플을 혼합한 후 분리, 효소 절단 및 감정을 동시에 진행하여 후속 실험이 샘플에 미치는 영향이 일치하여 실험 조작과 기기 설비에 미치는 영향을 감소시켰다.

5. 이 기술은 체내 표기에 속하기 때문에 표기 효과가 안정적이고 그 표기 효율은 분해액의 영향을 받지 않으며 전 세포 단백질의 분석뿐만 아니라 막 단백질의 감정과 정량에도 적합하다.

6. 화학적 표기에 비해 SIL AC 방법의 단백질 수요량은 현저히 감소하며, 보통 샘플당 수십 마이크로그램의 단백질량만 필요하다.

7. 생체 표기, 샘플의 실제 상태에 더 가깝다.

8. 생체배양에만 적용되는 세포는 생물의학연구에서 흔히 사용하는 조직견본, 체액견본 등에 대해 분석할수 없으며 동물모형에 대한 표기원가가 너무 커서 실현할수 없다.SIL AC는 체외 표기 기술에 비해 체내 표기에 속하며 다음과 같은 기술적 우위를 가지고 있다

1. 수백~수천 종의 단백질을 동시에 감정하고 정량할 수 있는 높은 통량;

2、정량정*&확성, 샘플 제조에 따라 발생하는 실험 차이를 낮춘다;

3. 선형 정량 범위가 넓다;

4. 민감도가 더 높고 단백질 수요량이 현저히 감소한다;

5. 표기는 체내 표기 기술을 채택하여 샘플의 실제 상태에 더욱 가깝다.

SILAC 기술 서비스 내용

1. 세포 동위원소 표기;

3. SDS-PAGE 분리;

4. 인슐린 효소 절단 후 액상 분리와 질량 스펙트럼 분석;

5. 데이터베이스 검색 및 단백질 정량 분석;

6. 차이 단백질의 생물정보학 분석;

7. 실험보고서 제출.

실험 서비스 보고서 내용

1. 단백정 감정과 SIL AC 정량 분석 결과;

2、고객지ding단백질에 대응하는 질량 스펙트럼 피크맵;

3. SIL AC 실험의 완전한 실험 절차, 사용 기기, 소프트웨어 검색 파라미터 등.

기술 서비스 이점

1. 민감도가 높고 검사제한이 낮아 저풍도단백질을 검출할수 있다.

2. 분리능력이 강하고 분석범위가 넓으며 iITRAQ는 고분자량의 단백질, 산성단백질과 알칼리성단백질, 막단백질과 불용성단백질을 포함한 모든 류형의 단백질을 분리감정할수 있다.

3. 높은 통량: 동시에 8개의 샘플을 분석하여 실험 통량을 높였으며, 동시에 여러 시점 또는 서로 다른 처리의 단백질을 분석할 수 있다;

4. 결과는 신뢰할 수 있다: 정성과 정량 분석 결과는 더욱 신뢰할 수 있다;

5. 자동화 정도가 높다: 액상과 질량 스펙트럼 연결, 자동화 조작, 분석 속도가 빠르고 분리 효과가 좋다.

실험 대행 서비스: