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대련 고신구 과학창조빌딩 711-721
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대련 고신구 과학창조빌딩 711-721
제품의 성능과 안심할 수 있는 작동을 위해 사용하기 전에 이 매뉴얼을 자세히 읽고, 궁금한 점이 있으면 본사의 판매 후 기술 지원 또는 현지 판매원에게 문의하십시오(부록 참조).
1. 제품 소개
CNBr Focurose 4FF는 브롬화 시안을 활성화한 후 시안산 에스테르 기단을 함유한 빠른 유속 순화 매체로 우연성 단백질, 폴리펩티드, 핵산 등 아미노가 함유된 생물 분자에게 적용된다.생물의약 순화 공정에서 반복적인 검증을 거쳐 광범위하게 응용되었다.
특징은 다음과 같습니다.
a. 광범위하게 활용,브롬화 수소 글리세린 겔우연성 암모니아를 함유한 생물류 대분자에 적용할 수 있다.
b. 다중점 우연으로 간단하고 유연하며 빠르고 효과적이며 생물 분자의 생물학적 활성과 안정성을 효율적으로 유지할 수 있다.
c. 유속이 빠르고 생산률이 높으며 확대하기 쉽다.
표 1: 미디어 성능 매개 변수
기질 |
높이 교련 4% 의 글리세린 |
입경 범위 |
45-165µm |
평균 입경 |
90µm |
결합 적재량 |
30mg(Trypsinogen)/ml(미디어) |
pH 안정성 |
3-11(장기) 2-11(단기) |
최대 유속 |
700cm/h |
작동 압력 |
≤0.3MPa |
저장 용액 |
100% 아세톤 |
저장 온도 |
4-8℃ |
2. 짝짓기 조건
a. (A액) 세척
적당량의 침강 접착제(0.83g 세척 완료 후 약 1.0ml)를 취하여 5배 부피의 A액으로 매체를 다시 매달고 5min 후 용액을 말린다.이 단계를 5회 반복합니다.
참고: 이 단계는 매체를 활성화하는 데 사용되며, A액의 세척 부피가 충분하고 세척 시간이 0.5h 정도로 고정되어야 합니다 (너무 오래 된 매체 위의 기단은 수해됩니다).
b. 배합 용액의 제조
짝짓기하려는 생물분자를 B액으로 용해하거나 생물분자를 B액으로 치환한다 (생물분자농도는 1-10mg/ml, 5mg/ml 권장).
참고: 짝짓기 시 pH 및 소금 농도가 B액과 일치하는지 확인합니다.
c. 짝짓기
세척된 매체와 준비된 시료를 같은 비율(부피비)로 섞어 실온 조건에서 3~4h 부드럽게 섞는다. 짝짓기 성공(짝짓기 전후 생물분자 함량 측정을 통한 짝짓기 효율 확인)을 확인한 뒤 용액을 말린다.
비고: 우연은 실온 조건에서 3-4h를 우연으로 하는 것이 좋습니다. 불안정한 배기의 경우 4-8℃ 우연으로 밤을 보내는 것이 좋습니다.
d. (C액) 세척
5배 부피의 C액으로 우연히 연결된 매체를 다시 매달아 용액을 말린다.이 단계를 세 번 더 반복합니다.
참고: 이 단계는 미디어에 남아 있는 생체 분자를 세척하는 데 사용되며, 세척은 *.
e. 폐쇄
5배 부피의 C액으로 중현하고 실온 조건에서 3~4시간 부드럽게 섞은 후 용액을 말린다.
참고: 이 단계는 실온 조건에서 3-4시간 동안 부드럽게 섞인 미디어 위의 기단을 닫는 데 사용됩니다.
f. (D액과 E액) 세척
5배 부피의 D액으로 폐쇄된 매체를 다시 매달아 5min 후 용액을 말린다.다시 5배 부피의 E액으로 매체를 다시 매달고 5min 후에 용액을 말린다.이 단계를 세 번 반복합니다.
참고: 이 단계는 산성 알칼리로 짝짓기가 긴밀하지 않은 생물 분자를 씻어내는 데 사용됩니다.
g. 저장
5배 부피의 순화수로 매체를 다시 매달아 말린 다음 5배 부피의 20% 에탄올로 매체를 다시 매달아 말린 다음 마지막으로 20% 에탄올로 담가 보관한다.
참고: 이 단계는 미생물이 자라지 않도록 매체를 보존하는 데 사용됩니다.
h. 용액 조제
A액: 0.001MHCl, 0.5M NaCl, 조절 pH 3.0, 4-8 ℃ 보존(A액 사용 전 예냉 처리).
B 액체: 0.2M NaHCO3, 0.5M NaCl, pH 8.3 조절 (우연적으로 연결하려는 생체 분자가 IgG인 경우pH=8.5-9.0),실온 보존.
C액: 0.1M Tris-HCl, 조절 pH 8.3, 실온 보존.
D액: 0.05M Tris-HCl, 0.5M NaCl, pH 8.5 조절, 실온 보존.
E액: O.05M GAN 아미노산, 0.5MNaCl, 조절 pH 3.5, 실온 보존.
F액: 1.0M NaCl, 실온 보존.
3. 세척
세척 후 일부 강한 결합성 물질 (예를 들어 일부 강한 결합성 단백질, 변성 단백질, 지방 등) 을 제거하여 매체의 우수한 성능 (예를 들어 적재량, 유동성, 주효 등) 을 회복할 수 있다.
5회 사용 후 1회 세척을 권장하며, 구체적인 세척 빈도는 순화된 초기 샘플의 청정도에 따라 조정해야 한다.
(1) 일반 세척
a. 기둥 부피의 5-10배 순화수로 씻는다.
b. 기둥 부피의 5-10배의 D액으로 씻는다.
c. 기둥 부피의 5-10배의 E액으로 씻는다.
d. 기둥 부피의 5-10배의 F액으로 씻는다.
e. 기둥 부피의 5-10배 순화수로 씻는다.
f. 기둥 부피의 5-10배 에탄올 20%를 씻어 보관한다.
⑨ 격렬한 세척
a. 2-5배 기둥부피 0.2% 비이온형 오염제거제로 씻은 후 즉시 5-10배 기둥부피 순화수로 씻는다.
b. 기둥 부피 2-5배 6M 염산구니딘으로 씻은 후 즉시 기둥 부피 5-10배 순화수로 씻는다.
c. 5-10배 기둥 부피의 20% 에탄올로 씻어 보관한다.
비고: 격렬한 세척조건의 적용여부는 주로 우연한 생물분자의 안정성에 의해 결정되는데 이 조건을 채용하여 세척하기전에 먼저 소규모의 예비실험을 하여 생물분자의 안정성을 검증할것을 건의한다.
4. 활용 사례
사례 1
사례 2
5. 자주 묻는 질문
표 2: FAQ 및 솔루션
문제 |
가능한 원인 |
솔루션 |
짝짓기 효율이 낮다 |
1. B 액염농도나 pH가 안 맞아요. |
B액 배합이 정확한지 검사하다 |
2. 짝짓기 시간 부족 |
짝짓기 시간 연장 |
|
3. 프리활성화 충전재 부적합 |
다른 종류의 예비 활성 충전재를 시도하다 |
|
|
순화 시 대상물이 매체와 결합되지 않음 또는 결합량이 낮음 |
1.이전 샘플 과부하 |
이전 샘플의 양을 낮추다. |
2. 이전 속도가 너무 빠르다 |
상위 스플라인 유속 감소 |
|
3. 단백질이나 지방류가 매체에 모인다 |
적시에 효과적으로 매체를 세척하다. |
|
4. 샘플을 저장하거나 샘플을 올리는 과정에서 비활성화 |
순화 대기 샘플을 정확하게 저장하여 샘플의 활성을 유지하다. |
|
5. 배합기와 목표물의 결합 비율이 비교적 낮다 |
짝짓기 농도를 높이려고 시도합니다 |
|
6. 배합은 짝짓기 또는 세척 과정에서 분해된다 |
짝짓기 또는 세척에서의 베이스 안정성 검사 |
|
|
세탁 시 목표물을 수집하지 못했습니다. 또는 소량의 목표물만 수집 |
1. 대상물이 매체와 결합되지 않았거나 결합량이 적다 |
스플라인 속도 감소 및 미디어 결합 확인 |
2. 세탁 조건이 부적합 |
상응하는 세척 조건을 변경하거나 세척액의 세척 능력을 강화하다 |
|
3. 대상물이 세척액 조건에서 집적 침전 |
대상물의 세척액 조건(소금 농도와 pH 등)에서의 안정성 측정 |
|
|
목표물의 순도가 비교적 낮다 |
1. 샘플은 전처리를 거치지 않았다 |
샘플은 기둥에 오르기 전에 반드시 원심 분리나 여과를 거쳐야 한다 |
2.샘플 점도가 너무 높음 |
밸런스액으로 적당히 시료를 희석하여 점도를 낮추다. |
|
3. 잡동사니 씻기 * |
베이스라인이 안정되고 밸런스 액체와 일치할 때까지 세척 부피를 늘립니다 |
|
4. 불순물 단백질이나 지방류가 매체에 모여 침전한다 |
적시에 효과적으로 매체를 세척하다. |
|
5.세탁 조건이 좋지 않다, 세탁 속도가 너무 빠르고 경도가 너무 가파르다. |
세탁 조건을 조정하다. |
|
6. 목표물에 강해가 나타난다 |
목표물의 안정성 검사 |
|
7. 원단 장전 효과가 좋지 않다 |
재장전 또는 구매 |
|
8. 불순물에 비특이성 흡착이 나타난다 |
적당히 첨가제를 선택하여 비특이성 흡착을 낮추다 |
|
9. 분리 기둥 상단에 큰 샘플링 볼륨이 있음 |
원통 재장착 또는 스플라인 볼륨 감소 |
|
10. 매체에서 미생물이 자란다 |
미디어를 사용한 후 미디어를 올바르게 저장하십시오. |
|
미디어 로드 감소 |
1. 이전 속도가 너무 빠르다 |
상위 스플라인 유속 감소 |
2. 단백질이나 지방류가 매체에 모여 적재량이 감소한다. |
제때에 매체를 세척하다. |
|
3. 사용 횟수가 너무 많아 배합기 탈락 |
새 미디어 다시 짝짓기 |
|
4.샘플은 저장하거나 샘플을 올리는 과정에서 활력을 잃어 배합기와 비교적 잘 결합할 수 없다 |
순화 대기 샘플을 정확하게 저장하여 샘플의 활성을 유지하다. |
|
크로마토그래피 피크 상승이 느리다 |
미디어 패딩 |
재장착기둥 |
크로마토그래피 피크 드래그 |
미디어 장전이 너무 느슨함 |
재장착기둥 |
기둥 침대에 금이 가거나 마르다 |
유출 또는 대체적 기포 도입 |
파이프라인에 누설이나 기포가 있는지 확인하고 기둥을 다시 설치하세요 |
|
액류 가 비교적 느리다 |
1. 단백질 또는 지방류 집합 |
매체나 여과막을 제때에 세척하다. |
2. 단백질은 매체에 침전된다 |
목표물의 안정성과 매체의 결합 효율을 유지하기 위해 평형액과 세척액의 성분을 조정하다 |
|
3. 기둥 속 미생물 생장 분리 |
사용한 시약은 반드시 여과와 탈기를 거쳐야 한다; 샘플은 기둥에 오르기 전에 반드시 원심 분리 또는 여과해야 한다 |
6. 주문 정보
표 3: 주문 정보 표
제품 |
사양 (ml) |
상품 번호 |
CNBr 포쿠로스 4FF |
25 |
HZ1001-2 |
CNBr 포쿠로스 4FF |
100 |
HZ1001-2 |
CNBr 포쿠로스 4FF |
500 |
HZ1001-2 |
CNBr 포쿠로스 4FF |
1000 |
HZ1001-2 |
비고: 대규격 포장 제품 또는 기타 제품 구매는 본사의 현지 판매 또는 판매 전 기술 지원에 문의하십시오.