쥐 육두구산 ELISA 검사 키트

쥐 육두구산 ELISA 검사 키트

사용 설명서

검측 원리

시약함은 이중항체 1단계 협심법 효소연면역흡착시험(ELISA).미리 싸다에肉豆蔻酸（Myristicacid는）항체의 가방은 미세한 구멍에 표본, 표준품,HRP 표시된 검사 항체는 온육을 거쳐 세탁된다.바탕물인 TMB로 발색하면 TMB는 과산화물 효소의 촉매로 파란색으로 바뀌고 산의 작용으로 최종 노란색으로 바뀐다.색상의 농도와 샘플의 농도肉豆蔻酸（Myristicacid는）드리다상관 관계.효소 측정기로450nm 파장에서 흡광도(OD값)를 측정해 시료 농도를 계산한다.

샘플 수집, 처리 및 보존 방법

1.혈청: 열원과 내독소가 함유되지 않은 시험관을 사용하여 조작과정에 그 어떤 세포자극도 피면하고 혈액을 수집한후 3000전리심 10분간 혈청과 적혈구를 신속하고 조심스럽게 분리한다.

2.혈장: EDTA, 구연산염 또는 간소항응고.3000원 원심분리 30분에 찾아.

3. 세포상청액: 3000 원심분리 10분간 입자와 중합물을 제거한다.

4. 골고루 섞기: 조직에 적당량의 생리식염수를 넣고 으깬다.3000원 원심분리 10분 만에 청산.

5.보존: 만약 샘플을 수집한 후 제때에 검측하지 않으면, 1회 용량에 따라 나누어 포장하고, -20 ℃ 에 얼려 보관하며, 반복적으로 얼지 않도록 하고, 실온에서 해동하며, 샘플이 균일하게 충분해 얼도록 확보한다.

자체 물품

1. 효소 측정기 (450nm)

2. 고정밀 샘플링 머신 및 총 헤드:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37 ℃ 항온상자

운영 고려 사항

1. 시약함은2-8 ℃, 전실온을 사용하여 20분 동안 균형을 잡는다.냉장고에서 꺼낸 농축 세척액에는 결정이 있을 수 있는데, 이는 정상적인 현상으로 수욕 가열로 결정을 녹인 후 사용한다.

2. 실험에서 사용하지 않는 판자는 즉시 자봉주머니에 넣고 밀봉(저온건조)하여 보존해야 한다.

3. 농도는0의 S0호 표준품은 음성 대조 또는 공백으로 볼 수 있다;설명서에 따라 조작할 때 견본은 이미 5배 희석되였고 최종결과에 5를 곱해야 견본의 실제농도이다.

4. 엄격히 설명서에 명시된 시간, 가액량 및 순서에 따라 온육 조작을 진행한다.

5. 모든 액체를 조합하여 사용하기 전에 충분히 흔들어라.

시약함 구성

참고: 표준품(S0-S5) 농도 순서대로:0、50、100、200、400、800 pg/mL의

시약 준비

20×세척 완충액의 희석: 증류수는 1:20으로 희석한다. 즉 1인분의 20×세척 완충액에 19분의 증류수를 더한다.

세판 방법

1. 수공 세척판: 구멍 안의 액체를 다 털어내고, 구멍마다 세척액을 가득 채우고, 가만히 둔다1min 후 구멍 안의 액체를 털어내고 흡수지에 말린 후 이렇게 판을 5회 씻는다.

2. 자동 세판기: 구멍마다 세액 주입350μL，1min 담그고 널빤지를 5회 씻는다.

작업 단계

1. 실온에서 균형을 맞추다20min 후의 알루미늄 포일 주머니에서 필요한 판자를 꺼내고, 나머지 판자는 자봉 주머니로 밀봉하여 4 ℃ 로 되돌려 놓는다.

2. 표준품공과 견본공을 설치하고 표준품공에 각각 다른 농도의 표준품을 첨가한다50μL;

3. 샘플 구멍에 테스트 대기 샘플을 추가합니다.10μL，희석액 40μL 더 넣기;빈 구멍을 넣지 않습니다.

4. 빈 구멍을 제외하고 표준 제품 구멍과 샘플 구멍에 매운 뿌리 과산화물 효소(HRP) 표시된 검사항체 100μL, 봉판막으로 반응구멍을 막고 37℃ 수욕솥 또는 항온상자 온육 60min.

5. 액체를 버리고, 흡수지를 두드려 말리고, 구멍마다 세척액을 가득 채워 고정시킨다.1min，세척액을 뿌리고 흡수지를 두드려 말리며 이렇게 5회 반복한다 (세판기 세척판도 사용 가능).

6. 구멍마다 베이스 추가A, B 각 50 μL, 37 ℃ 피광 부화 15min.

7. 구멍마다 종료액 넣기50 μL, 15min 내에서 450nm 파장에서 구멍별 OD값을 측정한다.

결과 판단

표준 커브 그리기:Excel 워크시트에서 표준품 농도를 가로 좌표로 하고 OD값에 대응하여 세로 좌표로 하여 표준품 선형 회귀 곡선을 그리고 곡선 방정식에 따라 각 샘플 농도 값을 계산한다.
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