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제브라피시 아세틸콜린(ACH) elisa 검사 키트 OD값의 샘플 전처리 방법 및 시약함 수령 후 주의사항, 참고:
1. 견본 전 처리 방법
샘플 유형에 따라 처리 방식이 다르므로 시약함 설명서에 따라 엄격히 조작해야 한다.다음은 일반적인 샘플 유형의 처리 요점입니다.
1. 혈청/혈장
- 채집: 검사지표가 없는 EDTA 또는 간소항응고관을 사용하여 혈액을 수집하고 용혈을 피한다.
- 원심분리: 2000-3000×g, 4 ℃ 원심분리 10-15분, 혈청/혈장 분리.
- 보존: 분장 후 -80 ℃ 동존 (반복적인 동융을 피함), 단기적으로 -20 ℃ 보존 (가능한 한 빨리 검사해야 함).
2. 골고루 풀을 조직한다
- 재료: 신선한 조직, 생리식염수를 씻어 물기를 말린다.
- 균장: 무게(g): 부피(mL) = 1:9-10에 예냉 PBS 또는 분해액(프로테아제 억제제 포함)을 넣고 균장 후 30분 동안 얼음에 둔다.
- 원심분리: 12000×g, 4 ℃ 원심분리 10-15분, 제거.
- 보존: 동혈청 / 혈장.
3. 세포분해액
- 세포 수집: PBS로 세포를 2-3회 세척하고 원심분리 상청을 버린다.
- 분해: RIPA 분해액(프로테아제 억제제 포함)을 넣고 초음파 파쇄 또는 동결 분해를 반복한다.
- 원심분리: 12000×g, 4 ℃ 원심분리 20분, 제거.
- 저장: 위와 같습니다.
4. 분뇨/기타 생물 샘플
- 예처리: 분뇨는 골고루 풀을 먹인 후 용제(예를 들어 클로로포름-메탄올 혼합액)를 첨가하여 지방류를 추출하고, 원심 분리 후 유기체를 취하여 건조한 후 다시 용해한다.
- 보존: 산화를 피하고 분장 후 -80 ℃ 보존을 권장합니다.
주요 고려 사항:
- 지질 오염을 피한다(예를 들어 클로로포름 추출을 사용할 때 chedi를 사용하여 용제 잔류를 제거해야 한다).
- 샘플에는 내원성에 결합단백질이 함유되어 있을 수 있으므로 충분히 분해되어야 한다.
- 반복적으로 얼지 않도록 하십시오.
2. 시약함을 받은 후의 처리
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키트 무결성 확인:
- 시약, 교정품, 품질제어품, 설명서 등이 완비되어 있는지 확인하다.
- 시약병이 잘 밀봉되어 있는지, 누출이나 층화 현상이 없는지 검사하다.
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저장 기준:
- 미개봉 시약함: 설명서의 요구에 따라 보관 (일반적으로 2-8 ℃ 냉장).
- 이미 개봉된 시약: 단기적인 사용은 2-8 ℃ 에 보관할 수 있고, 장기적으로는 -20 ℃ 에 보관해야 한다 (예를 들어 효소 표지판은 알루미늄 포일 봉지를 밀봉하여 빛을 피해야 한다).
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배포 및 사용:
- 교정품, 품질통제품은 분장한후 랭동할것을 건의하며 반복적으로 랭동되지 않도록 해야 한다.
- 시약은 사용하기 전에 실온(15~30분)으로 환온하여 온도가 급변하여 반응에 영향을 주지 않도록 해야 한다.
-
교정 및 품질 관리:
- 표준 곡선을 제작할 때는 농도 경도에 따라 교정품을 엄격히 희석해야 한다.
- 품질 관리품 결과는 허용 범위 내에 있어야 하며, 그렇지 않으면 조작이나 시약 문제를 조사해야 한다.
3. 일반적인 문제 및 솔루션
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샘플 처리 후 OD값이 낮거나 높음:
- 샘플의 분해 여부를 검사합니다 (예를 들어 잘못 보존하면 산화가 발생함).
- 샘플의 희석 배수가 적합한지 확인합니다 (선형 범위를 초과하면 조정해야 함).
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색상 예외 (예: 배경이 높고 색상이 고르지 않음):
- 종지액을 과다하게 넣거나 부족한지 확인하세요.
- 부화 시간, 온도가 요구에 부합하는지 확인하다.
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보정 커브가 좋지 않습니다.
- 표준품의 복용이 정확한지, 오염이 있는지 검사하다.
- 효소 측정기의 파장 설정(일반적으로 450nm±10nm)을 확인한다.
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시약 실효:
- 만약 시약함을 잘못 보존하면 (예를 들면 반복적으로 얼거나 고온) 시약이 효력을 상실할수 있으므로 공급업체에 련락하여 교체하는것을 건의한다.
4. 기타 건의
- 실험 전 사전 실험은 샘플 처리 단계를 최적화합니다 (예를 들어 다른 조직이 분해 조건을 조정해야 할 수도 있음).
- 교차 오염을 엄격히 피한다 (전용 이액기 총머리, 판자 사용).
- 결과가 이상하면 테스트를 다시 하거나 키트 공급업체에 기술 지원을 문의하는 것이 좋습니다.
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