iTRAQ TMT(동위원소 표식 정량)

동위원소 태그 정량:

iTRAQ (isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation) &TMT (Tandem Mass Tags)각각 AB Sciex사와 Thermo사가 개발한 폴리펩타이드 체외 표기 정량 기술은 다양한 동위원소 시약을 이용하여 단백질 폴리펩타이드 N 말단 또는 라이신 사이드체인 기단을 표기하고, 서로 다른 분자량의 시약은 서로 다른 출처의 샘플을 표기하여 서로 다른 샘플 간 단백질 그룹의 비교를 실현한다.

iTRAQ 실험 단계:

1.샘플 준비: 측정 대기 샘플을 정량하여 샘플 단백질 농도를 계산한다;

2.단백질 환원 알킬화 및 효소 분해: 각 샘플은 각각 100μg을 취하여 iTRAQ 시약함의 요구에 따라 처리하고, 시퀀스급 인슐린 용액 효소를 사용하여 분해한 후, 초여과관 원심 수집 효소 분해 펩타이드 구간;

3.iTRAQ 마커: ITRAQ 시약을 실온으로 균형잡고, 150 μL 이소프로필알코올로 용해하고, 효소 분해 펩타이드 구간을 취하여 iTRAQ 시약을 첨가한 후 실온 반응 2h, 물 종료 반응 첨가, 동일량 혼합 다른 그룹 샘플, 진공 냉동 건조 샘플:.

4. LC-MS-MS 분석: Thermo의 Q-Exactive Orbitrap을 사용하여 직렬 질량 스펙트럼 감정.

5. 데이터 처리 및 생신 분석

결과 표시:

전국분석 클러스터 히트맵

*0의 단백질 수 통계 분석

실험 주기 및 제공 기준

1. 실험 주기: 4-6주

2. 제공 기준: 단백질 정량 결과, 감정 결과, 질량 스펙트럼 원시 데이터, 생신 분석 결과 (G0 분석.KEGG 분석 등)

확인 정보

1. 견본의 종속

2. 샘플의 유형(조직 or 세포 or 혈액)

3. 견본의 수량 및 그룹

4. 분석 요구 사항

참고문헌

XuX, Zhu Q, Zhang R, et al. ITRAQ-Based Proteomics Analysis of Acute Lung Injury Induced by Oleic Acid in [1]

마우스 [J].세포 생리학과 생화학, 2017: 1949-1964.

QuZ, GaoF, LiL, et al. Label-Free Quatitative Proteomic Analysis of Differentially Expressed Membrane Proteins [2]

고발병성 돼지 생식 및 호흡 증후군에 감염된 폐 Alveolar Macrophages

바이러스와 그 감소된 strain [J].PROTEOMICS, 2017 : 1700101.

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