쥐 멸망 유도인자(AIF) ELISA 키트

쥐 멸망 유도인자(AIF) ELISA 검사 키트

검측 원리 :

본 시약함은 이중항체 협심효소 연면역 흡착시험( ELISA）。미리 패키지 피드 쥐 멸망 유도인자(AIF)지항체(고상항체)의 미공효소 표지판에 쥐 멸망 유도인자(AIF) 교정품과 테스트 대기 샘플을 다시 한 그루 첨가하다 HRP 태그 저항 쥐 멸망 유도인자(AIF) (효소표항체), 온육과 충분한 세척을 거쳐 결합되지 않은 성분을 제거하고 미공판 고상표면에 고상항체를 형성한다 - 항원 - 효소 표적 항체의 협심 복합체.베이스 A와 B를 더하면 베이스는 HRP의 촉매로 파란색 산물을 생성하고 종료액(2M 황산) 작용으로 최종적으로 노란색으로 전환되며 효소표시기 450nm 파장에서 흡광도(OD값), 흡광도(OD값)와 측정 대기 샘플에서 쥐 멸망 유도인자(AIF)의 농도는 상관관계가 있습니다.교정품 곡선을 맞추어 견본에 계산할 수 있다 다람쥐(AIF)의 농도.

필요한 기자재와 시약

1、 효소계 (파장 450nm 필터)

2、37°C 항온상자(세포용 CO2 배양상자 권장하지 않음)

3、 자동 세척기 또는 다중 변액기 /5ml 스포이드(수공 세판용)

4、 무균의 EP관 및 일회용 헤드

5、 정밀한 외길 (0.5-10μL, 5-50μL, 20-200μL, 200-1000μL) 및 다중 채널 변액기(변액기 사용 전 교정 필요).

6、흡수지 및 샘플링 슬롯

7、이온수 또는 증류수

시약함 구성:

표본 수집 :

1、혈액을 수집하는 시험관은 일회용 무열원, 무내독소 시험관이어야 한다.

2、 혈장 항응고제 권장 사용 EDTA 。용혈, 고지혈표본 사용 피하기.

3、표본은 맑고 투명해야 하며 부유물은 원심에서 제거해야 한다.

4、 표본 수집 후 제때에 검측하지 않으면, 1회 사용량에 따라 분장하여 냉동 보관 -20 ℃, -70 ℃ 냉장고 안, 반복적으로 얼지 않도록 3~6월 안에 검사한다.

5、 샘플에서 검사물 농도가 표준품 최고치보다 높으면 실제 상황에 따라 적당한 배수로 희석하다. (희석 배수를 결정하기 위해 사전 실험을 하는 것이 좋습니다.

저장 조건:

샘플 수집 및 보존：

1、 혈청 전혈 샘플 실온 배치 2 시간 또는 2-8 ° C에서 밤을 보내십시오.1000 × g 원심분리 20분, 제거.즉시 검사하거나 1회 사용량에 따라 -20 ° C 또는 -80 ° C에 냉동 보관할 수 있습니다.

2、 혈장 항응고제 권장 사용 EDTA-Na2/K2，시료 채취 후 30분 이내에 2-8 °C, 1000 × g에서 15분간 원심을 분리하여 제거한다.즉시 검사하거나 1회 사용량에 따라 -20°C 또는 -80°C에 냉동 보관할 수 있습니다. 기타 항응고제 사용 및 선택은 샘플 제조 지침을 확인하십시오.

3、조직 샘플 조직 샘플은 일반적으로 조직 균일 펄프를 만들며 처리 방법은 다음과 같습니다.
3.1、 목표 조직을 얼음 위에 놓고 미리 차가운 PBS 완충액(0.01M, pH=7.4)은 남아 있는 혈액을 씻어 제거하고 무게를 달아 준비한다.

3.2、 얼음 위에서 분해액으로 조직 균일장을 연마하다.분해액을 넣는 부피는 조직의 무게에 따라 달라지는데, 일반적으로 1g의 조직 파편은 9ml의 분해액을 사용한다.또한 1mM PMSF와 같은 프로테아제 억제제를 분해액에 첨가하는 것이 좋습니다.

3.3、 초음파 파쇄 또는 반복 동결 재사용 가능 (초음파 파쇄 과정 중, 얼음욕으로 온도를 내려야 한다. 반복 융해법은 2회 반복할 수 있다.)

3.4、 제조한 균장액을 5000 × g 원심분리 5분, 남겨 두면 검사할 수 있다.또는 1회 사용량에 따라 -20 ° C 또는 -80 ° C에 냉동 보관합니다.

3.5、 실험 수요에 근거하여, 균장 샘플을 조직하면 먼저 총 단백질 농도를 측정할 수 있다. 데이터 분석을 용이하게 하기 위해 BCA 법을 권장합니다.일반적으로 ELISA 검사를 위해 총 단백질 농도를 1-3mg/ml로 조정합니다.간, 신장, 췌장과 같은 일부 조직 샘플은 높은 농도의 내원성 과산소 효소를 함유하고 있기 때문에 샘플의 농도가 높은 경우 발색 바탕과 반응하여 가짜 양성이 나타납니다.1% H2O2 불활성화 15min을 사용하여 다시 테스트할 수 있습니다.

참고: 분해액 상용 PBS 완충액 또는 중간 강도 RIPA 분해액을 사용합니다.사용 시 PH 값은 PH7.3으로 조정해야 하며 NP-40, Triton X-100 및 DTT가 포함된 성분을 사용하지 않으면 시약함 작업이 크게 억제됩니다.50mM Tris + 0.9% NaCL + 0.1% SDS, PH 7.3 사용을 권장하며 자체 제작 또는 구매 문의가 가능합니다.

4、 세포배양 상청, 상청액 수집, 2-8 °C, 2500rpm 원심분리 5min, 맑은 세포를 수집하여 배양한다.즉시 검사에 사용하거나 한 번의 사용량에 따라 -80 ° C의 냉동 저장 예비에 설치합니다.

5、세포분해액

5.1、 부유 세포의 수집 및 분해: 2-8 °C, 2500rpm 원심 5min, 세포 수집.다시 미리 차가운 PBS를 넣어 가볍게 섞어 세척하고 2-8 °C, 2500rpm 원심분리 5min으로 세포를 수집한다.0.5-1ml의 세포분해액 및 적당량의 단백질효소억제제 (예를 들면 PMSF, 작업농도 1mmol/L) 를 첨가하여 얼음에 놓고 30min-1h를 분해하거나 초음파에 배합하여 파쇄한다.

5.2、 밀착세포의 수집 및 분해: 상청액을 흡입하고 예냉을 첨가한다 PBS는 세 번 씻는다.0.5-1ml 세포분해액 및 적당량의 프로테아제 억제제 (예: PMSF, 작동농도 1mmol/L) 를 첨가하여 세포스크래치로 밀착세포를 가볍게 긁어낸다.세포 현액은 원심관에 들어가 얼음 위에 놓고 30min-1h를 분해하거나 초음파와 함께 깨진다.

5.3、 세포가 분해되는 과정 중에 총머리로 원심관을 불거나 간단히 흔들어 단백질을 충분히 분해시킬 수 있다 , 끈적임이 나타나는 것은 DNA이며, 초음파를 사용하여 DNA를 파쇄할 수 있다.(또는 초음파 3-5mm 프로브, 출력 150-300W, 빙상 초음파 처리 시료, 1~2초 작동, 30초 정지, 3~5개 순환.)

5.4、 분해 또는 초음파 파쇄 완료, 2-8 ° C, 10000rpm 원심 10min, 상청 EP 튜브로 이동하여 즉시 검사에 사용하거나 1회 사용량에 따라 -80 ° C 냉동 저장에 나누어 준비합니다.

쥐 멸망 유도인자(AIF) ELISA 검사 키트

참고:주의 사항은 조직 견본과 같다.

참고: 이상은 참조용입니다!이상의 정보가 귀하가 적합한 선택을 하는 데 도움이 되기를 바랍니다!